【摘要】：目的:研究胰腺癌在侵襲與轉(zhuǎn)移的過程miR-301a起到的作用及具體機制。方法:1.應用TCGA數(shù)據(jù)庫驗證miR-301a表達水平與胰腺癌TNM分期及發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的相關性;2.收集來自胰腺癌患者和正常對照血獎標本,并且通過qRT-PCR檢測miR-301a的相對表達量;收集并檢測胰腺癌患者腫瘤組織和癌旁組織標本中miR-301a的相對表達差異;3.應用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術將miR-301a的mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染至胰腺癌細胞,通過Transwell侵襲遷移實驗、劃痕實驗以及小管形成實驗檢測胰腺癌細胞系侵襲轉(zhuǎn)移能力是否改變;4.用bioinformatics軟件Miranda、PicTar、TargetScan等預測miR-301a的靶基因,通過KEGG信號通路分析,以探索miR-301a的靶基因的潛在信號通路,并用雙熒光素酶報告基因技術驗證miR-301a直接靶向SOCS5;5.將SOCS5 siRNA或SOCS5過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到胰腺癌細胞PANC1,并檢測SOCS5敲低或過表達后胰腺癌細胞PANC1侵襲轉(zhuǎn)移及小管形成的能力;6.利用western blot技術檢測miR-301a mimic或inhibitor轉(zhuǎn)染后,胰腺癌細胞中miR-301a的靶基因SOCS5及下游JAK-STAT3信號通路相關蛋白的表達情況。7.利用siRNA基因干擾技術或過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術將SOCS5 si RNA或SOCS5過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到胰腺癌細胞并檢測SOCS5經(jīng)敲低或過表達后胰腺癌細胞系miR-301a的靶基因SOCS5及下游JAK-STAT3信號通路相關蛋白的表達情況;結(jié)果:1.miR-301a與胰腺癌臨床分期和胰腺癌遠處轉(zhuǎn)移相關;2.miR-301a在胰腺癌組織中的表達高于癌旁組織,miR-301a在胰腺癌血漿中的表達明顯高于正常對照血漿,miR-301a在胰腺癌遠處轉(zhuǎn)移患者血漿中的表達顯著高于未遠處轉(zhuǎn)移組,對比術前,在胰腺癌患者術后血漿中miR-301a表達量下降。3.在胰腺癌細胞系中高表達miR-301a,促進胰腺癌細胞遷移和侵襲以及小管形成能力;4.在胰腺癌細胞系中抑制miR-301a的表達,抑制胰腺癌細胞遷移和侵襲以及小管形成能力;5.生物信息學軟件軟件預測SOCS5是miR-301a潛在的靶向基因之一,報告基因技術證實miR-301a直接靶向SOCS5 3’UTR;6.抑制SOCS5能對胰腺癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移和小管形成發(fā)揮促進作用,而SOCS5過表達直接抑制這些效應,主要機制通過抑制JAK-STAT3信號通路,間接下調(diào)MMP9、VEGF蛋白分子,而且上調(diào)E-cadherin蛋白分子。結(jié)論:胰腺癌患者miR-301a表達升高,并通過mi R-301a SOCS5 JAK-STAT3這個信號通路促進胰腺癌轉(zhuǎn)移的形成。
【圖文】：

果-301a 在胰腺癌中表達升高 miR-301a 在胰腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移過程如何發(fā)揮作用,我們癌組織和癌旁組織樣本和 5 例胰腺癌患者的血漿 miR-A，B）。miR-301a 在上述標本中上調(diào)，胰腺癌患者血漿中胰腺癌組織一致。其次，我們通過對 63 例胰腺癌患 檢測 miR-301a 的含量，并觀察患者血漿中 miR-301a，P<0.001)。另外，，我們收集了十例胰腺癌患者術前術后 miR-301a 的相對表達量（圖 1D）。我們將 miR-301a 臨界值，將 63 例患者分為 miR-301a 表達量高、低兩組a 表達與 TNM 分期顯著相關(P=0.0169)，但與患者年齡

20 例 IV 期胰腺癌患者(圖 2 B)。此外，Ka miR-301a 的患者預后與低表達 miR-301a 的胰2C)。定量 PCR 分析，檢測胰腺癌細胞系 miR-301 系 (PANC-1, BXPC-3, Aspc-1, Mia-Paca-2, 明顯高于胰腺上皮細胞系 H6C7(圖 2D)， m皮細胞系 H6C7。接下來，我們將 miR-301a9-9 (CA19-9)水平進行比較，以檢測對胰腺癌1a 的 ROC 曲線曲線下面積為 0.724，高于 CA，這些數(shù)據(jù)支持 miR-301a 表達在胰腺癌患者可以作為診斷和預后的生物標志物。
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R735.9

【參考文獻】

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1 Amit Mahipal;Jessica Frakes;Sarah Hoffe;Richard Kim;;Management of borderline resectable pancreatic cancer[J];World Journal of Gastrointestinal Oncology;2015年10期

本文編號：2673344