【摘要】：目的:肝癌是目前最常見的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重影響著人類的健康。目前肝癌治療大多是采取手術(shù)切除、放療、化療等綜合治療。但由于目前化療藥物的耐藥性、副作用及預(yù)后差等一系列原因,新型抗腫瘤藥物的研發(fā)十分必要。自從順鉑被合成后,作為抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床,金屬配合物便開始備受關(guān)注。2-苯甲酰基吡啶銠(II)配合物是一種新型的、具有生物活性的金屬配合物,但其抗腫瘤效果及其作用機(jī)制尚不清楚,本文主要研究該新型金屬配合物對肝癌細(xì)胞增殖、凋亡及周期的影響及其分子機(jī)制。方法:1、采用MTT篩選出對2-苯甲酰基吡啶銠(II)配合物作用較為敏感的肝癌細(xì)胞株;2、利用MTT、平板克隆形成實驗檢測2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后對肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制作用;3、采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后肝癌細(xì)胞的凋亡和周期阻滯的情況;4、Hoechst染色和JC-1染色觀察2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后肝癌細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變;5、活性氧染色檢測2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用后的肝癌細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平及是否存在活性氧依賴關(guān)系;6、采用Western Blotting技術(shù)檢測藥物作用后,肝癌細(xì)胞的凋亡相關(guān)因子和周期阻滯相關(guān)因子的表達(dá)。結(jié)果:1、MTT法篩選出對2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物敏感的肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞。2、2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物對HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用具有時間依賴和濃度依賴關(guān)系。3、40μM的2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物作用于肝癌細(xì)胞48h后,流式檢測2-苯甲酰基吡啶銠(II)配合物能明顯誘導(dǎo)HepG2凋亡,與對照組差異顯著(P0.05),Hoechst染色可見2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞核固縮,JC-1染色可見細(xì)胞凋亡后,線粒體外膜電勢降低,除此之外,活性氧檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平明顯升高,但2-苯甲酰基吡啶銠(II)配合物誘導(dǎo)HepG2的凋亡不依賴活性氧的產(chǎn)生。4、Western Blotting實驗表明,線粒體信號通路和死亡受體信號通路參與了2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的凋亡,并且Bcl-2家族也參與了2-苯甲酰基吡啶銠(II)配合物誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡的過程;另外,2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物可能通過上調(diào)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑p21,下調(diào)細(xì)胞周期蛋白CyclinD1/CyclinA1/CyclinE1和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CDK2/CDK6的表達(dá),引起細(xì)胞周期阻滯在G1期。結(jié)論:2-苯甲�；拎ゃ�(II)配合物是一種潛在的新型抗肝癌藥物,能夠引起HepG2細(xì)胞周期阻滯在G1期;并且通過線粒體信號通路和死亡受體信號通路誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡。
【圖文】：

作用于HepG2細(xì)胞48h后，actived-caspase-3和cleaved-PARP表達(dá)增加，，而pro-caspase-3和Survivin(目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子)表達(dá)降低。如圖5B/C所示，Rh(L)2Cl2不但增加了線粒體通路中Apaf-1, caspase-9和細(xì)胞質(zhì)中cytochrome-c的表達(dá)，而且增加了死亡受體通路中caspase-8、Fas的表達(dá)。這表明線粒體通路信號和死亡受體通路信號都參與Rh(L)2Cl2誘導(dǎo)HepG2的凋亡。已有研究表明，Bcl-2家族在線粒體信號通路中發(fā)揮了重要作用，因此我們探討的Bcl-2家族中凋亡抑制因子Bcl-2和促凋亡因子Bax的表達(dá)。結(jié)果如圖5D所示，Bcl-2的表達(dá)明顯降低，而Bax的表達(dá)明顯增加。這些數(shù)據(jù)證實，Bcl-2家族參與了Rh(L)2Cl2誘導(dǎo)HepG2
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 詹啟敏;陳杰;;細(xì)胞周期與腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)[J];中國腫瘤臨床;2014年01期

2 馮覺平;于世英;王亞萍;袁響林;李敏;方靜;;奧沙利鉑對肝癌細(xì)胞HepG2生物學(xué)行為的影響[J];腫瘤;2010年09期

本文編號：2635693