【摘要】：目的:血清中期因子(midkine,MK)在多種惡性腫瘤中呈高表達,對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等發(fā)揮重要生物學(xué)作用。有關(guān)MK在甲狀腺癌中研究報道較少,本文旨在探討MK對甲狀腺乳頭狀癌轉(zhuǎn)移的預(yù)測價值;抑制MK在未分化甲狀腺癌細胞(ARO)中的表達,研究其對細胞凋亡、增殖的影響及相關(guān)機制。方法:(1)回顧性分析2011年1月至2015年1月在天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科接受~(131)I治療的并且至少隨訪2年的241例術(shù)后甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)患者。通過酶聯(lián)免疫吸附法測定PTC患者首次~(131)I治療前及其后10-12個月時血清MK濃度,根據(jù)首次~(131)I治療后10-12個月時血清MK及促甲狀腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)刺激狀態(tài)下甲狀腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)濃度與首次~(131)I治療時比較將PTC患者分為3組,統(tǒng)計分析血清MK及Tg對PTC患者轉(zhuǎn)移風(fēng)險的預(yù)測價值;(2)通過蛋白免疫印跡(Western blotting)法檢測甲狀腺癌及癌旁組織、甲狀腺癌細胞系(FRO、ARO、WRO、KTC及TPC)中的MK表達水平;將5種MK特異性siRNA采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染未分化型甲狀腺癌(anaplastic thyroid cancer,ATC)細胞(ARO細胞),下調(diào)細胞中MK表達,同時檢測MAPK和PI3K兩條通路關(guān)鍵蛋白ERK1/2和Akt磷酸化水平及下游凋亡相關(guān)蛋白caspase-3和survivin的表達變化;設(shè)置不同濃度梯度MK-siRNA-3轉(zhuǎn)染ARO細胞,通過細胞MTT試驗觀察MK下調(diào)對于細胞增殖的影響。結(jié)果:(1)241例患者在行首次~(131)I治療之前至少1月,已行甲狀腺全切或甲狀腺次全切術(shù)和(或)頸部淋巴結(jié)清掃術(shù),術(shù)后病理診斷證實為PTC且癌灶大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分區(qū)明確。首次~(131)I治療后的10-12個月時TSH刺激狀態(tài)下Tg降低(與首次~(131)I治療前TSH刺激狀態(tài)下Tg相比),但未達到理想Tg水平(TSH刺激狀態(tài)下Tg低于1.0 ng/ml),PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險是Tg降至理想水平的12.5倍(P0.01)。當(dāng)Tg增加(與首次~(131)I治療前TSH刺激狀態(tài)下Tg相比),PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險是Tg降至理想水平的19.5倍(P0.01)。首次~(131)I治療后的10-12個月時血清MK水平下降(與首次~(131)I治療前血清MK相比),但未達到普遍接受的正常水平(255.01±126.78 pg/ml),PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險是血清MK降至普遍接受的正常水平(255.01±126.78 pg/ml)的3.0倍(P0.01)。當(dāng)血清MK水平增加(與首次~(131)I治療前血清MK相比),則發(fā)生轉(zhuǎn)移風(fēng)險是血清MK降至普遍接受的正常水平(255.01±126.78 pg/ml)的5.0倍(P0.01)。在第3組患者中,無病生存率顯著低于其它任何兩組。(2)Western blotting結(jié)果顯示甲狀腺癌組織及癌旁正常組織中均見MK表達,且MK在甲狀腺癌組織中表達明顯高于癌旁組織(5.51倍);在甲狀腺癌5個細胞系(FRO、ARO、WRO、KTC及TPC)中,甲狀腺癌細胞系A(chǔ)RO、WRO、KTC中MK呈高表達,且MK在ARO中的表達高于WRO及KTC,而甲狀腺癌細胞系FRO及TPC中未見明顯MK表達。針對MK的5種特異性siRNA(工作濃度為50nM)作用于ARO細胞48小時后,均能有效抑制ARO細胞中MK的表達;siRNA轉(zhuǎn)染ARO細胞72小時后,siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3、siRNA-4均可抑制PI3K通路中Akt的磷酸化水平,并下調(diào)下游抗凋亡蛋白Survivin、上調(diào)促凋亡蛋白Caspase-3水平,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);對于MAPK通路,只有siRNA-4處理組抑制Erk1/2磷酸化水平(p0.05)。siRNA-3轉(zhuǎn)染ARO細胞作用24小時后細胞存活實驗顯示,在MK-siRNA-3濃度高于500nM時,具有抑制甲狀腺癌細胞增殖的作用。結(jié)論:監(jiān)測血清MK動態(tài)變化對PTC患者發(fā)生轉(zhuǎn)移風(fēng)險的預(yù)測具有潛在的臨床價值。MK在甲狀腺癌中高表達,通過抑制MK的表達,可影響MAPK及PI3K通路的磷酸化及凋亡相關(guān)蛋白水平,并可抑制細胞增殖。
【圖文】：

2.5.2 甲狀腺癌細胞系中 MK 的表達情況在甲狀腺癌 5 個細胞系中檢測 MK 表達情況，其中，MK 在 ARO、WRO、KTC 中高表達，且在 ARO 中表達最明顯，而在 TPC 及 FRO 中未見明顯表達。（見圖 3）以下實驗均以 ARO 細胞為研究對象。2.5.3 siRNA 對 ARO 細胞 MK 表達沉默的效果

392.5.7 siRNA 沉默 MK 后對凋亡相關(guān)蛋白的影響對于轉(zhuǎn)染 siRNA 作用 72 小時后的 ARO 細胞，，MK 表達水平降低，與對照組比較，在 siRNA-1、siRNA-2 處理組抗凋亡蛋白 Survivin 明顯下降（p<0.01）；siRNA-3、siRNA-4 處理組抗凋亡蛋白 Survivin 下降（p<0.05）；而抗凋亡蛋白Survivin 在 siRNA-5 處理組未見明顯變化（p>0.05）。促凋亡蛋白 Caspase-3 在siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3 處理組呈明顯下降趨勢（p<0.01），在 siRNA-4 處理組下降（p<0.05），在 siRNA-5 處理組未見明顯變化（p>0.05）（見圖 8、圖 9）
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R736.1

【參考文獻】

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1 林巖松;張彬;梁智勇;牛麗娟;何霞云;陳立波;丁勇;關(guān)海霞;高再榮;侯曉榮;李雪娜;李小毅;李玉軍;李玉明;羅渝昆;馬慶杰;孫文海;王任飛;張波;安銳;樊友本;郭曄;郭朱明;黃鋼;黃慧強;黃韜;蔣寧一;匡安仁;李方;李思進;李亞明;譚建;邢小平;趙家軍;;復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性分化型甲狀腺癌診治共識[J];中國癌癥雜志;2015年07期

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1 陸春明;人Midkine啟動子驅(qū)動HSV-TK自殺基因體外抗肝癌作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

本文編號：2649171