本文關(guān)鍵詞：腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞腫瘤歸巢相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的分離培養(yǎng)鑒定乳腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞及與之配對(duì)的正常乳腺組織血管內(nèi)皮細(xì)胞,并比較兩者生物學(xué)性狀差異 方法(1)取新鮮乳腺癌組織及正常乳腺組織,剪碎,膠原酶消化成單細(xì)胞懸液,細(xì)胞標(biāo)記抗CD31單克隆抗體,免疫磁柱分離抗CD31單克隆抗體陽性細(xì)胞,即血管內(nèi)皮細(xì)胞,并且體外原代培養(yǎng),顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志性分子CD31、CD34、CD105及vWF。(3)實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)檢測(cè)正常組織血管內(nèi)皮細(xì)胞及腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞基因表達(dá)差異。(4)體外血管生成模型驗(yàn)證兩種內(nèi)皮細(xì)胞的成管能力。 結(jié)果(1)免疫磁珠可以分離得到的高純度的腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞及正常血管內(nèi)皮細(xì)胞,兩者存在形態(tài)學(xué)差異。(2)與正常血管內(nèi)皮細(xì)胞相比,腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)特異性的分子標(biāo)志：腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)腫瘤內(nèi)皮標(biāo)志1(Tumor endothelial markers, TEMs),腫瘤內(nèi)皮標(biāo)志1(TEM8),內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2),內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)以及乳腺癌血管內(nèi)皮細(xì)胞所特有的標(biāo)志HEYL和PRL-3。(3)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞具有更強(qiáng)的體外血管形成能力。 結(jié)論免疫磁珠分選技術(shù)可以得到高純度的內(nèi)皮細(xì)胞,且兩者存在形態(tài)學(xué)及生物學(xué)性狀差異。 目的間充質(zhì)干細(xì)胞是中胚層來源的具有多向分化潛能的干細(xì)胞,因其具有低免疫原性,腫瘤靶向歸巢特性,以及其易于分離,擴(kuò)增,可進(jìn)行遺傳修飾等優(yōu)點(diǎn),已成為最理想的基因治療細(xì)胞載體。然而,目前研究對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞腫瘤歸巢的機(jī)制缺乏系統(tǒng)性的研究和深入認(rèn)知。本文旨在探討間充質(zhì)干細(xì)胞靶向歸巢與腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)性。 方法(1) Transwell模型驗(yàn)證腫瘤組織及正常組織對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的體外遷移能力。(2)免疫熒光檢測(cè)腫瘤組織及正常組織對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞微管組織中心(MTOC)的影響。(3)膠原酶消化法及胰酶差異消化法獲得腫瘤成纖維細(xì)胞,原代腫瘤細(xì)胞,Boyden小室比較不同細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞遷移能力影響。(4)鬼比環(huán)肽染色共培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞,激光共聚焦觀察細(xì)胞F-actin改變。 結(jié)果(1)與正常組織相比,腫瘤組織促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力更強(qiáng)。(2)間充質(zhì)干細(xì)胞微管組織中心(MTOC)向腫瘤組織部位極性化,微管排列不規(guī)則,正常組織組觀察到此現(xiàn)象。(3)來源于腫瘤組織的不同細(xì)胞中,腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的去化能力更強(qiáng)。(4)與腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞極性及細(xì)胞骨架發(fā)生明顯變化。 結(jié)論腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞參與了間充質(zhì)干細(xì)胞的腫瘤靶向歸巢 目的作為理想的腫瘤基因治療的細(xì)胞載體,間充質(zhì)干細(xì)胞的腫瘤歸巢是實(shí)現(xiàn)靶向治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)及重要前提,明確間充質(zhì)干細(xì)胞腫瘤歸巢的分子本質(zhì)對(duì)于其合理設(shè)計(jì)和應(yīng)用腫瘤靶向治療具有理論意義和指導(dǎo)價(jià)值。本研究在于從分子水平上探討間充質(zhì)干細(xì)胞靶向歸巢的機(jī)制。 方法(1)細(xì)胞因子芯片高通量篩選參與間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢的細(xì)胞因子。(2)ELISA檢測(cè)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞不同培養(yǎng)方式的IL6分泌量。(3)MTT方法檢測(cè)IL6對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。(4)Transwell模型驗(yàn)證IL6對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的體外遷移能力的影響。(5)鬼比環(huán)肽染色I(xiàn)L6處理的間充質(zhì)干細(xì)胞,激光共聚焦觀察細(xì)胞F-actin改變。(6)Western-blot檢驗(yàn)IL6對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞信號(hào)通路的改變。(7)利用Anti-IL6中和抗體封閉腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞分泌的IL6后,Transwell模型檢驗(yàn)其對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移能力的影響。(8)SiRNA干擾技術(shù)反義封閉腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞的IL6表達(dá),Transwell模型檢驗(yàn)其對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞遷移能力的改變。(9)細(xì)胞體外標(biāo)記并流式細(xì)胞儀鑒定標(biāo)記效率后,利用小鼠耳朵模型體內(nèi)驗(yàn)證IL6對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢的影響。 結(jié)果(1)細(xì)胞因子芯片發(fā)現(xiàn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)的白介素-6蛋白表達(dá)峰度相對(duì)于腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)峰度增高3.6倍,相對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞的蛋白表達(dá)峰度升高8.92倍。(2)ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn),腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞共培養(yǎng)上清中IL6顯著升高,驗(yàn)證了細(xì)胞因子芯片的結(jié)果。(3)MTT檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)白介素6并未明顯促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖。(4)人重組IL6蛋白處理的間充質(zhì)干細(xì)胞的體外遷移能力明顯增強(qiáng),結(jié)晶紫染色間充質(zhì)干細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)明顯增多,且存在劑量和時(shí)間依賴性。(5)激光共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)：10ng/ml IL6處理的間充質(zhì)干細(xì)胞極性及細(xì)胞骨架發(fā)生明顯變化,肌動(dòng)蛋白變粗變大,并出現(xiàn)偽足結(jié)構(gòu)。(6) Western-blot結(jié)果表明人重組IL6蛋白可以導(dǎo)致間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)STAT3磷酸化,并上調(diào)與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)的蛋白MMP3, MMP9。(7)Anti-IL6中和抗體可以有效的阻礙間充質(zhì)干細(xì)胞的穿膜能力。(8) Western-blot結(jié)果表明IL6/SiRNA可有效抑制間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)靶蛋白IL6的表達(dá),抑制STAT3的活化,并且明顯降低了間充質(zhì)干細(xì)胞的體外遷移能力。(9)DiO及CellTrackerTM dye對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞及間充質(zhì)干細(xì)胞的標(biāo)記效率分別為96.53±3.21%,98.71±4.67%,且標(biāo)記時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)3周。(10)小鼠耳朵模型從體內(nèi)驗(yàn)證了IL6為間充質(zhì)干細(xì)胞靶向歸巢的重要分子機(jī)制。 結(jié)論IL6/STAT3信號(hào)通路可能參與了間充質(zhì)干細(xì)胞的腫瘤靶向歸巢
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)皮細(xì)胞 分離鑒定 成管 間充質(zhì)干細(xì)胞 腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞 遷移 細(xì)胞因子芯片 白介素6 細(xì)胞遷移
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R737.9
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• Abstract9-13
• 研究背景13-21
• 參考文獻(xiàn)15-21
• 第一部分：乳腺癌相關(guān)血管內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定21-40
• 中文摘要21-22
• Abstract22-23
• 前言23-24
• 材料與方法24-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-35
• 討論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 第二部分：腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)了間充質(zhì)干細(xì)胞的體外遷移能力40-57
• 中文摘要40-41
• Abstract41-42
• 前言42-43
• 材料方法43-47
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-50
• 討論50-52
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 第三部分：細(xì)胞因子芯片高通量篩選參與間充質(zhì)干細(xì)胞靶向歸巢的分子機(jī)制57-84
• 中文摘要57-58
• Abstract58-60
• 前言60-61
• 材料方法61-69
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果69-78
• 討論78-79
• 參考文獻(xiàn)79-84
• 綜述84-108
• 參考文獻(xiàn)98-108
• 致謝108-109

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李艷菊;胡亮杉;郭坤元;;間充質(zhì)干細(xì)胞在衰老大鼠體內(nèi)歸巢的研究[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2009年07期

2 鄧啟垣;陳燦;黃石安;;間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2010年05期

3 張英杰;李玉云;;MSCs分離培養(yǎng)及定向分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究[J];中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2008年13期

4 史明霞;李靜;廖聯(lián)明;陳斌;李炳宗;陳磊;趙春華;;胎兒骨髓源Flk1~+間充質(zhì)干細(xì)胞的歸巢機(jī)制[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年14期

5 劉愷鳴;遲路湘;魯向輝;;缺氧條件下間充質(zhì)干細(xì)胞以旁分泌方式影響腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年07期

6 林志祥;徐皓;;間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年19期

7 晏開力;翟志敏;汪健;李慶;鄔志偉;徐修才;徐靜瑋;;VEGF與腫瘤的相關(guān)性及其對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)作用的研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2006年11期

8 劉曉崢;韓志軍;任華;;骨髓間充質(zhì)細(xì)胞來源的血管內(nèi)皮樣細(xì)胞與臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞抗凝基因表達(dá)的比較[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年11期

9 李麗;馬海英;馬玲;杜莉莉;盧曉梅;金玉楠;魏文娟;王彥霞;于艷秋;;人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化潛能的研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2010年11期

10 李麗;馬海英;馬玲;于艷秋;;人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化潛能的研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2010年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊少光;池穎;戎麗娟;邢文;盧士紅;趙欽軍;馬鳳霞;韓忠朝;;不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞的比較[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

2 王巧稚;韓藝;趙宏賢;余鴻;劉廣益;;當(dāng)歸誘導(dǎo)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化和毒性檢測(cè)的研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

3 王玉紅;陳光輝;;地黃低聚糖對(duì)人脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞分泌肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的影響[A];2010全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

4 杜鳳移;王皓;楊樹龍;趙繪存;楊英;楊軍;;納米纖維支架對(duì)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第29屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

5 郭勇;張西正;郭春;魏嚴(yán);李瑞欣;徐曉瑩;張永紅;;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化中心肌發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)2008年年會(huì)暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程與臨床論壇論文集[C];2008年

6 朱恒;江小霞;劉元林;張毅;毛寧;;間充質(zhì)干細(xì)胞選擇性調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞發(fā)育和功能[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

7 張顥;陶艷玲;邱林;張伯龍;馬軍;陳志哲;劉擁軍;韓忠朝;;一種具有免疫負(fù)調(diào)節(jié)功能的人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

8 李杰平;孔佩艷;李佳麗;朱麗丹;孔祥敬;曾東風(fēng);劉紅;王慶余;彭賢貴;陳幸華;張曦;;純化的自體CD34+細(xì)胞聯(lián)合間充質(zhì)干細(xì)胞治療難治性克隆恩病一例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

9 李麗;馬海英;馬玲;于艷秋;;人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化潛能的研究[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國(guó)代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

10 羅高興;程文廣;黃正根;賀偉峰;袁順宗;陳希煒;吳軍;;應(yīng)用人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)小鼠皮膚缺損創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王秋月　王琳;空軍總醫(yī)院采用間充質(zhì)干細(xì)胞救治小腦萎縮[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

2 記者 李素鋒;我市首例間充質(zhì)干細(xì)胞移植手術(shù)取得成功[N];臨汾日?qǐng)?bào);2009年

3 記者 王丹　通訊員 艾素;異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良治療獲突破[N];健康報(bào);2010年

4 記者 白毅;間充質(zhì)干細(xì)胞可促進(jìn)成熟樹突狀細(xì)胞增殖分化[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

5 記者 張真真　通訊員 葉逢春 魯斌;讓返鄉(xiāng)民工歸巢不歇業(yè)[N];湖北日?qǐng)?bào);2008年

6 韓小鋒　陳計(jì)智;精心呵護(hù)“歸巢倦鳥”[N];解放軍報(bào);2011年

7 記者 尚志岑;平高集團(tuán)出現(xiàn)萬鳥歸巢勝景[N];平頂山日?qǐng)?bào);2006年

8 記者 班彥欽;忻州萬余商戶候鳥歸巢[N];山西日?qǐng)?bào);2002年

9 張泓;生物醫(yī)藥,2008新突破[N];北方經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2008年

10 徐機(jī)玲;姜躍進(jìn);我國(guó)骨髓干細(xì)胞移植技術(shù)獲突破[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 于美嬌;系統(tǒng)歸巢的間充質(zhì)干細(xì)胞在牙周組織修復(fù)再生過程中的作用研究[D];山東大學(xué);2011年

2 彭飛;620nm非相干紅光對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的光生物調(diào)節(jié)作用[D];華中科技大學(xué);2011年

3 李東杰;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)創(chuàng)面愈合及體外誘導(dǎo)分化為表皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

4 李寶軍;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)及復(fù)合PLGA體內(nèi)異位成軟骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2007年

5 朱雅姝;Flk-1~+間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用及其分子機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

6 吳桂珠;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療壓力性尿失禁的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

7 熊卉;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1基因體外轉(zhuǎn)染兔顳下頜關(guān)節(jié)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向纖維軟骨轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2010年

8 苗宗寧;胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞與絲素蛋白/羥基磷灰石材料在骨創(chuàng)傷修復(fù)中的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2010年

9 梁偉;人骨髓Flk-1~+間充質(zhì)干細(xì)胞抗DNA損傷物質(zhì)影響作用研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

10 趙迎澤;BMP9通過MAPKs通路調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化及其機(jī)制的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王成春;靜脈移植人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在阿爾茨海默病小鼠的體內(nèi)遷移及治療機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2010年

2 章守琴;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞支持造血的體外研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

3 陳芳;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)化療所致卵巢顆粒細(xì)胞損傷的體外實(shí)驗(yàn)[D];暨南大學(xué);2010年

4 張茜真;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定以及干細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)其重編程的研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

5 陳義;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外重建角膜后板層的初步研究[D];暨南大學(xué);2010年

6 唐子濱;納米級(jí)膠原基骨材料復(fù)合自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞用于兔后外側(cè)脊柱融合的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

7 齊凱;人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化初探[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

8 馬蘭蘭;不同胎齡人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

9 李成華;口腔黏膜間充質(zhì)干細(xì)胞存在及在口腔扁平苔蘚中變化的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 李麗;人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化潛能的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2010年

  本文關(guān)鍵詞：腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞腫瘤歸巢相關(guān)性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：260725