【摘要】：背景:肺癌的免疫靶向治療,如檢查點抑制劑的應用,已經(jīng)使肺癌治療取得了里程碑式的進展。免疫檢查點抑制劑的抗瘤機理并非直接靶向消滅腫瘤細胞,而是通過去除T細胞上的抑制性通路,使得腫瘤特異性活化的T細胞重具活力,從而促使這類細胞充分發(fā)揮抗腫瘤作用。免疫檢查點抑制劑的治療策略在腫瘤中治療取得成功,也進一步證明了自然發(fā)生的腫瘤活化CD8+T細胞的存在,顯示了其潛在的強大抗腫瘤能力,同時也使這一類細胞成為廣泛研究的焦點。然而,目前為止,大多數(shù)對于腫瘤特異性活化T細胞的研究主要聚焦于腫瘤組織中,對這類細胞在循環(huán)血當中的研究非常有限。方法:采集83例肺癌患者及49例作為對照的健康人的外周血,將其外周血單個核細胞進行了八色流式分析,檢測CD137、PD-1在外周血CD8~+T細胞中表達的比例。同時檢測了CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)調節(jié)性T細胞在外周血CD4~+T細胞中的比例。在肺癌組當中分析淋巴細胞與各項臨床病理學特征之間的關系,并分析CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)調節(jié)性T細胞與抗原活化CD8~+T細胞之間的相關性。同時采集另兩例肺癌患者外周血進行CD8~+PD-1~+T細胞及CD8~+PD-1~-T細胞分選,對分選細胞進行RNA提取、反轉錄及TCR測序。結果:無論是治療前還是在治療過的肺癌患者中,外周血CD8~+T細胞當中PD-1~+T細胞以及CD137~+T細胞的比例均較健康人顯著升高,肺癌患者外周血CD137、PD-1雙陽的CD8~+T細胞也顯著高于健康人群,在老年肺癌患者當中尤為顯著。同時,肺癌組CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)調節(jié)性T細胞的比例不僅高于健康人群,而且CTLA-4~+CD4~+CD25~+CD127~(low/-)調節(jié)性T細胞在CD4~+CD25~+CD127~(low/-)調節(jié)性T細胞所占比例與抗原活化CD8~+T細胞在CD8~+T細胞中的比例呈較顯著的正相關。兩例患者TCR測序結果中,一例(小細胞肺癌,T1N1M0)的CD8~+PD-1~+T淋巴細胞較CD8~+PD-1~-T細胞出現(xiàn)了克隆多樣性降低和TCR克隆的集中。而另一例(腺癌,T1N0M0)則未檢測到上述現(xiàn)象。結論:我們的結果有助于為臨床上選擇免疫治療的優(yōu)勢治療人群提供更多線索;同時,腫瘤特異性活化CD8~+T淋巴細胞和效應性調節(jié)性T細胞的比例同步升高現(xiàn)象支持靶向抑制調節(jié)性T細胞的同時聯(lián)合激活腫瘤特異性活化T淋巴細胞如免疫檢查點抑制劑或腫瘤疫苗等的聯(lián)合治療策略。背景:CD8+T細胞是抗腫瘤免疫的主要效應細胞之一,CD137和PD-1均在抗原誘導時表達增高,其中CD137分子被認為是T細胞活化的標志,并且可作為識別腫瘤抗原特異性活化CD8+T淋巴細胞的特異性標識。CD137免疫激動的聯(lián)合治療模式在早期抗腫瘤臨床研究中顯示出較好的療效和前景。然而目前尚缺乏對于肺癌組織原位腫瘤微環(huán)境中CD137+腫瘤浸潤淋巴細胞的了解以及與臨床特征和預后的相關研究。方法:我們對118例肺腺癌患者臨床資料進行搜集整理,對患者生存進行了隨訪,對肺癌患者的組織樣本進行歸集篩選、進行組織微陣列芯片的制作、免疫多標熒光染色,分析腫瘤組織原位的腫瘤免疫微環(huán)境中CD8、CD137、PD-1、及伽馬干擾素、顆粒酶B的表達情況及其之間的關系,并進一步分析其與患者的臨床特征以及預后的相關性。結果:CD137絕大多數(shù)并不與CD8共表達,CD8+CD137+淋巴細胞數(shù)量非常稀少。CD137+腫瘤浸潤淋巴細胞相比CD8+PD-1+細胞顯著高表達IFN-γ及顆粒酶B。而CD8+PD-1+淋巴細胞與相對應的CD8+PD-1-淋巴細胞表達IFN-γ及顆粒酶B的水平無顯著差異。生存分析結果顯示基質區(qū)CD8+T細胞比例高者較比例低者無論是在全組肺腺癌還是在EGFR敏感突變人群中均顯示出較長的生存�；|區(qū)中淋巴細胞表達CD137、CD8、PD-1的比例與肺腺癌的性別、年齡、EGFR基因突變狀態(tài)、以及腫瘤分化程度無顯著關系,然而吸煙者較不吸煙者基質區(qū)CD8+TILs的比例更高(p=0.023),同時吸煙者較不吸煙者基質區(qū)CD137+淋巴細胞呈現(xiàn)比例更高的趨勢(p=0.053)。結論:對晚期肺腺癌患者腫瘤微環(huán)境中CD137+腫瘤浸潤淋巴細胞的原位分析有助于深入了解晚期肺腺癌腫瘤微環(huán)境CD137+淋巴細胞的特征,同時也為免疫治療中選擇具有治療優(yōu)勢的目標患者人群提供了更多線索。背景:小細胞肺癌惡性度高,疾病發(fā)展迅速,常在較早期階段出現(xiàn)血行轉移。而目前為止小細胞肺癌的治療尚無顯著性進展。對該疾病的進一步深入探究非常迫切。對于小細胞肺癌治療過程中基因亞克隆結構以及基因組演化的了解將有助于對該疾病發(fā)生發(fā)展深入了解。然而小細胞肺癌足夠的腫瘤組織樣本常難以獲得,尤其是動態(tài)的腫瘤組織樣本。作為一種具有早期出現(xiàn)遠處轉移特點的惡性腫瘤,通過循環(huán)血腫瘤DNA(ctDNA)測序來進行小細胞肺癌基因組分析將可能成為研究其相關基因構成及動態(tài)演變的潛在的有力手段。方法:在本研究中,我們對22例小細胞肺癌治療前的ctDNA及配對的腫瘤組織DNA進行430個腫瘤基因的目標基因測序。同時還對部分小細胞肺癌患者在治療的不同時期的血樣進行了ctDNA動態(tài)檢測分析,并分析其與臨床特征及生存的相關性。結果:分析結果發(fā)現(xiàn)治療前的小細胞肺癌ctDNA和配對的腫瘤組織DNA有相似的亞克隆結構。治療前ctDNA克隆突變的平均等位基因突變頻率(VAF)與患者的一線無進展生存時間以及總生存時間相關。對治療前、后的ctDNA突變分析顯示在治療后的樣本中出現(xiàn)了更多的與DNA修復和NOTCH信號通路有關的突變。結論:通過ctDNA測序這種檢測體細胞突變的可靠手段,能夠從較為獨特和深入的視角有效描繪小細胞肺癌基因組景觀、亞克隆構成和和治療過程中的基因演變。為深層次了解小細胞肺癌提供了新的途徑,也為小細胞肺癌預后提供了新的生物標記物選擇。
【學位授予單位】：北京市結核病胸部腫瘤研究所
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2
【圖文】：

圖 1 圖中所示分別為一例肺癌患者（上半圖）和健康人（下半圖）流式分選腫瘤活化 CD8+T淋巴細胞過程。分析前去除黏連細胞及死細胞；圈選 CD3+T 淋巴細胞；分別圈選 CD8+T 細胞、CD4+T 細胞的門并排除其余細胞；針對 CD8+T 淋巴細胞當中表達 CD137 陽性的、以及表達 PD-1陽性的分別圈門。

圖中所示為對于效應性調節(jié)性T細胞進行圈門

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本文編號：2715997