【摘要】：目的:1)探討TMPRSS4及CLDN1在肝癌中的表達(dá),與肝癌臨床特征及預(yù)后相關(guān)性;2)探討TMPRSS4及CLDN1對(duì)肝癌增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響,并完善可能存在的機(jī)制。方法:1)收集肝癌標(biāo)本89例,并通過(guò)qPCR方法檢測(cè)TMPRSS4及CLDN1在肝癌組織標(biāo)本及肝臟組織標(biāo)本中的表達(dá),并分析TMPRSS4、CLDN1表達(dá)水平與肝癌患者臨床特征和預(yù)后之間的相關(guān)性。2)應(yīng)用以慢病毒為載體的過(guò)表達(dá)技術(shù)或sh-RNA改變TMPRSS4表達(dá),利用MTT、Transwell技術(shù)、流式細(xì)胞儀、Westernblot技術(shù)明確其與肝癌增殖、轉(zhuǎn)移相關(guān)性,在肝癌中進(jìn)一步討論TMPRSS4與腫瘤干性的相關(guān)性。3)應(yīng)用以慢病毒為載體的過(guò)表達(dá)技術(shù)或sh-RNA改變CLDN1表達(dá),利用MTT、Transwell技術(shù)、流式細(xì)胞儀、Westernblot技術(shù)明確其與肝癌增殖、轉(zhuǎn)移相關(guān)性,探討CLDN1與肝癌干性相關(guān)性,并完善TMPRSS4與CLDN1之間調(diào)控關(guān)系;結(jié)果:1)TMPRSS4及CLDN1的表達(dá)水平在肝癌組織中明顯上調(diào),同時(shí)在正常的肝組織中低表達(dá)。并且TMPRSS4及CLDN1表達(dá)均與肝癌預(yù)后相關(guān)。過(guò)表達(dá)TMPRSS4、CLDN1的肝癌患者生存期短,而低表達(dá)TMPRSS4、CLDN1者生存期長(zhǎng),相關(guān)性分析提示二者在肝癌中表達(dá)具有正相關(guān)性;2)RT-PCR和Western bolt結(jié)果顯示:TMPRSS4可介導(dǎo)肝癌增殖,并增強(qiáng)侵襲轉(zhuǎn)移能力,并且可促進(jìn)肝癌細(xì)胞獲得干性;3)進(jìn)一步研究CLDN1是否可以影響腫瘤增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力,發(fā)現(xiàn)低表達(dá)CLDN1可降低肝癌細(xì)胞株hepG2與Huh7體外增殖能力,而過(guò)表達(dá)CLDN1肝癌細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)CLDN1下調(diào)的細(xì)胞株生長(zhǎng)能力減弱,而過(guò)表達(dá)CLDN1細(xì)胞成瘤能力增強(qiáng);Transwell試驗(yàn)結(jié)果顯示,CLDN1低表達(dá)細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲能力減弱,而過(guò)表達(dá)者細(xì)胞其侵襲、轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。這與CLDN1的表達(dá)實(shí)現(xiàn),進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)TMPRSS4/ERK/CLDN1信號(hào)通路發(fā)揮促癌作用,促使腫瘤細(xì)胞獲得干性。結(jié)論:本課題研究發(fā)現(xiàn),TMPRSS4與CLDN1在肝癌細(xì)胞及組織中表達(dá)上調(diào),可被認(rèn)為是原癌基因,并且TMPRSS4與CLDN1過(guò)表達(dá)的患者其生存期短,相關(guān)性分析提示二者之間存在正相關(guān)。體內(nèi)及體外研究發(fā)現(xiàn),CLDN1在肝癌中發(fā)揮著原癌基因的作用,可增強(qiáng)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移潛能,并且CLDN1表達(dá)水平受TMPRSS4正相調(diào)控。本研究的結(jié)果使我們更加清晰的認(rèn)識(shí)了TMPRSS4及CLDN1在肝細(xì)胞癌中的生物學(xué)功能,為其今后可能成為一個(gè)新的治療靶點(diǎn)奠定了一定的基礎(chǔ)。
【圖文】：

并以GAPDH為對(duì)照，檢測(cè)TMPRSS4與CLDN1表達(dá)含量。研究結(jié)果顯示，CLDN1在正常的肝組織中表達(dá)陽(yáng)性率低25.5%（14/55），而在肝細(xì)胞肝癌中為65.2%（58/89），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1-1A，表1-2，P<0.001）。為了研究TMPRSS4在肝癌中的表達(dá)，我們首先分析了TMPRSS4在肝癌組織和非肝癌組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)TMPRSS4在肝癌組織高表達(dá)（65/89），，而在非肝癌組織中低表達(dá)（17/55），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖1-1B，表1-3

結(jié)果表明二者均在肝癌中高表達(dá)，在肝組織中低表達(dá)，并且TMPRSS4陽(yáng)性主要表現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜表面呈棕黃色深染，CLDN1陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞膜表面呈彌漫性淺黃色染色（圖1-2A）。因TMPRSS4與CLDN1均在肝癌中高表達(dá)，且在文獻(xiàn)中提示TMPRSS4增高則的CLDN1表達(dá)水平可增高，可能二者之間存在某種相關(guān)性，故我們進(jìn)一步通過(guò)spearman 相關(guān)性檢驗(yàn)分析二者之間相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TMPRSS4及CLDN1之間存在正相關(guān)（圖1-2B，r=0.375，P<0.01）。圖1-2 免疫組化結(jié)果顯示TMPRSS4與CLDN1在肝癌組織及非肝癌組織中的表達(dá)水平；BTMPRSS4與CLDN1之間存在相關(guān)性Fig. 1-2（A）IHC staining demonstrated the expression level of TMPRSS4 and CLDN1 in HCCand normal liver tissues（NT）（.B）Spearman assays analyzed the correlation between TMPRSS4and CLDN1 in HCC.
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2639028