【摘要】：背景及目的盡管人類乳頭瘤狀病毒疫苗的廣泛應(yīng)用和宮頸癌的定期篩查,宮頸癌仍是造成全球婦女死亡的最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率呈年輕化趨勢。因此探尋宮頸癌的發(fā)病機制及尋找新的治療方法顯得尤為迫切。腫瘤相關(guān)成纖維細胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)是腫瘤微環(huán)境中最主要的細胞,與肌成纖維細胞相似,在細胞形態(tài)和生物學行為上具有平滑肌細胞和成纖維細胞的雙重特性。它可以分泌多種細胞因子,促使腫瘤上皮細胞的惡性轉(zhuǎn)化與進展。盡管不同類型的間質(zhì)細胞和上皮細胞被認為是CAFs的前體細胞,但宮頸癌相關(guān)成纖維細胞的確切來源及其機制目前仍不清楚。人轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor,TGF-β1)廣泛存在于組織中,在誘導肌成纖維細胞表型形成中具有重要作用,它能上調(diào)體內(nèi)和體外成纖維細胞中平滑肌肌動蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的含量。研究證實,在宮頸癌上皮細胞中可見大量的TGF-β1的表達,明顯高于正常宮頸上皮細胞和宮頸上皮內(nèi)瘤變上皮細胞。TGF-β1在宮頸癌中的過表達可能成為CAFs轉(zhuǎn)化的潛在機制。但CAFs的轉(zhuǎn)化是否依賴于TGF-β1目前尚不明確。本研究旨在分離純化并鑒定CAFs,初步探討CAFs的生物學特性。研究TGF-β1在宮頸癌相關(guān)成纖維細胞生成中的作用。材料和方法1.用膠原酶消化法分離正常宮頸成纖維細胞(normal fibroblasts,NFs)和CAFs;在倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài);用CCK-8法測定細胞生長曲線;免疫熒光法及蛋白質(zhì)印跡法檢測細胞標志物波形蛋白(Vimentin)、α-SMA和成纖維細胞活化蛋白(fibroblast activation proteinα,FAPα)。2.ELISA法檢測CAFs和Hela細胞共培養(yǎng)、Hela、CAFs細胞上清液中TGF-β1的水平。3.重組人TGFβ1處理NFs,設(shè)空白對照組,72h后收集成纖維細胞,免疫熒光法及蛋白質(zhì)印跡法檢測細胞標志物α-SMA和FAPα。4.統(tǒng)計學處理:采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(`x±s)表示。組間比較采用非參數(shù)檢驗。檢驗水準α=0.05。P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1.成功分離出CAFs和NFs,鏡下可見CAFs大小、形狀不一,密度抑制和接觸抑制消失。NFs大小、形狀一致,存在密度抑制和接觸抑制。CAFs的生長速度快于NFs(Z=㧟2.160,P=0.031)。CAF高表達α-SMA和FAPα,而NFs不表達α-SMA和FAPα,兩者均表達Vimentin。2.CAFs和Hela細胞共培養(yǎng)、CAFs、Hela細胞上清液中TGF-β1的濃度分別為1087.26.54±71.42 ng/L,449.93±19.99 ng/L,703.29±27.34 ng/L。3.TGF-β1處理組高表達FAPα和α-SMA;空白對照組不表達FAPα和α-SMA。結(jié)論1.CAFs具有平滑肌細胞和成纖維細胞雙重特性,其增殖能力強于NFs。2.TGF-β1可在體外誘導NFs向?qū)m頸癌相關(guān)成纖維細胞轉(zhuǎn)變。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33

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本文編號：2567569