【摘要】：研究背景及目的:膽囊癌是一種原發(fā)于膽囊的惡性腫瘤,早期診斷困難,手術(shù)根治性切除率低,同時(shí)對(duì)化療藥物相對(duì)不敏感,預(yù)后差,術(shù)后易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。因此研究出針對(duì)膽囊癌治療的新手段尤為重要。楊梅素是從楊梅科屬植物的葉、皮及根中提取出來的一種黃酮類化合物,臨床上可用于消炎、抗氧化、止痛、降低血糖和保護(hù)肝臟等多種治療。近年來,各種研究表明藥物楊梅素在抗癌方面也有明顯的效果。因此,本研究目的是探討楊梅素體外對(duì)膽囊癌NOZ細(xì)胞的凋亡效應(yīng)及其作用機(jī)制,為膽囊癌化療提供新的途徑。方法:本研究是通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)完成的。設(shè)實(shí)驗(yàn)組(加楊梅素)及對(duì)照組(未加楊梅素)進(jìn)行比較。通過CCK8實(shí)驗(yàn)及單克隆實(shí)驗(yàn)觀察楊梅素對(duì)膽囊癌NOZ細(xì)胞的增殖抑制作用;利用流式細(xì)胞儀分析楊梅素對(duì)膽囊癌NOZ細(xì)胞凋亡的影響;采用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)楊梅素作用前后線粒體調(diào)往途徑中相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.楊梅素可明顯抑制膽囊癌NOZ細(xì)胞的增殖及克隆能力。隨著楊梅素作用濃度的增加及孵育時(shí)間的延長(zhǎng),其殺傷細(xì)胞的能力顯著增加。2.楊梅素可誘導(dǎo)膽囊癌NOZ細(xì)胞發(fā)生凋亡。與對(duì)照組比較,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率明顯上升,且其晚期凋亡率的上升更加顯著。3.楊梅素通過調(diào)控Bax、Cytc、PARP及Bcl-2蛋白的表達(dá)來誘導(dǎo)膽囊癌NOZ細(xì)胞凋亡程序的運(yùn)行。結(jié)論:1.楊梅素對(duì)膽囊癌NOZ細(xì)胞有明顯的抑制效果,具有劑量、時(shí)間依賴性。2.隨著楊梅素濃度增加,膽囊癌NOZ細(xì)胞凋亡率明顯增加,同時(shí)其晚期凋亡率上升更加顯著。3.楊梅素誘導(dǎo)膽囊癌NOZ細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與Bcl-2家族介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑有關(guān),但其具體機(jī)制還需進(jìn)一步探討。本研究旨在為膽囊癌深入全面的研究提供參考,以及為膽囊癌藥物化療提供新的方向。
【圖文】：

素對(duì)膽囊癌 NOZ 細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響：實(shí)驗(yàn)將 6 個(gè)濃度的楊梅素（10、20、40、60、80、100 umol/L）加胞中，，分別記錄 24、48、72h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖的情況，通過度楊梅素三個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)細(xì)胞增殖的影響（圖 1），結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1）當(dāng)mol/L 以下時(shí)，該藥對(duì)膽囊癌 NOZ 細(xì)胞無明顯抑制效果；2）當(dāng)楊mol/L 時(shí)，該藥對(duì)膽囊癌 NOZ 細(xì)胞的抑制效果超過了 80%，且存楊梅素濃度也不能再明顯提升其抑制效果；3）當(dāng)楊梅素濃度在 2 之間時(shí)，該藥對(duì)膽囊癌 NOZ 細(xì)胞有明顯的抑制效果，且呈現(xiàn)劑量素作用濃度相同時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，該藥對(duì)細(xì)胞抑制效果越性。通過細(xì)胞生長(zhǎng)抑制曲線顯示：24、48、72h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn) IC50（為 50、45、38umol/L，于是選擇最適濃度 40 umol/L 及最有效濃度完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)；選擇較為穩(wěn)定的 48h 這個(gè)點(diǎn)作為最佳研究時(shí)間。

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文在不同濃度的楊梅素（40、80umol/L）作用于膽囊癌 NOZ 細(xì)胞 48h 后置于光鏡下進(jìn)行觀察(圖 2)。圖中顯示：相對(duì)于對(duì)照組而言，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞數(shù)目減少，且楊梅素濃度越大細(xì)胞數(shù)目減少越明顯，提示楊梅素對(duì)細(xì)胞造成了破壞，猜測(cè)其可能誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生了凋亡。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.8

【參考文獻(xiàn)】

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4 張秀娟;侯U

本文編號(hào)：2565172