【摘要】：第一部分:POU5F1B通過激活A(yù)KT促進(jìn)肝細(xì)胞癌的增殖目的:檢測(cè)POU5F1B在肝細(xì)胞癌(HCC)中的表達(dá),并探究其在促進(jìn)肝細(xì)胞癌增殖過程中的調(diào)控機(jī)制。方法:使用TCGA數(shù)據(jù)庫來分析POU5F1B與肝細(xì)胞癌的發(fā)展的相關(guān)性。通過MTT實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、Brd U摻入法實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn),檢測(cè)POU5F1B的過表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞的增殖影響及其對(duì)AKT的的調(diào)控。收集貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院的肝細(xì)胞癌患者及正常的肝組織,通過蛋白質(zhì)印跡法及實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)組織中POU5F1B的表達(dá)水平與Cyclin D1、p21和p27的表達(dá)水平,及AKT磷酸化水平的相關(guān)性。結(jié)果:TCGA數(shù)據(jù)庫分析顯示POU5F1B在肝癌細(xì)胞和組織中表達(dá)明顯的上調(diào),高表達(dá)POU5F1B的肝癌患者的總生存時(shí)間明顯低于低表達(dá)POU5F1B的肝癌患者。MTT實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、Brd U摻入法實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示POU5F1B的過表達(dá)可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖,而敲低POU5F1B會(huì)抑制肝癌細(xì)胞的增殖。且POU5F1B可以激活A(yù)KT,在肝癌細(xì)胞中過表達(dá)POU5F1B的情況下抑制AKT,相比于單純過表達(dá)POU5F1B的細(xì)胞,可以明顯抑制肝癌細(xì)胞的增殖,說明POU5F1B是通過激活A(yù)KT促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖。在獲取的肝癌組織樣本中檢測(cè)發(fā)現(xiàn),POU5F1B的表達(dá)水平與Cyclin D1的表達(dá)水平呈正相關(guān),而與p21和p27的表達(dá)水平及AKT磷酸化水平呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論P(yáng)OU5F1B通過激活A(yù)KT促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖,可以為肝細(xì)胞癌的治療提供新的靶點(diǎn)。第二部分:miR-660通過抑制PPP2R2A促進(jìn)肝細(xì)胞癌的增殖目的:檢測(cè)miR-660在肝細(xì)胞癌(HCC)中的表達(dá),并探究其在促進(jìn)肝細(xì)胞癌增殖過程中的調(diào)控機(jī)制。方法:使用TCGA數(shù)據(jù)庫來分析miR-660與肝細(xì)胞癌的發(fā)展的相關(guān)性。通過實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了miR-660在多種肝癌細(xì)胞及組織中的表達(dá)。通過MTT實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、Brd U摻入法實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn),檢測(cè)miR-660的過表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響及對(duì)PPP2A2R的調(diào)控。通過螢光素酶報(bào)告基因測(cè)定,實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)miR-660對(duì)PPP2A2R的調(diào)控。通過實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-660與CCND1和p21表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果:TCGA數(shù)據(jù)庫分析顯示miR-660在肝癌細(xì)胞和組織中表達(dá)明顯上調(diào)。實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)miR-660在多株肝癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。MTT實(shí)驗(yàn)、軟瓊脂生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、Brd U摻入法實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示miR-660的過表達(dá)可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖,而敲低miR-660敲低會(huì)抑制肝癌細(xì)胞的增殖,且miR-660可以抑制PPP2R2A的水平,熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到miR-660與PPP2R2A的3’-UTR直接結(jié)合。實(shí)時(shí)熒光PCR實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示miR-660抑制p21表達(dá)并促進(jìn)CCND1表達(dá)。通過軟瓊脂生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)和Brd U摻入法實(shí)驗(yàn)證明敲低miR-660后同時(shí)敲低PPP2R2A可以促進(jìn)Hep G2增殖。結(jié)論:miR-660可通過靶向PPP2R2A促進(jìn)肝癌的增殖,可能成為肝癌治療的新靶點(diǎn)。
【圖文】：

圖 1.人類 OCT4 基因的結(jié)構(gòu)圖[87]Oct4 在早期胚胎中的表達(dá)母鼠體內(nèi)，保存在卵母細(xì)胞中的 Oct-4 mRNA 和蛋白質(zhì)（352a.a.）是由合子遺并且是發(fā)育至 4 細(xì)胞期所必需的。蛋白質(zhì)在小鼠胚胎發(fā)生的這些早期階段以低水平在。合子 Pou5f1 基因的轉(zhuǎn)錄在 4 至 8 個(gè)細(xì)胞階段被激活。因此，在桑椹胚期前，有卵裂球中都可以檢測(cè)到高水平表達(dá)的 Oct-4 蛋白。在胚泡形成后，，Oct4 的表達(dá)在細(xì)胞團(tuán)（Inner Cell Mass，ICM）中保持高水平，并且不在滋養(yǎng)外胚層（ TrophectodermTE）中表達(dá)。在植入小鼠胚胎后，在一組 ICM 細(xì)胞中瞬時(shí)上調(diào) Oct4 觸發(fā)它們分化原始內(nèi)胚層（hypoblast）細(xì)胞。隨后，Oct4 表達(dá)在這些細(xì)胞中下調(diào)[23-25]。在原腸胚成期間，Oct4 被下調(diào)，在懷孕第 8 天后，它被限制在原始生殖細(xì)胞中[24,26,27]。在體外Oct4 在未分化的胚胎干細(xì)胞（Embryonic Stem Cell，ECS）、胚胎癌細(xì)胞（ EmbryoCarcinoma，EC）和胚胎生殖細(xì)胞中高度表達(dá)。在白血病抑制因子（LIF）戒斷或視

miR-660 通過抑制 PPP2R2A 促進(jìn)肝細(xì)胞癌的增值 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果U5F1B 的高表達(dá)意味著肝癌患者的不良預(yù)后示 POU5F1B 在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程所扮演的角色，我來分析 POU5F1B 在肝癌組織中和正常肝組織中的表達(dá)水354 例腫瘤組織進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果提示 POU5F1B 在肝細(xì)胞癌圖 2)。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Miriam J Alter;;Epidemiology of hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2007年17期

2 ;Stem cell pluripotency and transcription factor Oct4[J];Cell Research;2002年Z2期

本文編號(hào)：2710047