【摘要】：目的:本研究首先探討了M2型腫瘤相關(guān)巨噬細胞(M2型TAMs)浸潤與食管癌患者預后的相關(guān)性,并分析食管癌組織中M2型TAMs浸潤的臨床病理學意義。其次,通過構(gòu)建M2型TAMs與食管癌細胞的體外共培養(yǎng)體系,探討共培養(yǎng)對食管癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)及細胞增殖、遷移、侵襲能力的影響。最后,收集共培養(yǎng)上清,運用抗體芯片篩選共培養(yǎng)后差異表達的蛋白因子,研究M2型TAMs分泌的蛋白因子對食管癌細胞EMT及遷移、侵襲能力的影響,初步探討M2型TAMs參與調(diào)控食管癌細胞惡性表型的相關(guān)分子機制。方法:1)Meta分析食管癌組織中M2型TAMs浸潤的臨床病理學意義;通過免疫組化(Immuno histo chemical,IHC)染色檢測食管癌組織中M2型TAMs的浸潤,分析M2型TAMs浸潤與患者預后的相關(guān)性及M2型TAMs浸潤的臨床病理學意義;2)構(gòu)建M2型TAMs與食管癌細胞共培養(yǎng)體系,觀察共培養(yǎng)后食管癌細胞的形態(tài)學改變,運用q RT-PCR和Western-blot檢測共培養(yǎng)后食管癌細胞EMT相關(guān)標志物的表達,通過細胞增殖試驗(MTT Assay)、細胞遷移試驗(Wound-healing Assay)、細胞侵襲試驗(Transwell Assay)檢測共培養(yǎng)對食管癌細胞增殖、遷移、侵襲能力的影響;3)抗體芯片篩選共培養(yǎng)后差異表達的蛋白因子,觀察M2型TAMs所分泌的蛋白因子誘導對食管癌細胞形態(tài)學改變的影響,運用qRT-PCR和Western-blot檢測蛋白因子誘導后食管癌細胞EMT相關(guān)標志物的表達,通過MTT試驗、Wound-healing試驗、Transwell試驗分別檢測蛋白因子誘導對食管癌細胞增殖、遷移、侵襲能力的影響,初步探討M2型TAMs參與調(diào)控食管癌細胞惡性表型的相關(guān)分子機制。結(jié)果:1)Meta分析結(jié)果表明,M2型TAMs浸潤與食管癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及T分期具有統(tǒng)計學相關(guān)性。免疫染色結(jié)果表明,食管癌及癌旁對照組織中均可見M2型TAMs浸潤,M2型TAMs在食管癌中浸潤密度明顯高于癌旁組織,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。臨床病理學分析表明,M2型TAMs浸潤與食管癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.018)和T分期(P=0.021)具有統(tǒng)計學相關(guān)性(P0.05),與患者年齡(P=0.862)、性別(P=0.249)、臨床分期(P=0.563)、腫瘤直徑(P=0.898)無統(tǒng)計學相關(guān)性(P0.05);Kaplan-Meier(K-M)生存曲線分析表明,M2型TAMs浸潤與食管癌患者預后呈現(xiàn)出負相關(guān)的趨勢(P=0.000);2)食管癌細胞與M2型TAMs共培養(yǎng)后發(fā)生形態(tài)學改變,qRT-PCR和Western-blot結(jié)果表明,共培養(yǎng)后食管癌細胞上皮標志物表達減少,而間質(zhì)標志物表達增加。細胞功能學試驗結(jié)果表明,共培養(yǎng)后食管癌細胞遷移、侵襲能力增強,而細胞增殖能力無明顯改變;3)抗體芯片結(jié)果表明,M2型TAMs與食管癌細胞共培養(yǎng)后,IL-1β(上調(diào)829.43倍)和MCP2(上調(diào)808.41倍)表達明顯增加,與非共培養(yǎng)組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。IL-1β和MCP2誘導后,食管癌細胞發(fā)生EMT,細胞遷移、侵襲能力明顯增強,但IL-1β誘導后食管癌細胞增殖能力無明顯改變。此外,Western-blot結(jié)果表明,IL-1β和MCP2誘導可激活NF-κB信號通路,使用NF-κB通路抑制劑(BAY11-7082)則可減弱NF-κB信號通路的磷酸化水平。結(jié)論:1)M2型TAMs在食管癌組織中的浸潤密度明顯高于癌旁對照組織,M2型TAMs浸潤與患者預后及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期具有統(tǒng)計學相關(guān)性;2)M2型TAMs與食管癌細胞共培養(yǎng),可引起食管癌細胞發(fā)生EMT,增強食管癌細胞的遷移和侵襲能力;3)M2型TAMs分泌的IL-1β和MCP2,可引起食管癌細胞發(fā)生EMT,增強食管癌細胞的遷移和侵襲能力。M2型TAMs分泌的IL-1β和MCP2有可能通過激活NF-κB信號通路參與調(diào)控食管癌細胞的惡性表型。
【圖文】：

侵襲、轉(zhuǎn)移過程中起著重要的促進作用。腫瘤微環(huán)境中浸潤的巨噬細胞源自循環(huán)中的單核細胞，在不同微環(huán)境因素刺激下，，巨噬細胞可分化為不同的表型，一般來說，巨噬細胞極化為經(jīng)典激活型（M1型）和選擇激活型（M2型）（圖1）[39]。當巨噬細胞被脂多糖（LPS）和干擾素-γ（IFN-γ）等刺激物激活時，巨噬細胞極化為M1表型，M1型巨噬細胞產(chǎn)生I型促炎細胞因子、激活免疫反應，保護宿主免受病毒和微生物感染的威脅。同時，M1型巨噬細胞具有細胞毒作用，并可增強抗原提呈能力，因而具有促炎、抗腫瘤的作用[40]。而另一方面，當免疫系統(tǒng)對寄生蟲和過敏原作出反應時，Th2型細胞常產(chǎn)生細胞因子如白細胞介素-4（IL-4）和IL-13。Th2型細胞產(chǎn)生的細胞因子可刺激巨噬細胞極化為M2表型（選擇激活型）

上海芯超生物科技有限公司申明，食管癌組織芯片（HEso-Squ180Sur-02）所用的全部臨床病理組織學標本均取得了臨床患者的知情同意，并一致通過了醫(yī)學倫理委員會的批準。組織芯片中食管癌組織及配對的癌旁組織點陣排列如圖1所示（食管癌-淺灰藍色點，對照組織-淺綠色點，定位點-深藍色點K1）。組織芯片中食管癌組織及配對的癌旁組織排列示意圖（圖1）所示（淺灰藍色的點為食管癌組織，淺綠色的點為對照的癌旁組織，左下方深藍色點K1作為定位點）。圖 1 組織芯片（HEso-Squ180Sur-02）排布示意圖Figure 1 Abridge general view of tissue microarray另從新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院病理科調(diào)取2007-2010年手術(shù)切除的食管癌組
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.1

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本文編號：2704150