【摘要】：目的:探討人婆羅雙樹(shù)樣基因4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)在胃癌轉(zhuǎn)移和胃癌細(xì)胞EMT中的作用及機(jī)制,為闡明SALL4促胃癌轉(zhuǎn)移作用提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù),并為胃癌分子診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。方法:分別采用慢病毒介導(dǎo)SALL4干擾shRNA和SALL4過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞MGC803和HGC27,采用qRT-PCR驗(yàn)證SALL4基因敲減和過(guò)表達(dá)效率。采用平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,采用劃痕實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力,采用Transwell遷移和Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞遷移以及侵襲能力,采用q RT-PCR和Western blot檢測(cè)胃癌細(xì)胞中EMT相關(guān)基因和蛋白表達(dá)。通過(guò)基因芯片篩選和qRT-PCR檢測(cè)SALL4敲減后MGC-803細(xì)胞TGF-β1基因表達(dá)變化。在過(guò)表達(dá)SALL4同時(shí)采用siRNA干擾TGF-β1,闡明TGF-β1在SALL4促胃癌轉(zhuǎn)移和EMT中的作用。結(jié)果:慢病毒介導(dǎo)shRNA轉(zhuǎn)染MGC-803細(xì)胞后,qRT-PCR和western blot結(jié)果顯示SALL4表達(dá)降低。平板克隆實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)胞增殖和運(yùn)動(dòng)能力下降,Transwell遷移和Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)胞遷移和侵襲能力下降。qRT-PCR和western blot結(jié)果表明E-cadherin基因和蛋白表達(dá)升高,N-cadherin、vimentin、slug和twist基因和蛋白表達(dá)下降。相反,SALL4過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HGC-27細(xì)胞后,SALL4表達(dá)升高,細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲能力增強(qiáng),E-cadherin基因和蛋白表達(dá)下降,N-cadherin、vimentin、slug和twist基因和蛋白表達(dá)上升。SALL4基因敲減導(dǎo)致TGF-β1基因表達(dá)下調(diào),并得到Western blot結(jié)果證實(shí)。SALL4基因敲減抑制而SALL4過(guò)表達(dá)促進(jìn)SMAD2/3磷酸化。干擾TGF-β1基因表達(dá)導(dǎo)致SALL4促胃癌細(xì)胞遷移和侵襲以及EMT發(fā)生能力明顯下降。結(jié)論:SALL4通過(guò)激活TGF-β/SMAD信號(hào)通路,誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT,促進(jìn)其轉(zhuǎn)移能力。SALL4調(diào)控TGF-β1是其在胃癌中發(fā)揮促轉(zhuǎn)移作用的新機(jī)制。
【圖文】：

SALL4 調(diào)控 TGF-β 促胃癌轉(zhuǎn)移作用和機(jī)制研究果A 干擾 SALL4 表達(dá)效率檢測(cè)毒介導(dǎo)的 shRNA 干擾 MGC-803 細(xì)胞中 SALL4 表達(dá)。慢微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，，sh-Ctrl 與 sh-SALL4 敲減組都能觀察到很染效率較高（圖 3.1A)。qRT-PCR 結(jié)果表明，與 sh-Ctrl 相比，sRNA 表達(dá)顯著下降，為對(duì)照組的 43%(圖 3.1B)。Western bl照組相比，干擾組 SALL4 蛋白表達(dá)顯著降低（圖 3.1C）介導(dǎo) shRNA 轉(zhuǎn)染顯著抑制 MGC-803 細(xì)胞中 SALL4 表達(dá)

圖 3.2 干擾 SALL4 表達(dá)抑制 MGC-803 細(xì)胞體外增殖能力Fig 3.2 SALL4 knockdown inhibits the proliferation of MGC-803 cellsSALL4 敲減對(duì) MGC-803 細(xì)胞遷移能力的影響過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)和 Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè) SALL4 基因敲減后 MGC-80遷移能力變化。結(jié)果表明，與空白組以及 sh-Ctrl 組相比，sh-SAL-803 細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力明顯降低（圖 3.3A)。在 Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)中，與空白組以及 sh-Ctrl 組相比，sh-SALL4 組在相同時(shí)間內(nèi)遷移到胞數(shù)量減少（圖 3.3B)。表明干擾 SALL4 表達(dá)后，MGC-803 細(xì)胞力顯著降低。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2693220