【摘要】：第一部分UCA1在結直腸癌組織中表達研究目的:在結直腸癌組織中檢測尿路上皮癌相關基因1(Urothelial carcinoma associated 1,UCA1)的表達水平,并分析其與臨床病理因素和預后的關系。方法:實時RT-PCR技術檢測結直腸癌組織中UCA1的表達水平,比較結直腸癌組織及其配對正常組織中UCA1的表達差異。分別收集并整理90例病例的臨床病理信息及預后資料,首先通過Logistic回歸分析UCA1表達水平對臨床病理因素的影響。接下來采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線,Log-Rank方法比較UCA1高表達組和低表達組之間的生存率,最后采用Cox比例風險模型進行多因素分析,以確定在多因素作用下UCA1對預后的影響。結果:檢測90例結直腸癌組織及其配對正常組織中UCA1的表達,進一步證實UCA1在結直腸癌中表達顯著上調(P0.01),有約59%左右的結直腸癌組織中UCA1表達上調2倍以上。UCA1高表達患者表現(xiàn)出更差的預后(P=0.0026),且結直腸癌腫瘤組織中UCA1的高表達與腫瘤大小(P=0.010),腫瘤浸潤深度(P=0.041)及淋巴結轉移(P=0.035)呈正相關。UCA1(HR=2.395,95%CI=1.044-5.495,P=0.039)和腫瘤轉移(HR=3.004,95%CI=1.310-6.899,P=0.009)是結直腸癌患者生存的獨立預后因素。結論:UCA1在結直腸癌組織中高表達,并與病床病理因素及預后相關。UCA1是結直腸癌患者生存的獨立預后因素。第二部分UCA1在結直腸癌中的功能研究目的:在體外細胞水平明確UCA1對于結直腸癌細胞的增殖、細胞周期、細胞凋亡、耐藥等生物學表型的影響。同時在體內動物水平驗證UCA1對于腫瘤形成的影響。方法:通過CCK-8和克隆形成,探討UCA1過表達或表達抑制后對結直腸癌細胞增殖能力及5-FU耐藥的影響。通過流式細胞術檢測UCA1對細胞周期和細胞凋亡的影響。構建裸鼠成瘤模型探討UCA1在體內對結直腸癌細胞成瘤能力的影響。結果:沉默UCA1表達后細胞的增殖能力明顯降低;而過表達UCA1后細胞的增殖能力明顯增加�？寺⌒纬蓪嶒灠l(fā)現(xiàn)UCA1能夠增加結直腸癌細胞克隆形成能力。裸鼠成瘤實驗證明沉默UCA1能夠抑制結直腸癌體內細胞增殖;過表達UCA1能夠促進結直腸癌體內細胞增殖。在UCA1敲降的和過表達的細胞中,加入不同濃度的5-FU(0.5、1.0、2.0、4.0、10.0和50.0μg/m L)。48小時后通過CCK-8測定細胞活性,可見敲降UCA1能夠明顯增加HCT116細胞對5-FU的藥物敏感性;過表達UCA1能夠明顯降低SW480細胞對5-FU的藥物敏感性。通過流式細胞儀測定細胞凋亡情況,可見敲降UCA1能夠明顯增加凋亡細胞比例;而過表達UCA1能夠明顯降低凋亡細胞比例。結論:UCA1能夠促進結直腸癌細胞體外和體內的細胞增殖。UCA1能夠通過減少凋亡降低結直腸癌細胞對5-FU的藥物敏感性。第三部分UCA1促癌機制研究目的:在結直腸癌組織中探討UCA1通過何種機制促進腫瘤細胞增殖及對5-FU耐藥。方法:雙熒光素酶激活實驗驗證UCA1和mi R-204-5p是否通過MRE相結合。RNA免疫沉淀法(RNA immunoprecipitation,RIP)利用Ago2抗體捕獲Ago2蛋白及與其結合的RNA,然后通過實時RT-PCR的方法檢測UCA1和mi R-204-5p的含量。雙熒光素酶激活實驗驗證CREB1是否是mi R-204-5p的靶基因。雙熒光素酶激活實驗和Western blot驗證UCA1對mi R-204-5p的靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表達調控。最后通過免疫組化檢測CREB1在CRC組織中的表達及與預后的關系。結果:雙熒光素酶激活實驗和RNA免疫沉淀證實mi R-204-5p能夠和UCA1通過mi RNA的核糖核蛋白復合物中的Ago2蛋白相結合。UCA1能夠通過海綿吸附mi R-204-5p上調其靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表達。我們還發(fā)現(xiàn)CREB1作為mi R-204-5p的一個新的靶基因在結直腸癌中表達上調并與患者不良預后相關。結論:UCA1能夠通過海綿吸附mi R-204-5p上調其靶基因(CREB1、BCL2和RAB22A)的表達,從而促進結直腸癌細胞增殖及對5-Fu的耐藥。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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