【摘要】：目的:探索CA12的表達與乳腺癌紫杉醇耐藥細胞的相關性;并觀察CA12-siRNA對乳腺癌細胞凋亡以及紫杉醇敏感性的影響,試圖為紫杉醇耐藥乳腺癌細胞的治療提供新的策略。方法:體外培養(yǎng)正常乳腺細胞(MCF-10)、乳腺癌細胞(MCF-7)及乳腺癌紫杉醇耐藥細胞(MCF-7TaxR),并將后兩者各自分為三組:實驗組(CA12-siRNA)、陰性對照組(Scramble-siRNA)以及空白對照組(DMSO)1、western blot 的方法檢測 CA12-siRNA 轉染前后 MCF-10、MCF-7 及 MCF-7 TaxR中CA12的表達2、MTT法檢測MCF-7 TaxR在CA12-siRNA轉染前后紫杉醇的敏感性。3、相差顯微鏡及經(jīng)Hoechst 33342染色后,熒光倒置相差顯微鏡以及流式細胞儀檢測單純轉染siRNA及siRNA聯(lián)合紫杉醇兩種處理方法下,MCF-7及MCF-7 TaxR各組細胞凋亡情況。4、western blot檢測經(jīng)線粒體途徑介導的凋亡相關蛋白表達量。結果:1、相較于MCF-10組,CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR組中高表達,組間兩兩比較結果具有統(tǒng)計學差異。2、經(jīng)攜帶CA12的siRNA轉染后,CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR實驗組中表達量下降,相較于兩對照組(空白+陰性)結果有統(tǒng)計學意義(P0.01)。3、CA12-siRNA轉染細胞與紫杉醇共同培養(yǎng)48小時,MCF-7 TaxR的實驗組較兩對照組(空白+陰性)紫杉醇敏感性降低,結果具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、CA12-siRNA轉染細胞與紫杉醇共同培養(yǎng)48小時,實驗組較兩對照組(空白+陰性)細胞凋亡數(shù)增多,結果具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5、CA12-siRNA轉染細胞與紫杉醇培養(yǎng)48小時,用western blot的方法檢測線粒體通路相關蛋白的表達,MCF-7 TaxR細胞的結果顯示實驗組與兩對照組(空白+陰性)相比,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表達量明顯下調,而促凋亡蛋白Bax、Bid的表達明顯增加,同時下游效應分子caspase-9、caspase-7和PARP的活化蛋白Cleavedcaspase-7、Cleavedcaspase-9、CleavedPARP 表達也明顯增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:CA12在乳腺癌細胞MCF-7及乳腺癌紫杉醇耐藥細胞MCF-7 TaxR中高表達,表明CA12的表達與乳腺癌相關,且與耐藥相關。其表達可以被CA12-siRNA特異性敲低。CA12的沉默聯(lián)合紫杉醇可以經(jīng)激活線粒體細胞凋亡通路,促使MCF-7 TaxR細胞凋亡,增加乳腺癌紫杉醇耐藥細胞對于紫杉醇的敏感性。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

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1 黃婷;CA12-siRNA對乳腺癌紫杉醇耐藥細胞株MCF-7 TaxR凋亡和耐藥的影響[D];遵義醫(yī)學院;2017年

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本文編號：2516929