【摘要】：目的腫瘤是嚴重危害人類健康的重大疾病,每年都有數(shù)以百萬計的人死于腫瘤。腫瘤的治療方法為手術(shù)、化療和放療。但這些治療方法靶向性差,除了殺死腫瘤細胞外,正常細胞也被殺死,導(dǎo)致患者不能耐受治療。因此,從天然產(chǎn)物中尋找高效、低毒的抗腫瘤藥物是目前科研工作者的任務(wù)之一。美洲大蠊是傳統(tǒng)的動物類中藥,具有抗炎、抗腫瘤等作用,但其抗腫瘤的機制仍然不清楚。本研究通過采用美洲大蠊精制物CⅡ-3及其相關(guān)合成短肽HFDT1對L1210荷瘤小鼠的抗腫瘤作用及免疫器官、免疫細胞和免疫因子等免疫指標的影響,探討美洲大蠊精制物CⅡ-3及其相關(guān)合成短肽HFDT1對L1210荷瘤小鼠抑瘤及免疫功能的影響。方法采用BALB/c小鼠建立L1210實體瘤模型,將小鼠隨機分為空白對照組、荷瘤對照組、環(huán)磷酰胺(CTX)組、CⅡ-3高、低劑量組、HFDT1組,共6組。各組連續(xù)給藥10d(空白對照組與荷瘤對照組,給予生理鹽水灌胃,20m L/kg,1次/天;CⅡ-3高、低劑量組給予20m L/kg,1次/天;HFDT1組給予7.8mg/m L腹腔注射,10mL/kg,1次/天;CTX組給予45mg/kg腹腔注射,10mL/kg,1次/隔天)。常規(guī)飼養(yǎng),觀察小鼠體重變化。末次給藥后次日,稱重后處死小鼠,測定各組荷瘤小鼠瘤體重量變化、抑瘤率和各組的胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)變化;采用血細胞分析儀測定L1210荷瘤小鼠外周血免疫細胞數(shù)量;采用雙抗體夾心ELISA法研究CⅡ-3及HFDT1對L1210荷瘤小鼠血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA水平的影響;研究CⅡ-3及HFDT1對L1210荷瘤小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響;采用流式細胞術(shù)分析CⅡ-3及HFDT1對L1210荷瘤小鼠固有免疫細胞(巨噬細胞、NK、DC),T細胞及其亞群,B細胞及其亞群的影響;采用CFSE標記法研究CⅡ-3及HFDT1對L1210荷瘤小鼠脾T、B淋巴細胞增殖的影響;采用流式細胞術(shù)測定腫瘤組織和脾臟Th1/Th2反應(yīng);采用ELISA法研究CⅡ-3及HFDT1對L1210荷瘤小鼠腹腔巨噬細胞分泌TNF-α,腫瘤相關(guān)淋巴細胞分泌IFN-γ、IL-4,脾臟淋巴細胞分泌IL-2,IL-4,IL-10,IL-17,IFN-γ的影響。結(jié)果1、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1在體內(nèi)對L1210腫瘤細胞有較好的抑制作用,CTX、CⅡ-3高劑量、CⅡ-3低劑量、短肽HFDT1的抑瘤率分別為59.57%、55.32%、65.32%、61.70%。與CTX組比,CⅡ-3及HFDT1小鼠體重增加(P0.05)。2、與模型組和CTX組比較,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1均提高小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)(P0.05)。3、與CTX組比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可增加荷瘤小鼠外周血中白細胞、淋巴細胞、單核細胞和粒細胞的數(shù)量。4、與CTX組比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可增加血清IgA、IgG、IgM水平(P0.05)。5、與模型組和CTX組比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1能夠使脾臟巨噬細胞數(shù)量增多;與模型組比,CⅡ-3及HFDT1使腹腔巨噬細胞吞噬指數(shù)及吞噬百分數(shù)升高,HFDT1組升高明顯(P0.05);CⅡ-3及HFDT1能腹腔巨噬細胞分泌TNF-α增加(P0.05)。美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1均能使脾臟NK、DC細胞數(shù)量增加。與模型組與CTX組比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1下調(diào)腫瘤組織Th17細胞,上調(diào)脾臟Th17細胞。6、CⅡ-3及HFDT1能夠維持脾臟淋巴細胞數(shù)量,上調(diào)T細胞,下調(diào)B細胞。與模型組比,改變CD4/CD8 T細胞比例,下調(diào)CD4+T細胞,上調(diào)CD8+T細胞,其中CⅡ-3低劑量組CD4+T細胞明顯減少,CD8+T細胞明顯增多。與CTX組比,CⅡ-3及HFDT1能夠使起到負調(diào)控的Treg細胞明顯減少,初始T細胞(CD45RA+細胞)減少,其中CⅡ-3低劑量組Treg下降明顯,HFTD1組CD45RA+下降明顯。7、腫瘤組織與脾臟中淋巴細胞Th1/Th2反應(yīng)是一致的,與模型組和CTX組比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1均能夠調(diào)節(jié)Th1/Th2反應(yīng),上調(diào)Th1反應(yīng),下調(diào)Th2反應(yīng)。從細胞因子變化水平來看,與模型組比,CⅡ-3及HFDT1均能使腫瘤浸潤淋巴細胞分泌IFN-γ增加、IL-4減少,其中HFDT1組IFN-γ明顯升高,CⅡ-3低劑量組IL-4較CTX組明顯減少;與CTX組比,CⅡ-3及HFDT1均能使脾臟淋巴細胞IFN-γ、IL-2分泌增加,IL-4、IL-10分泌減少。8、CⅡ-3低劑量及HFDT1能增加成熟B細胞(IgM-IgDhi)和活化B細胞(CD45RA-)的數(shù)量。與模型組和CTX組比,CⅡ-3及HFDT1能夠促進B淋巴細胞增殖。結(jié)論1、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1能抑制L1210荷瘤小鼠體內(nèi)腫瘤的生長,CⅡ-3及其相關(guān)合成肽HFDT1對荷瘤小鼠體重無影響。2、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可以增強荷瘤小鼠免疫器官功能、增強外周血免疫細胞數(shù)量與免疫球蛋白水平。3、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可以上調(diào)抗腫瘤NK細胞、巨噬細胞、DC、Th1、CTL細胞,同時抑制負調(diào)控Th2、Treg、Th17細胞。4、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可以調(diào)節(jié)Th1/Th2反應(yīng),增強抗腫瘤細胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌及促進淋巴細胞增殖�？傊�,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1的抗腫瘤作用可能是通過調(diào)控機體的免疫功能來發(fā)揮作用的。
【圖文】：

組分別給予 400mg/kg、200mg/kg 灌胃，20mL/kg，1 次/d；.8mg/kg腹腔注射，10mL/kg，1 次/d；CTX劑量給予 45mg/kgg，1 次/隔天；模型組及正常組給予生理鹽水灌胃，20mL/k藥 10d。荷瘤小鼠腫瘤抑制率的測定末次給藥次日，稱各組小鼠體重，小鼠眼底靜脈叢取血后頸 75% 酒精中 3-5min。用無菌紙巾擦干小鼠，放入超凈臺中。整剝離瘤塊組織，，精確稱重并按公式計算抑瘤率。公式如下抑瘤率=（1－實驗組瘤重/模型組瘤重）×100%果CⅡ-3 及 HFDT1 對荷瘤小鼠體重的影響

瘤塊肉眼觀A排從左到右依次為模型組、CTX組；B排從左到右依次為CⅡ-3高劑量組、CⅡ-3低劑量組、HFDT1組；上圖所示為各組中的一個典型個體
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R73-36

【參考文獻】

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本文編號：2534646