發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 17:32

【摘要】：目的研究乳腺癌中4-氨基丁酸氨基轉(zhuǎn)移酶(4-aminobutyrate aminotransferase,ABAT)的表達(dá)并分析其表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系;分析ABAT的表達(dá)水平與Estroten Receptor(ER)的表達(dá)水平是否具有相關(guān)性,并進(jìn)一步研究ABAT的表達(dá)水平對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移和增殖能力的影響,以及初步探討ABAT影響乳腺癌患者預(yù)后的作用機(jī)制。方法通過基因表達(dá)譜的乳腺癌患者預(yù)后在線預(yù)測(cè)網(wǎng)站(Gene expression-based Outcome for breast cancer Online,GOBO)數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)ABAT與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系,并采用免疫組化分析乳腺癌組織中ABAT和ER表達(dá)水平,采用SPSS軟件行卡方檢驗(yàn)進(jìn)行ABAT和ER表達(dá)之間相關(guān)性的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以及通過繪制Kaplan-Meier生存曲線和行l(wèi)og-rank檢驗(yàn)來分析ABAT的表達(dá)水平對(duì)ER陽性乳腺癌患者的預(yù)后作用。根據(jù)ER的表達(dá)水平,我們選擇ER陽性的MCF 7乳腺癌細(xì)胞系和ER陰性的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系作為本實(shí)驗(yàn)研究模型。采用Western Blotting檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞中ABAT和ER蛋白表達(dá)水平。ABAT干擾質(zhì)粒(ABAT siRNA)由銳博生物(中國(guó)廣州)化學(xué)合成。ABAT過表達(dá)質(zhì)粒由我們課題組成功構(gòu)建。用慢病毒感染的方法將ABAT過表達(dá)的病毒感染MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞系,然后用Western-blot分別驗(yàn)證ABAT是否成功的表達(dá)下調(diào)或上調(diào)。我們采用MTT細(xì)胞增殖和Transwell小室細(xì)胞遷移等體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)來觀察ABAT的表達(dá)水平的改變是否對(duì)乳腺癌細(xì)胞的遷移和增殖產(chǎn)生影響。為了進(jìn)一步驗(yàn)證體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,我們通過構(gòu)建免疫缺陷小鼠成瘤實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果1、在線數(shù)據(jù)庫GOBO數(shù)據(jù)庫的預(yù)測(cè)結(jié)果為ABAT的表達(dá)水平與乳腺癌預(yù)后相關(guān)。我們通過對(duì)乳腺癌組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,結(jié)果顯示ER陽性的乳腺癌樣本中,ABAT高表達(dá),ER陰性的乳腺癌樣本中,ABAT低表達(dá)。即ABAT的表達(dá)水平與ER的表達(dá)水平呈正相關(guān)(P0.05)。Kaplan-Meier曲線結(jié)果顯示:在ER陽性的乳腺癌患者中,ABAT低表達(dá)患者與ABAT高表達(dá)患者相比有較低的無病生存率(P=0.001)和總生存率較低(P=0.002)。ABAT高表達(dá)是乳腺癌患者預(yù)后良好的指標(biāo)之一。2、體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)也同樣證實(shí)ABAT在ER陽性的MCF 7乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá),在ER陰性的MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞系中低表達(dá)。3、MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在MCF 7乳腺癌細(xì)胞中,將ABAT干擾后,ABAT降表達(dá)組與對(duì)照組相比,細(xì)胞的增殖能力增高;在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中,將ABAT過表達(dá)后,ABAT過表達(dá)組與對(duì)照組相比,細(xì)胞的增殖能力降低。Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中ABAT過表達(dá)組穿過基質(zhì)膜的能力增強(qiáng)。4、裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示注射穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ABAT過表達(dá)的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞組和對(duì)照組相比,小鼠腫瘤的生長(zhǎng)能力降低。免疫組化結(jié)果顯示在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中,ABAT蛋白過表達(dá)組與對(duì)照組相比,ABAT的表達(dá)水平上升,Ki67蛋白和EGFR蛋白的表達(dá)水平都降低。5、ER陽性的乳腺癌細(xì)胞系中,ABAT蛋白的表達(dá)下調(diào)會(huì)降低內(nèi)分泌治療的敏感性。結(jié)論在乳腺癌中ABAT蛋白的表達(dá)水平與ER的表達(dá)水平呈正相關(guān),在ER陽性的乳腺癌組織中高表達(dá),在ER陰性的乳腺癌組織中低表達(dá)。ER陽性的乳腺癌組織中高表達(dá)ABAT蛋白或許是預(yù)后良好的指標(biāo)之一。ABAT蛋白的表達(dá)上調(diào)可以抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和增殖能力。ABAT蛋白的表達(dá)下調(diào)可能會(huì)引起ER陽性乳腺癌患者的內(nèi)分泌耐藥。ABAT蛋白是否可做為ER陽性乳腺癌新的治療靶點(diǎn)還有待進(jìn)一步研究。
【圖文】：

圖 1. GOBO 數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)結(jié)果同分子分型（基因檢測(cè)的方法）乳腺癌組織中 ABAT 表達(dá)情況；B）不同分子M50 分類）乳腺癌組織中 ABAT 表達(dá)情況；C）不同 ER 狀態(tài)乳腺癌組織中 AB況；D）不同組織學(xué)分級(jí)乳腺癌組織中 ABAT 表達(dá)情況2 ABAT 高表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后呈正相關(guān)我們通過在線 GOBO 數(shù)據(jù)庫來預(yù)測(cè) ABAT 蛋白的表達(dá)是否會(huì)影響乳腺預(yù)后，GOBO 預(yù)測(cè)顯示，在總體人群中 ABAT 高表達(dá)的乳腺癌患者有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存活率（Distant metastasis-free survival, DMFS）（P=9e-05，圖未行他莫西芬治療的患者而言同樣是高表達(dá) ABAT 蛋白的乳腺癌患者 DMFS（P=0.03972，圖 1F），對(duì)于行他莫西芬治療的乳腺癌患者而言 DMFS 高表達(dá)的患者有較高的 DMFS （P=0.03972，圖 1G）。這說明者無論是否進(jìn)行他莫西芬治療，高表達(dá) ABAT 蛋白的患者預(yù)后要明顯T 低表達(dá)的乳腺癌患者，這提示 ABAT 蛋白的高表達(dá)是乳腺癌患者預(yù)

圖 1. GOBO 數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)結(jié)果E）ABAT 表達(dá)對(duì)乳腺癌患者 DMFS 的影響預(yù)測(cè)結(jié)果；F）ABAT 表達(dá)對(duì)未行 TAM 治療乳腺癌患者 DMFS 的影響預(yù)測(cè)結(jié)果；G）ABAT 表達(dá)對(duì)行 TAM 治療乳腺癌患者 DMFS 的影響預(yù)測(cè)結(jié)果1.2.3 ABAT 的表達(dá)與 ER 的表達(dá)呈正相關(guān)通過利用 GEPIA 網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫來進(jìn)行 TCGA 數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè) ER 與 ABAT 蛋白表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)行 Pearson 相關(guān)性檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn) ABAT 蛋白的表達(dá)水平與 ESR1（ER）的表達(dá)狀態(tài)呈正相關(guān)（P<0.001，R=0.46），即 ABAT 蛋白在 ER 陽性的乳腺癌組織中高表達(dá)，在 ER 陰性的乳腺癌組織中低表達(dá)。結(jié)果見圖 2 所示。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2672960