【摘要】：目的食管癌是人類常見的惡性腫瘤之一,占所有惡性腫瘤的2%,每年全球約有40萬人死于食管癌。我國是食管癌高發(fā)地區(qū)之一。癌基因和抑癌基因表達的失調(diào)造成細胞內(nèi)信號通路的改變,繼而帶來癌細胞的發(fā)生和發(fā)展。p53是人體內(nèi)重要的抑癌基因,akt是人體內(nèi)重要的癌基因。在正常人體細胞內(nèi)兩者處于動態(tài)平衡中,共同調(diào)節(jié)了細胞的增殖和凋亡。癌細胞凋亡和增殖的失衡提示其細胞內(nèi)P53和Akt的表達較正常人體細胞發(fā)生了變化。本文旨在探究食管癌細胞中兩個細胞內(nèi)信號通路上游節(jié)點:P53和Akt蛋白之間的關系正常細胞發(fā)生了何種變化,初步明確其在癌細胞內(nèi)的生物學特性,從而更好地了解腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展。方法取手術切除的食管癌及癌旁組織制成病理切片并行免疫組化檢查,檢測有無p-Akt1,p-Akt2,Akt和P53蛋白表達;取TE-1食管高分化鱗癌細胞培養(yǎng),提取細胞蛋白western blot法檢測其p-Akt1,p-Akt2,Akt和P53濃度;再分別使用P53抑制劑Pifithrin-α,Akt1抑制劑A-674563,Akt2抑制劑CCT128930作用于TE-1細胞,分別提取細胞蛋白,western blot法檢測p-Akt1,p-Akt2和P53濃度,觀察蛋白之間相互關系;取人體食管癌組織對p53基因外顯子進行基因測序,并比對GENEBANK發(fā)現(xiàn)其突變,對比相關文獻明確突變類型;結果50 例食管癌組織中,分別 52%(26/50)、42%(21/50)、30%(15/50)、66%(33/50)的食管癌組織表達P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白,癌旁組織分別22%(11/50)、18%(9/50)、8%(4/50)、28%(14/50)的癌旁組織表達P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白,食管癌顯著表達更多的P53(p=0.002)、Akt(p=0.009)、p-Akt1(p=0.005)和p-Akt2(p=0.000)蛋白。跟中高分化食管癌、Ⅲ+Ⅳ期食管癌、存在淋巴結轉移的食管癌相比,P53蛋白在低分化食管癌、Ⅰ+Ⅱ期食管癌、沒有淋巴結轉移的食管癌中表達沒有顯著增加(p0.05)。跟中高分化食管癌、Ⅲ+Ⅳ期食管癌相比,Akt,p-Akt1,p-Akt2蛋白在低分化食管癌、Ⅰ+Ⅱ期食管癌中表達沒有顯著增加(p0.05);在有淋巴結轉移的食管癌中Akt,p-Akt1,p-Akt2蛋白表達顯著增加(p0.05,提示Akt蛋白的兩個亞型參與了食管癌細胞再淋巴結內(nèi)的轉移。和對照組相比,使用P53抑制劑Pifithrin-α的食管癌TE-1細胞P53、Akt、p-Akt1表達量明顯下降(p=0.002,p=0.032,p=0.016);p-Akt2表達量沒有明顯下降(p=0.133);使用p-akt1抑制劑A-674563后P53、Akt、p-Akt1表達量明顯下降(p=0.004,p=0.004,p=0.011);p-Akt2表達量沒有明顯下降(p=0.519)。使用 p-akt2 抑制劑 CCT128930 后 P53、Akt、p-Akt1、p-Akt2 表達量明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(p=0.014,p=0.013,p=0.010,p=0.005)。在50例食管癌組織標本中均未測出有R175H、H179R、R248Q和R273H位置的突變。結論食管癌較正常組織表達更多的P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白,Akt1和Akt2蛋白可能參與了食管癌細胞的淋巴結轉移。異于正常組織里P53和Akt之間的相互抑制關系,在食管癌細胞內(nèi)P53蛋白和Akt1、Akt2蛋白互為促進,共同介導了腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展。但是蛋白之間這一相互關系的變化并不是p53基因發(fā)生突變出現(xiàn)p53R175H、H179R、R248Q和R273H突變體的原因,仍需進一步的研究闡明其機理。
【圖文】：

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圖３邋ｐ－Ａｋｔｌ蛋白在食管癌組織中表達邐圖４邐ｐ－Ａｋｔ２蛋白在食管癌組織中表達逡逑為陽性（ｘ邋２００）邐為陽性（ｘ邋２００）逡逑表１邋Ｐ５３蛋白在食管癌及癌旁組織中的表達逡逑ｍ＼邐Ｍｌ邐Ｐ５３邐Ｐ逡逑ｍ±邐ｉｌ逡逑癌組織邐５０邐＾邐２４邐Ｍ0２逡逑癌旁粘膜邐５０邐１１邐３９逡逑表２邋Ａｋｔ蛋白在食管癌及癌旁組織中的表達逡逑ｍ＼邐Ｍｌ邐Ａｋｔ邐ｐ逡逑ｉｌ邐ｉｌ逡逑
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.1

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本文編號：2572017