【摘要】：背景和目的:胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和病死率均位于前列,同時其5年生存率僅為5%-15%。目前的研究認為,胃癌的難治性可能與其早期的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是針對上皮細胞來源的腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的研究熱點,其本身是機體生理病理過程的關(guān)鍵部分,當(dāng)EMT發(fā)生時,上皮細胞則表現(xiàn)出間質(zhì)細胞的表型,使其具有更高的侵襲性和遷移性。因此,通過研究胃癌細胞EMT發(fā)生潛在的分子機制,可能為降低胃癌的早期轉(zhuǎn)移及提高胃癌的預(yù)后提供潛在的依據(jù)。本研究首先在胃癌組織及其對應(yīng)的癌旁正常組織,胃癌不伴有轉(zhuǎn)移組織和胃癌伴有血管或漿膜或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中分別檢測Fbxw7的表達情況,同時對胃癌患者Fbxw7的表達及其臨床病例資料之間的關(guān)系進行分析;其次,通過在胃癌細胞中過表達或干擾Fbxw7,然后分別檢測轉(zhuǎn)染前后胃癌的細胞學(xué)功能及EMT相關(guān)的分子標(biāo)記物的變化;最后,分別在胃癌組織及細胞中對Fbxw7及RhoA的相關(guān)性進行分析,同時對兩者的相關(guān)性進行深入探討并在胃癌細胞中共轉(zhuǎn)染Fbxw7及RhoA,然后分別檢測共轉(zhuǎn)染前后胃癌細胞的細胞學(xué)功能及EMT相關(guān)分子標(biāo)記物的變化。方法:(1)通過免疫組化檢測60例胃癌組織及對應(yīng)癌旁正常組織中Fbxw7的表達情況,通過WB技術(shù)對20例胃癌組織及對應(yīng)癌旁正常組織、10例胃癌不伴有轉(zhuǎn)移組織及胃癌伴有血管或漿膜或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織各10例中的Fbxw7的表達進行檢測,同時對胃癌患者Fbxw7的表達及其臨床病例資料之間的關(guān)系進行分析。(2)通過病毒轉(zhuǎn)染外源性的過表達或干擾Fbxw7的表達,采用WB,CCK8細胞增殖,細胞侵襲遷移,細胞凋亡,免疫熒光等實驗方法分析胃癌細胞中Fbxw7表達水平的變化對胃癌細胞分子生物學(xué)及細胞生物學(xué)的影響。(3)通過免疫組化、WB技術(shù)及RT-PCR技術(shù)對胃癌組織和細胞中Fbxw7及RhoA兩者的相關(guān)性進行分析,同時采用免疫共沉淀技術(shù)進一步分析Fbxw7是通過何種分子機制調(diào)控RhoA的表達的。采用病毒轉(zhuǎn)染外源性的過表達或干擾Fbxw7或RhoA表達,通過WB,共轉(zhuǎn)染,CCK8細胞增殖,細胞侵襲遷移,細胞凋亡,免疫熒光等實驗方法,評估Fbxw7表達水平的高低對胃癌細胞分子生物學(xué)及細胞生物學(xué)的影響的分子機制。結(jié)果:(1)Fbxw7在胃癌中為抑癌基因,在胃癌組織中Fbxw7的表達顯著低于癌旁正常組織中的表達。同胃癌伴有血管或漿膜或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織相比較,在胃癌不伴有轉(zhuǎn)移組織中Fbxw7的表達顯著增高。通過對胃癌患者臨床病例資料分析發(fā)現(xiàn),Fbxw7的表達水平同腫瘤大小、TNM分期、血管浸潤、漿膜浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),而同患者的年齡、性別及病理類型無關(guān)。通過Kaplan-Meier生存分析發(fā)現(xiàn)Fbxw7同胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。(2)通過外源性基因片段轉(zhuǎn)染過表達或干擾Fbxw7后發(fā)現(xiàn)Fbxw7的高表達可以促進胃癌細胞凋亡及生長抑制同時抑制胃癌細胞的侵襲及遷移,從而抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的上游轉(zhuǎn)錄因子Snail 1和ZEB 1而抑制EMT;然而Fbxw7干擾后發(fā)生截然相反的現(xiàn)象。(3)通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)Fbxw7同RhoA在蛋白水平呈顯著負相關(guān),而在mRNA水平則無相關(guān)性,并且通過pull-down實驗發(fā)現(xiàn)Fbxw7高表達可顯著下調(diào)RhoA及GTP-RhoA的表達水平。通過免疫共沉淀我們發(fā)現(xiàn)兩者間相互作用的具體機制為Fbxw7通過泛素化修飾及蛋白水解作用對RhoA的表達進行調(diào)控。最后通過共轉(zhuǎn)染實驗發(fā)現(xiàn)Fbxw7調(diào)控胃癌細胞凋亡、生長抑制及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是可以部分通過調(diào)控RhoA信號通路實現(xiàn)的。結(jié)論:在胃癌中,Fbxw7可以調(diào)控RhoA的表達,而且可以部分通過調(diào)控RhoA信號通路而促進胃癌細胞凋亡和生長抑制及抑制胃癌細胞上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Ya-Chao Hou;Jing-Yu Deng;;Role of E3 ubiquitin ligases in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年03期

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本文編號：2475264