【摘要】：目的探討Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促進人胃癌細胞遷移和侵襲中的作用及相互關系。方法實驗設正常對照組(細胞未作其他處理)、人乙酰肝素酶重組蛋白處理組(5、10μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特異性抑制劑pp2(5μmol/L)或p38激酶特異性抑制劑SB 203580(1μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重組蛋白(10μg/ml)作用24h組。利用劃痕損傷實驗和Transwell小室基質侵襲實驗分別檢測各處理組對人胃癌MGC-803細胞遷移和侵襲能力的影響;Western blot法檢測各處理組對人胃癌MGC-803細胞、高表達乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901細胞和乙酰肝素酶表達被下調的SGC-7901-Heparanasel(-)細胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表達的影響。結果與正常對照組比較,5和10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白均能明顯增強人胃癌MGC-803細胞遷移和侵襲能力(P0.05);與未加抑制劑的人乙酰肝素酶重組蛋白比較,抑制劑pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重組蛋白增強的人胃癌MGC-803細胞的遷移和基質侵襲能力(P0.05)。10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白促進人胃癌MGC-803細胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)細胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表達水平較SGC-7901細胞明顯下調(P0.01);抑制劑pp2和SB 203580對人胃癌SGC-7901細胞中乙酰肝素酶蛋白表達無明顯影響;在人胃癌SGC-7901細胞和MGC-803細胞中,Src激酶的抑制劑pp2抑制磷酸化p38蛋白的表達,而p38激酶的抑制劑SB 203580對磷酸化Src蛋白表達無明顯影響。結論乙酰肝素酶可能通過促進Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促進Src激酶磷酸化再促進p38激酶的磷酸化,從而促進人胃癌細胞遷移和侵襲能力。乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌細胞內存在的與細胞遷移和侵襲有關的信號轉導通路。
【圖文】：

組蛋白對人胃癌MGC-803細胞的遷移和基質侵襲能力的影響用5μmol/LSrc激酶的特異性抑制劑pp2或1μmol/Lp38激酶特異性抑制劑SB203580預處理人胃癌MGC-803細胞3h后，再加入10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白作用24h，經(jīng)劃痕遷移實驗顯示，人胃癌MGC-803細胞的遷移距離較單純由10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白作用24h的人胃癌MGC-803細胞遷移距離明顯變短(t=－13.00、－11.92，P＜0.01)(圖2A);經(jīng)Transwell小室試驗顯示，人胃癌MGC-803細胞穿過小室的細胞數(shù)較單純由10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白作用24h后穿過小室的細胞數(shù)明顯減少(t=－85.23、－83.93，P＜0.01)(圖2B)�？梢�，Src激酶的特異性抑制劑pp2和p38激酶特異性抑制劑SB203580均能削弱人乙酰肝素酶重組蛋白增強人胃癌MGC-803細胞的遷移和基質侵襲能力。圖2抑制Src激酶和p38激酶后人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細胞遷移和基質侵襲能力的影響A:人胃癌MGC-803細胞相對遷移距離;B:人胃癌MGC-803細胞侵襲能力;1:10μg/ml處理組;2:pp2+處理組;3:SB203580+處理組;與10μg/ml處理組比較:＊＊P＜0.012．3人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細胞中p-Src和p-p38蛋白表達的影響經(jīng)Westernblot檢測顯示，與正常對照組相比，10μg/ml處理組作用人胃癌MGC-803細胞24h后，p-Src和p-p38蛋白表達均明顯升高(t=13.85、20.11，P＜0.01)，而Src和p38蛋白表達均無明顯變化(圖3)。圖3Westernblot法檢測人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細胞p-Src和p-p38蛋白表達的影響1:正常對照組;2:10μg/ml處理組;與正常對照組比較:＊＊P＜0.012．4SGC-7901-Heparanasel(－)細胞中p-Src和p-p38蛋白的表達Westernblot檢測顯示，與高表達乙?

艘陰８嗡孛鋼刈櫚鞍錐?人胃癌MGC-803細胞遷移和基質侵襲能力的影響A:人胃癌MGC-803細胞相對遷移距離;B:人胃癌MGC-803細胞侵襲能力;1:10μg/ml處理組;2:pp2+處理組;3:SB203580+處理組;與10μg/ml處理組比較:＊＊P＜0.012．3人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細胞中p-Src和p-p38蛋白表達的影響經(jīng)Westernblot檢測顯示，與正常對照組相比，10μg/ml處理組作用人胃癌MGC-803細胞24h后，p-Src和p-p38蛋白表達均明顯升高(t=13.85、20.11，P＜0.01)，而Src和p38蛋白表達均無明顯變化(圖3)。圖3Westernblot法檢測人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細胞p-Src和p-p38蛋白表達的影響1:正常對照組;2:10μg/ml處理組;與正常對照組比較:＊＊P＜0.012．4SGC-7901-Heparanasel(－)細胞中p-Src和p-p38蛋白的表達Westernblot檢測顯示，與高表達乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901細胞相比，SGC-7901-Heparanasel(－)細胞中p-Src和p-p38蛋白表達明顯下降(t=－24.78、－44.52，P＜0.01)(圖4)。2．5Src激酶和p38激酶特異性抑制劑對人胃癌SGC-7901細胞中乙酰肝素酶蛋白表達的影響5μmol/Lpp2和1μmol/LSB203580作用人胃癌SGC-7901細胞24h后，，經(jīng)Westernblot檢測顯示，人胃癌SGC-7901細胞中乙酰肝素酶蛋白的表達無明顯變化(圖5)。2．6Src激酶特異性抑制劑對人胃癌細胞中p-p38蛋白表達的影響和p38激酶特異性抑制劑對人胃癌細胞中p-Src蛋白表達的影響經(jīng)Westernblot檢測顯示，5μmol/L的pp2作用人胃癌SGC-7901和MGC-803細胞24h后，細胞中p-p38蛋白表達均明顯降低(t=－13.47、－25.76，P＜0.01)(圖6)。而1μmol/L的SB203580作用人胃癌SGC-7901和·948·安徽醫(yī)科大學學報ActaUniversitatisM
【作者單位】： 內蒙古醫(yī)科大學附屬醫(yī)院病理科;
【基金】：國家自然科學基金(編號:30660065) 中支地學校匹配經(jīng)費(編號:X206017001)
【分類號】：R735.2

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本文編號：2519211