【摘要】：目的:研究HClO對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響;探究GPx1-Si RNA對(duì)MCF-7細(xì)胞生存的影響。方法:用不同濃度的HClO干預(yù)乳腺癌MCF-7細(xì)胞,通過MTT法檢測(cè)HClO對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的影響;采用吉姆薩染色法觀察HClO對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞造成的形態(tài)學(xué)變化和凋亡情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HClO對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的影響;活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平;PI/RNase檢測(cè)HClO對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞周期的影響。特異性針對(duì)谷胱甘肽過氧化物酶1(GPx1)基因的GPx1-Si RNA轉(zhuǎn)入MCF-7細(xì)胞中,采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)GPx1 m RNA的表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)GPx1的表達(dá)量;DCFH-DA檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平的變化;Annexin V-FITC/7-AAD檢測(cè)干擾GPx1基因后乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的影響,減弱GPx1基因的表達(dá)水平后,添加不同濃度的類活性氧HClO,檢測(cè)其凋亡率。結(jié)果:1.MTT法檢測(cè)顯示HClO對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖有抑制作用,且抑制作用隨著處理藥物濃度的增加而增強(qiáng);2.HClO處理MCF-7后,采用吉姆薩染色法,通過倒置顯微鏡可以觀察到凋亡細(xì)胞的形態(tài),如:細(xì)胞皺縮、細(xì)胞核邊緣化等,隨著HClO濃度增加凋亡細(xì)胞數(shù)也隨之增加;3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著HClO濃度的增加MCF-7細(xì)胞的凋亡率逐漸增高,不同濃度HClO作用于MCF-7細(xì)胞10min后繼續(xù)培養(yǎng)12h,其結(jié)果顯示HClO呈濃度依賴性地誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的凋亡;4.活性氧檢測(cè)結(jié)果,HClO能夠引起MCF-7細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的升高,且MCF-7細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平隨著HClO濃度的增加而增加;5.細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示,HClO濃度高于100μM時(shí),細(xì)胞周期明顯被抑制;6.GPx1-Si RNA轉(zhuǎn)入乳腺癌MCF-7細(xì)胞,GPx1 m RNA的表達(dá)水平明顯下調(diào),GPx1的蛋白表達(dá)量有明顯的下降(P0.05);7.GPx1-Si RNA對(duì)MCF-7細(xì)胞內(nèi)ROS水平?jīng)]有明顯的影響,GPx1-Si RNA+(HClO)組促增細(xì)胞內(nèi)ROS水平強(qiáng)度明顯高于HClO干預(yù)組;8.與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比GPx1-Si RNA組的凋亡率無明顯的變化;9.GPx1-Si RNA+(HClO)組促凋亡率高于HClO干預(yù)組。結(jié)論:HClO處理MCF-7細(xì)胞后,MCF-7細(xì)胞的增殖被抑制,且存活率與藥物濃度成反比關(guān)系;HClO作用于MCF-7細(xì)胞,主要以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡為主。GPx1-Si RNA特異性干擾GPx1后,MCF-7細(xì)胞內(nèi)GPx1的m RNA表達(dá)量明顯下調(diào)。GPx1表達(dá)量下調(diào),對(duì)MCF-7細(xì)胞的活性影響甚微,但可以增強(qiáng)MCF-7細(xì)胞對(duì)活性氧的敏感性。
【圖文】：

圖 1 不同濃度 HClO 對(duì) MCF-7 細(xì)胞增殖率的影響（*P<0.05）表 1 不同濃度 HClO 對(duì) MCF-7 細(xì)胞增殖率的影響（x±s，n=3）HClO 濃度（μM） 細(xì)胞增值率（%） P對(duì)照組 100±5.550.0050 96.09±6.84100 86.58±6.14*200 79.04±8.71*400 56.33±7.03*800 29.04±6.55**與對(duì)照組相比，P<0.05。吉姆薩染色觀察 HClO 處理 MCF-7 細(xì)胞前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變情況

第 2 章 次氯酸對(duì)乳腺癌 MCF-7 細(xì)胞的殺傷機(jī)制研究學(xué)的變化逐漸變得較顯著，尤其在 400μM、800μM 時(shí)出現(xiàn)了細(xì)胞膜完整性的喪失、胞核碎裂、細(xì)胞器變形等壞死現(xiàn)象。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 葉青;李文輝;趙璽龍;;自噬在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的機(jī)制和研究進(jìn)展[J];西南國(guó)防醫(yī)藥;2014年06期

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1 易波;ROS/AMPK介導(dǎo)的凋亡通路在川芎嗪抗胃癌作用中的機(jī)制研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

2 王洋;三氧化二砷對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞毒效應(yīng)及分子機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2012年

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1 易健;ROS和PI3K/Akt信號(hào)通路在H.pylori對(duì)胃上皮細(xì)胞DNA損傷中的作用[D];南昌大學(xué);2014年

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3 陳輝;PI3K/Akt信號(hào)通路在H_2O_2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡中的作用[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

4 雷建軍;活性氧對(duì)細(xì)胞永生化的影響及劑量效應(yīng)關(guān)系的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

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本文編號(hào)：2689221