【摘要】：研究背景:胰腺癌是常見的惡性腫瘤之一,預(yù)后較差,近年來,胰腺癌的發(fā)病率逐年上升。研究影響胰腺導(dǎo)管腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制,有助于了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展,并為臨床診治和疾病預(yù)后提供理論依據(jù)。大量的文獻報道,腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移與血管生成、細胞外基質(zhì)的降解及腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程相關(guān),抗血管生成和抑制細胞基質(zhì)降解及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化均可能在抗腫瘤治療中發(fā)揮一定作用。ASPM是一種異常紡錘體樣頭小畸形相關(guān)的基因,在胰腺導(dǎo)管癌細胞小管形成過程中表達降低,而在胰腺導(dǎo)管腺癌中高表達,通過Wnt通路促進胰腺導(dǎo)管腺癌的侵襲和維持胰腺導(dǎo)管腺癌細胞的干細胞特征。但ASPM在胰腺導(dǎo)管腺癌血管生成、細胞外基質(zhì)降解、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中是否起作用,是否通過Wnt信號調(diào)節(jié)腫瘤血管生成、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、影響細胞外基質(zhì)降解等機制仍不清楚。LRP16是白血病相關(guān)基因,亦是ERa信號通路上的應(yīng)答基因,參與了人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但是否參與了胰腺導(dǎo)管腺癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移尚不清楚,其與ASPM的相互關(guān)系還需進一步研究。目的:通過檢測對胰腺導(dǎo)管腺癌標本中ASPM的表達,并結(jié)合檢測胰腺導(dǎo)管腺癌血管內(nèi)皮生長因子VEGF、微血管密度MVD、β-catenin、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP7和LRP16的表達,評估ASPM在胰腺導(dǎo)管腺癌中的作用,并確定其作為預(yù)后判斷危險因素的可能性;通過免疫組化、RNAscope、體外細胞實驗,使用RNAi沉默技術(shù),從蛋白、mRNA水平了解ASPM與胰腺導(dǎo)管腺癌腫瘤血管生成、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、細胞外基質(zhì)降解和Wnt信號通路的關(guān)系。方法:1.選取解放軍總醫(yī)院病理科經(jīng)病理證實的118例胰腺導(dǎo)管腺癌和34例癌旁正常胰腺組織蠟塊,采用免疫組織化學(xué)分析ASPM、LRP16、β-catenin、VEGF、MMP7在胰腺導(dǎo)管腺癌及正常胰腺組織中的表達情況;用CD34標記觀察腫瘤血管,分析ASPM、LRP16與胰腺導(dǎo)管腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系;探討ASPM與LRP16、β-catenin、VEGF、MMP7和MVD之間的相關(guān)性。選取16例淋巴結(jié)和9例肝轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶組織,通過免疫組化及RNAscope方法檢測ASPM的蛋白及mRNA的表達情況。2.在胰腺癌細胞株P(guān)ANC-1、AsPC-1中采用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)將ASPM基因沉默,CCK8、Transwell實驗檢測胰腺癌細胞株中ASPMmRNA水平降低情況下,胰腺癌細胞的生長情況、細胞增殖及侵襲能力的改變。3.qRT-PCR、Western blot實驗研究調(diào)控 ASPM,檢測 DVL、β-catenin、VEGF、α-SMA、MMP7 表達,分析 ASPM 的功能及與 DVL、β-catenin、VEGF、MMP7、α-SMA 因子間的關(guān)系。結(jié)果:1.ASPM在胰腺導(dǎo)管腺癌的表達與胰腺導(dǎo)管腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移、TNM分期及預(yù)后明顯正相關(guān)(P0.05)。免疫組織化學(xué)及RNAscope方法檢測原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶A(yù)SPM 的蛋白及 mRNA 表達差異顯著(P0.05)。ASPM 與β-catenin、VEGF、MVD、LRP16、MMP7 呈顯著正相關(guān)(P0.05)。2.ASPM 低表達可降低 PANC-1、AsPC-1胰腺癌腫瘤細胞的生長、增殖及侵襲能力(P0.05)。3.沉默PANC-1、AsPC-1腫瘤細胞的ASPM,β-catenin、DVL、MMP7、VEGF、α-SMA轉(zhuǎn)錄水平在沉默組與陰性對照組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Western blot檢測顯示β-catenin、DVL、α-SMA、VEGF、MMP7蛋白表達與陰性對照組差異有顯著性(P0.05)。結(jié)論:1.ASPM、LRP16與胰腺導(dǎo)管腺癌的預(yù)后相關(guān),ASPM可以作為判斷胰腺導(dǎo)管腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移、血管生成和預(yù)后的指標。2.ASPM與胰腺導(dǎo)管腺癌增殖、侵襲密切相關(guān)。沉默ASPM可以有效地抑制胰腺癌細胞的增殖、侵襲等惡性生物學(xué)行為。3.沉默ASPM可抑制Wnt信號通路關(guān)鍵因子的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達,可抑制腫瘤血管生成,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及細胞外基質(zhì)的降解,ASPM可能通過Wnt-DVL-β-catenin調(diào)節(jié)MMP7、VEGF、α-SMAmRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達。4.ASPM可通過多個途徑影響胰腺導(dǎo)管腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。ASPM與LRP16協(xié)同影響胰腺導(dǎo)管腺癌的發(fā)生發(fā)展。靶向調(diào)控ASPM和LRP16,可能對胰腺導(dǎo)管腺癌侵襲轉(zhuǎn)移起到調(diào)控作用,可作為潛在的治療手段。
【圖文】：

原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶的蠟塊，進行ＴＭＡ構(gòu)建，通過免疫組化及ＲＮＡｓｃｏｐｅ方法檢測原發(fā)灶逡逑和轉(zhuǎn)移灶中ＡＳＰＭ的表達，并分析比較其中的差異。我們發(fā)現(xiàn)ＡＳＰＭ蛋白及ＲＮＡｓｃｏｐｅ逡逑評分在轉(zhuǎn)移灶高于原發(fā)灶，，差異具有顯著性（Ｐ＝０．０１８；Ｐ＝０．０２３）（圖２、３，表３、４）。逡逑表３．免疫組化檢測ＡＳＰＭ在原發(fā)胰腺導(dǎo)管腺癌和淋巴結(jié)、肝轉(zhuǎn)移性胰腺導(dǎo)管腺癌組織中的表達逡逑ＡＳＰＭ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ＡＳＰＭ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邐ｙ２邐Ｐ邋ｖａｌｕｅ逡逑Ｐｒｉｍａｒｙ邐１２邐１３逡逑５．５６邐Ｐ＝０．０１８逡逑Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ邐２０邐５逡逑ｒ邐Ｊ邋？邐？邋＇邐？邋－邋ＶＴ邋Ｔ邐？邐ｆ邋．逡逑、＇＇邋．邋－■邋？邋？邋＇邋．邋．邋＊逡逑ｉ邐－邐＇邋－邋？邋－１邋．逡逑４＊ｃ邋■＇邐＾邋ｒ邋．‘邐？邐，？邐＼、ｖ逡逑＾邐＊邐y義希鈴澹汗沐澹у危緬義�，五P海義希簾湥義稀

本文編號：2600748