【摘要】：乳腺癌是女性中常見的一種惡性腫瘤,發(fā)病率很高,并且呈現出逐年上升的趨勢。乳腺癌骨轉移的發(fā)生率高且難以治療,在尸檢中發(fā)現有90%以上的乳腺癌死亡患者有骨轉移。以手術為主的乳腺癌綜合治療方法雖然取得較好的療效,但仍存在一定的局限性,轉移仍是引起腫瘤術后復發(fā)的主要因素。因此深入研究乳腺癌骨轉移的分子機制,尋找特異性靶向治療位點具有重要意義。整合素αvβ3是一種能特異性識別RGD序列的膜受體蛋白,可特異性的與含RGD(Arg-Gly-Asp)基序的蛋白質結合,在腫瘤細胞的粘附、遷移、浸潤及腫瘤血管新生中起重要作用。骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)是存在于細胞外基質中的一種高度磷酸化和糖基化的非膠原蛋白。BSP在親骨轉移乳腺癌、肺癌、前列腺癌細胞中異常表達,多項研究提示BSP在腫瘤靶向骨轉移的進程中發(fā)揮重要作用。目前研究認為BSP通過與細胞膜αvβ3整合素受體結合可引發(fā)一系列細胞生物學效應。本課題組前期研究發(fā)現BSP通過整合素αvβ3調控親骨轉移乳腺癌細胞MDA-MB-231BO(231BO)的ILK信號通路,并影響細胞增殖;我們近期的實驗結果還表明231BO細胞中BSP和αvβ3整合素表達水平之間存在一定的相關性,即BSP基因沉默的乳腺癌細胞(231BO-BSP27)中αvβ3整合素表達水平下降。但BSP和αvβ3整合素在臨床乳腺癌組織中表達的相關性以及BSP是否依賴αvβ3整合素調控乳腺癌細胞轉移并不清楚。本研究采用免疫組織化學方法分析BSP和αvβ3整合素在乳腺浸潤性導管癌組織標本中表達的相關性;構建β3慢病毒表達載體,轉染231BO-BSP27乳腺癌細胞,通過免疫細胞化學、流式細胞技術和Western Blot檢測β3蛋白表達水平,篩選獲得BSP-/β3+乳腺癌細胞株(231BO-BSP27/β3)。應用CCK8法、劃痕實驗、Transwell法體外檢測細胞的增殖、遷移、侵襲能力,探究在BSP基因沉默的乳腺癌細胞中,回復表達β3整合素對乳腺癌細胞轉移生物學性質的影響,以期初步揭示BSP通過調控β3整合素表達影響乳腺癌骨轉移的分子機制。本實驗的主要研究結果如下:1.通過61例乳腺浸潤性導管癌組織的免疫組化檢測,結果提示BSP和整合素αv、β3在癌組織中的表達呈正相關。2.采用β3慢病毒載體轉染231BO-BSP27,經新霉素篩選,獲得穩(wěn)定表達β3整合素的231BO-BSP27/β3細胞系。3.與231BO-BSP27細胞相比,流式細胞檢測結果表明231BO-BSP27/β3細胞中β3表達量增高(89.705±0.456,P0.05);Western Blot檢測也證實231BO-BSP27/β3細胞的β3蛋白表達量(0.428±0.013)高于231BO-BSP27細胞(0.237±0.012)。免疫細胞化學檢測231BO-BSP27/β3細胞顯示β3呈強陽性表達,表達部位主要在胞膜和胞漿。4.體外細胞生物學實驗結果提示231BO-BSP27/β3細胞生長速率、細胞遷移和侵襲能力均高于231BO-BSP27組細胞。
[Abstract]:Breast cancer is a common malignant tumor in women, the incidence is very high, and showing an upward trend year by year. The incidence of bone metastasis in breast cancer is high and difficult to treat. More than 90% of breast cancer patients died of bone metastasis during autopsies. Although the comprehensive treatment of breast cancer based on operation has achieved good curative effect, there are still some limitations, and metastasis is still the main factor leading to postoperative recurrence of breast cancer. Therefore, it is of great significance to study the molecular mechanism of bone metastasis of breast cancer and to find specific targeted therapeutic sites. Integrin 偽 v 尾 3 is a membrane receptor protein which can specifically recognize RGD sequence. It can specifically bind to proteins containing RGD (Arg-Gly-Asp) motif and play an important role in tumor cell adhesion, migration, invasion and tumor angiogenesis. Bone sialic acid protein (bone sialoprotein,BSP) is a highly phosphorylation and glycosylated non-collagen protein in extracellular matrix. BSP is abnormally expressed in breast cancer, lung cancer and prostate cancer cells. Many studies suggest that BSP plays an important role in the process of tumor targeted bone metastasis. At present, it is suggested that BSP can induce a series of cell biological effects by binding to 偽 v 尾 3 integrin receptor in cell membrane. Our previous study found that BSP regulated the ILK signaling pathway of osteophilic breast cancer cell line MDA-MB-231BO (231BO) through integrin 偽 v 尾 3, and affected the proliferation of breast cancer cells. Our recent results also showed that there was a certain correlation between the expression of BSP and 偽 v 尾 3 integrin in 231BO cells, that is, the expression of 偽 v 尾 3 integrin decreased in BSP gene silenced breast cancer cells (231BO-BSP27). However, the correlation between the expression of BSP and 偽 v 尾 3 integrin in clinical breast cancer and whether BSP depends on 偽 v 尾 3 integrin to regulate the metastasis of breast cancer cells is not clear. In this study, the correlation between the expression of BSP and 偽 v 尾 3 integrin in invasive ductal carcinoma of breast was analyzed by immunohistochemistry. The expression vector of 尾 3 lentivirus was constructed and transfected into 231BO-BSP27 breast cancer cells. BSP-/ 尾 3 breast cancer cell line (231BO-BSP27/ 尾 3) was screened by immunocytochemistry, flow cytometry and Western Blot. CCK8 assay, scratch test and Transwell assay were used to detect the proliferation, migration and invasion of breast cancer cells in vitro, and to explore the effect of 尾 3 integrin expression on the biological properties of breast cancer cell metastasis in breast cancer cells silenced by BSP gene. In order to reveal the molecular mechanism of BSP affecting bone metastasis of breast cancer by regulating the expression of 尾 3 integrin. The main results of this experiment are as follows: 1. The results showed that the expression of BSP and integrin 偽 v, 尾 3 in 61 cases of invasive ductal carcinoma of breast was positively correlated with the expression of integrin 偽 v, 尾 3 in breast invasive ductal carcinoma. 2. 231BO-BSP27/ 尾 3 cell line stably expressing 尾 3 integrin was obtained by transfection of 231BO / BSP27 with 尾 3 lentivirus vector. Compared with 231BO-BSP27 cells, flow cytometry showed that the expression of 尾 3 in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells was higher than that in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells (89.705 鹵0.456, P 0.05). Western Blot also confirmed that the expression of 尾 3 protein in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells (0.428 鹵0.013) was higher than that in 231BO-BSP27 cells (0.237 鹵0.012). The expression of 尾 3 in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells was strongly positive by immunocytochemistry, and the expression site was mainly in the membrane and cytoplasm. 4. The results of cell biology in vitro suggested that the growth rate, cell migration and invasiveness of 231BO-BSP27/ 尾 3 cells were higher than those of 231BO-BSP27 group.
【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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6 張嘉慶;王殊;喬新民;;乳腺癌的現狀和遠景[A];第一屆全國中西醫(yī)結合乳腺疾病學術會議論文匯編[C];2002年

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8 邵志敏;;21世紀乳腺癌治療的展望[A];第三屆中國腫瘤學術大會教育論文集[C];2004年

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4 王艷紅;抑制ＤＮＡ修補可消滅乳腺癌細胞[N];醫(yī)藥經濟報;2005年

5 詹建;乳腺癌飲食 兩個時期不一樣[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

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本文編號：2484327