發(fā)布時(shí)間：2019-09-25 09:32

【摘要】：目的:探討P53抑制肺腺癌A549細(xì)胞干細(xì)胞特性及其機(jī)制。方法:收集2014年3月至2015年12月解放軍第85醫(yī)院胸外科手術(shù)切除的30例非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)患者癌組織及癌旁組織,采用Real-time PCR檢測(cè)NSCLC組織和癌旁組織中miR-145的表達(dá)。構(gòu)建人P53基因的真核表達(dá)載體(pcDNA3.1-P53)和突變載體[pcDNA3.1-P53R273H(CGT-CAT)],設(shè)計(jì)靶向P53基因的siRNA,分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞;細(xì)胞分為對(duì)照轉(zhuǎn)染組(Vector或NCsiRNA)和實(shí)驗(yàn)組(Flag-P53或P53-siRNA);Western blotting檢測(cè)P53蛋白過(guò)表達(dá)和干擾效率,Real-time PCR檢測(cè)OCT4和miR-145的表達(dá),熒光雙報(bào)告基因和Western blotting技術(shù)檢測(cè)證實(shí)A549細(xì)胞中干細(xì)胞多能性調(diào)節(jié)基因(OCT4)為miR-145的靶標(biāo)分子。結(jié)果:NSCLC組織中miR-145的表達(dá)水平明顯低于癌旁組織[(2.31±0.13)vs(3.51±0.27),P0.01];P53明顯促進(jìn)A549細(xì)胞中miR-145的表達(dá)[(1.84±0.14)vs(1.00±0.00),P0.01];miR-145 mimics顯著抑制A549細(xì)胞中pGL3-OCT4-3′-UTR活性(P0.01)和OCT4蛋白表達(dá)水平(P0.05),而轉(zhuǎn)染miR-145抑制劑可進(jìn)一步增加OCT4表達(dá)水平,且逆轉(zhuǎn)P53對(duì)A549細(xì)胞的干細(xì)胞特性的抑制作用。結(jié)論:P53通過(guò)促進(jìn)miR-145表達(dá)下調(diào)OCT4表達(dá),進(jìn)而明顯抑制A549細(xì)胞的干細(xì)胞特性,該結(jié)果為肺腺癌的臨床診斷和治療提供了新途徑。
【圖文】：

１４５識(shí)別位點(diǎn)序列ＡＡＣＴＧＧ突變?yōu)椋裕裕牵粒茫缅澹＿姡ｅ澹ｅ义希校茫义鍞U(kuò)增引物：ＯＣＴ４－ＵＴＲ－Ｋｐｎ邋Ｉ：邋５＇－ｃ卿ｇｔａｃｃ邋ＧＧＴ－邋２．邋１邐Ｐ５３邋抑制邋Ａ５４９邋細(xì)胞邋ＯＣ７￥邋和邋Ｓｏ％２邋ｍＲＮＡ邋表達(dá)逡逑ＧＣＣＴＧＣＣＣＴＴＣＴＡＧＧＡＡＴＧ－３＇和邋ＯＣＴ４－ＵＴＲ－ＪＳ７ｉｏ邋Ｉ邋：邐Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ（圖邋１Ａ）和邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｔｉｎｇ邋檢測(cè)逡逑５邋＾－ｃｃｇｃｔｃｇａｇ邋ＴＡＡＧＴＧＴＧＴＣＴＡＴＣＴＡＣＴＧＴＧ－３＇；引物邐結(jié)果（圖１Ｂ）顯示，Ａ５４９細(xì)胞中過(guò)表達(dá)尸５３蛋白后逡逑０ＣＴ４（ｍｕ）邋３邋（－ＵＴＲ，邋Ｆ邋：５１邋－ＧＧＧＡＧＴＴＴＧＧＧＧＣＴＴＧＡＣ－邐ｍＲＮＡ邋和邋Ｓｏ：＊２邋ｍＲＮＡ邋表達(dá)水平較空載體轉(zhuǎn)染逡逑ＣＴＴＧＧＡＧＧＧＡＡＧＧＴＧＡ－３，和邋Ｒ：邋５，－ＴＣＡＣＣＴＴＣＣＣＴ邐組（Ｖｅｃｔｏｒ）顯著降低［（０＿邋４９邋±邋０？邋０７）和（０．邋７１邋±逡逑ＣＣＡＡＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＣＣＴ－３’。邐０．邋０６）邋ｗ邋（１．００邋±邋０．邋００），均邋Ｐ邋＜邋０．邋０１邋］。與對(duì)照組逡逑２９３Ｔ細(xì)胞報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)分組：（１）對(duì)照組：邐ＮＣ－ｓｉＲＮＡ相比，轉(zhuǎn)染ｓｉＲＮＡ抑制Ｐ５３邋ｍＲＮＡ水平逡逑ｖｅｃｔｏｒ（轉(zhuǎn)染報(bào)告載體ｐＧＬ３－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ邋Ｒｅｐｏｒｔｅｒ空載邋后，ＯＣＴ４和Ｓｏａ：２邋ｍＲＮＡ的表達(dá)水平顯著升高逡逑體、內(nèi)參載體邋ｐＲＬ－ＴＫ邋和邋Ｃｔｒｌ－ｍｉｍｉｃｓ邋或邋ｍｉＲ１４５－ｍｉｍ－邋［邋（３．邋９９邋±０．３８）和（２．邋３６邋±０．２１）邐（１．００邋±０．００），逡逑ｉｃｓ）邋；邋（２）實(shí)驗(yàn)組：ＯＣ

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【作者單位】： 解放軍第85醫(yī)院肺科;
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2541372