【摘要】：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)的很多研究成果顯示很多嚴(yán)重疾病的發(fā)生與基因突變密切相關(guān),如癌癥和遺傳病等。由此可見(jiàn),特定序列DNA的檢測(cè)分析在病原基因的測(cè)定、遺傳疾病的早期診斷和治療等方面具有非常重大的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。近年來(lái),一系列快速可靠的特定序列DNA檢測(cè)技術(shù)得以迅速發(fā)展,核酸檢測(cè)目前廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、臨床診斷學(xué)等諸多領(lǐng)域。本論文以質(zhì)譜為檢測(cè)手段,利用磁珠的富集分離特性,再結(jié)合核酸放大技術(shù)等有效方法,發(fā)展了一些列癌癥相關(guān)DNA序列的分析檢測(cè)方案,主要包括以下幾部分內(nèi)容:TK1 m RNA與細(xì)胞分裂相關(guān),它是腫瘤生長(zhǎng)的一種重要的標(biāo)志物。鑒定其在活體細(xì)胞內(nèi)基因水平的變化對(duì)于理解生物學(xué)過(guò)程和疾病機(jī)制有重要的價(jià)值,對(duì)于癌癥的檢測(cè)、預(yù)防和治療也越來(lái)越不可或缺。在第2章中,我們發(fā)展了一種基于鑭系離子標(biāo)記的等溫雜交鏈擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)TK1 m RNA的新方法,鑒于HCR方法的優(yōu)勢(shì)和稀土離子標(biāo)記DNA的可行性,本課題以HCR信號(hào)擴(kuò)增為基礎(chǔ)、結(jié)合稀土標(biāo)記的DNA之間互補(bǔ)雜交的作用原理以及利用ICP-MS的高靈敏檢測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的靈敏檢測(cè)。該檢測(cè)平臺(tái)主要包括如下幾個(gè)方面的工作:1.參照已有文獻(xiàn)報(bào)道的合成方法實(shí)現(xiàn)稀土離子標(biāo)記DNA探針。2.利用磁納米顆粒的富集分離作用和HCR信號(hào)擴(kuò)增方法實(shí)施檢測(cè)目標(biāo)DNA的方案。3.用ICP-MS檢測(cè)樣品中稀土離子強(qiáng)度,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA的間接檢測(cè)。本方法綜合利用了HCR無(wú)酶恒溫信號(hào)放大、核酸適體的高特異性及ICP-MS靈敏度高、分辨率高、穩(wěn)定性好和抗干擾性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA序列的特異性檢測(cè)。DNA甲基化是參與基因調(diào)控的一種重要表觀遺傳機(jī)制,它可以通過(guò)影響DNA構(gòu)象、穩(wěn)定性和與蛋白質(zhì)相互作用等方式實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)節(jié),Cp G島的甲基化可能是最早研究的發(fā)生在多種癌癥中的體細(xì)胞基因組改變之一。很多科學(xué)家報(bào)道了不同癌癥中發(fā)生的甲基化異常現(xiàn)象,它已成為多種腫瘤診斷的生物標(biāo)志物之一,因此DNA甲基化的分析對(duì)于了解表觀遺傳學(xué)的影響至關(guān)重要。在第3章中,我們借助于磁珠捕獲富集分離功能,以前列腺組織細(xì)胞為檢測(cè)對(duì)象,直接進(jìn)樣電噴霧質(zhì)譜達(dá)到檢測(cè)DNA甲基化的目的。該方法設(shè)計(jì)原理簡(jiǎn)單、靈敏度高、選擇性好,適用于實(shí)際樣品的分析。
【圖文】：

圖1.3.2 表示質(zhì)譜儀的基本組成圖。根據(jù)進(jìn)樣方式的不同，可分為直接進(jìn)樣，色譜進(jìn)樣和加熱進(jìn)樣等幾種；根據(jù)離子源的種類(lèi)不同，可分為電子電離源(EI)、電噴霧源(ESI)、等離子體源（ICP）和大氣壓化學(xué)電離源(APCI)等幾類(lèi)；根據(jù)質(zhì)量分析器的不同，可分為四極桿分析器(Quadrupole analyzer)、傅里葉變換離子回旋共振

圖1.3.2 表示質(zhì)譜儀的基本組成圖。根據(jù)進(jìn)樣方式的不同，，可分為直接進(jìn)樣，色譜進(jìn)樣和加熱進(jìn)樣等幾種；根據(jù)離子源的種類(lèi)不同，可分為電子電離源(EI)、電噴霧源(ESI)、等離子體源（ICP）和大氣壓化學(xué)電離源(APCI)等幾類(lèi)；根據(jù)質(zhì)量分析器的不同，可分為四極桿分析器(Quadrupole analyzer)、傅里葉變換離子回旋共振
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R730.4;O657.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 楊鋒;齊顯尼;王欽宏;張雪洪;;檢測(cè)汞的全細(xì)胞生物傳感器構(gòu)建[J];科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào);2014年24期

2 韓競(jìng)男;魯昊騁;梁靜;;DNA甲基化與癌癥[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2012年02期

3 馬莉萍;毛斌;劉斌;李工農(nóng);韓根亮;劉國(guó)漢;;生物傳感器的應(yīng)用現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)[J];傳感器與微系統(tǒng);2009年04期

4 張淑珍,吳弼東,劉勤,郭繼芬,謝劍煒;質(zhì)譜技術(shù)在手性識(shí)別和分析中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J];分析化學(xué);2005年01期

本文編號(hào)：2587493