發(fā)布時間：2019-05-15 03:53

【摘要】：目的:觀察苦參堿對肝癌細胞的抑制效果及機制。方法:選取HepG2肝癌細胞系,MTT篩選苦參堿作用于HepG2肝癌細胞的濃度梯度,并觀察苦參堿對HepG2肝癌細胞形態(tài)學的影響。實驗分為空白對照組、實驗組、陽性對照組3組,空白對照組加入不含藥的細胞培養(yǎng)基,實驗組分別加入苦參堿,使其終濃度為1、2、4 mg/mL,陽性對照組加用終濃度為20umol/L的ERK信號通路阻斷劑PD98059,培養(yǎng)24小時后,MTT檢測細胞增殖、Transwell小室檢測細胞遷移數(shù)目、逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測ERK信號通路上的關鍵蛋白ERK的核酸表達變化,蛋白質免疫印跡法(Western-Blot)檢測ERK、p-ERK蛋白質表達變化。結果:1.細胞形態(tài)學變化:空白對照組細胞排列緊密,呈梭形,形態(tài)飽滿,貼壁良好;實驗組細胞形態(tài)隨著濃度升高細胞密度逐漸減低,貼壁不牢,并在高濃度時出現(xiàn)壞死的細胞碎片。2.MTT結果顯示,苦參堿對HepG2細胞增殖的抑制作用具有時間和濃度依賴性。并且在24h時間段內1 mg/m L、2 mg/mL、4 mg/mL濃度時苦參堿對HepG2作用最敏感。3.細胞遷移能力變化:實驗組與空白對照組相比,1 mg/m L、2 mg/m L、4mg/m L組細胞遷移能力顯著減少(P0.01),4 mg/m L與陽性對照組比較無差異(P0.05)。4.ERK核酸表達:經苦參堿作用后ERK mRNA的表達量顯著下降,實驗組中4 mg/m L、2 mg/m L與空白對照組相比有差異(P0.05);實驗組與陽性對照組比較核酸表達量未下降,4mg/m L、2mg/m L有差異(P0.05)。5.ERK和p-ERK蛋白的表達:實驗組與空白對照組相比,p-ERK蛋白表達量在2 mg/m L、4 mg/mL濃度時下調顯著,有統(tǒng)計學意義(P0.01),ERK蛋白表達量在2 mg/m L、4 mg/m L濃度時下調顯著,有統(tǒng)計學差異(P0.05);與陽性對照組相比,1 mg/m L、2 mg/mL苦參堿作用后p-ERK蛋白下調量不及PD98059(P0.05),且1 mg/mL具有顯著性差異(P0.01)。結論:1.苦參堿可抑制HepG2肝癌細胞的增殖和遷移,其具體機制可能通過下調ERK信號轉導通路中的關鍵蛋白p-ERK和ERK蛋白的表達。2.苦參堿對HepG2肝癌細胞的抑制作用具有時間和濃度依賴性。
[Abstract]:Objective: to observe the inhibitory effect and mechanism of Matrine on HCC cells. Methods: HepG2 HCC cell line was selected and MTT was selected to screen the concentration gradient of Matrine on HepG2 HCC cells, and the effect of Matrine on the morphology of HepG2 HCC cells was observed. The experiment was divided into three groups: blank control group, experimental group and positive control group. The blank control group was supplemented with non-drug cell culture medium, and the experimental group was added with Matrine to make the final concentration of Matrine 1, 2, 4 mg/mL,. The positive control group was cultured with ERK signal pathway blocker PD98059, with final concentration of 20umol/L for 24 hours. The proliferation of cells was detected by MTT and the number of cell migration was detected by Transwell chamber. Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the nucleic acid expression of the key protein ERK in ERK signaling pathway, and Western-Blot was used to detect the expression of ERK,p-ERK protein. Result: 1. Morphological changes of cells in the blank control group: the cells in the blank control group were closely arranged, fusiform, full in shape and good adherent to the wall. The cell morphology of the experimental group decreased gradually with the increase of concentration, the adherent cell density was not firm, and the cell fragments appeared at high concentration. 2. The results showed that the inhibitory effect of Matrine on the proliferation of HepG2 cells was time-and concentration-dependent. At the concentration of 1 mg/mL, 2 mg/mL,4 mg/mL in 24 h, Matrine was the most sensitive to HepG2. The changes of cell migration ability: compared with the blank control group, the cell migration ability of the experimental group was significantly lower than that of the blank control group (1 mg/m / L, 2 mg/m / L, 4 mg 路L) (P 0.01). There was no significant difference in the expression of ERK mRNA between the 4 mg/m / L group and the positive control group (P 0.05). 4. The expression of ERK nucleic acid: the expression of ERK decreased significantly after treatment with Matrine, and the expression of ERK in the experimental group was 4 mg/m / L. 2There was significant difference between mg/m / L and blank control group (P 0.05). Compared with the positive control group, the expression of nucleic acid in the experimental group was not decreased, but the expression of 4mg/m L and 2 mg / L was different (P 0.05). 5. The expression of ERK and p-ERK protein in the experimental group was higher than that in the blank control group. The expression of p-ERK protein decreased significantly at the concentration of 2 mg/mL and 4 mg/mL, which was statistically significant (P 0.01). The expression of), ERK protein decreased significantly at the concentration of 2 mg/mL and 4 mg/mL (P 0.05). Compared with the positive control group, the down regulation of p-ERK protein in 1 mg/mL and 2 mg/mL Matrine was lower than that in PD98059 (P 0.05), and there was significant difference in 1 mg/mL (P 0.01). Conclusion: 1. Matrine can inhibit the proliferation and migration of HepG2 hepatocellular carcinoma cells, and its mechanism may be by down-regulating the expression of p-ERK and ERK proteins in ERK signal transduction pathway. 2. The inhibitory effect of Matrine on HepG2 HCC cells was time-and concentration-dependent.
【學位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7

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本文編號：2477291