【摘要】：目的:賁門癌是我國特別是北方地區(qū)一種常見的消化道惡性腫瘤,國際衛(wèi)生組織(World Health Organization,簡稱WHO)將騎跨于食管和胃交界處的腺癌性病變定義為賁門癌,其具有特異的臨床表現(xiàn)與組織學(xué)、解剖學(xué)、生物學(xué)特征。因其病理類型多為腺癌,放療治療效果不理想。食管癌也是人類常見的消化道惡性腫瘤之一,全世界每年`新增患者超過30萬人,其發(fā)病率和死亡率各國差異很大,其中發(fā)展中國家比例較高。食管癌的病理類型主要分為鱗狀細胞癌、腺癌、癌肉瘤、肉瘤樣癌以及小細胞癌。我國是世界食管癌高發(fā)地之一,其死亡率占全球的50%以上,粗死亡率為17.38/10萬,占總癌亡人數(shù)的16.41%。鱗狀細胞癌為我國食管癌主要病理學(xué)類型,約占發(fā)病率的90%左右。目前,賁門癌和食管癌患者的主要治療手段是手術(shù)治療,但患者術(shù)后的生存期并不樂觀,其5年生存率都僅為30%左右。賁門癌和食管癌有一些值得注意的病理學(xué)和流行病學(xué)相似點,如發(fā)病年齡、性別等。在食管癌高發(fā)區(qū),賁門癌的發(fā)病率也較高,食管癌高發(fā)區(qū)賁門癌發(fā)病率約為50/10萬,是食管癌的2/3,特別是河北省磁縣和涉縣等地區(qū)這一流行病學(xué)特征更為突出。因二者有相似的病理學(xué)、流行病學(xué)等特點,故進一步比較研究同一地區(qū)賁門癌與食管癌發(fā)病的分子學(xué)機制,對于尋找新的治療靶點以提高個體化治療效果,具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。BRAF基因,別名鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌同源體(v-rafmurinesarc-omaviraloncogenehomolog B1),位于染色體7q34由783個氨基酸組成,能夠編碼絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是RAF家族成員之一,而且還是RAS/RAF/MEK/ERK/MAPK信號通路中相當(dāng)重要的轉(zhuǎn)導(dǎo)因子,調(diào)控多種生物學(xué)事件,如細胞生長、分化和凋亡等。近年研究發(fā)現(xiàn),在多種人類惡性腫瘤如惡性黑色素瘤、肺癌、甲狀腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、胰腺癌中均存在不同比例的BRAF基因突變。當(dāng)前,在我國關(guān)于BRAF基因在賁門癌及食管鱗狀細胞癌組織是否發(fā)生突變的研究鮮有報道。本研究采用基因測序的方法檢測了在人賁門癌、食管鱗狀細胞癌組織及其相對遠癌組織(距癌組織邊緣5cm以上)中BRAF基因第11外顯子及第15外顯子的突變情況,并運用免疫組化方法檢測了賁門癌、食管鱗狀細胞癌組織及相對遠癌組織中BRAF蛋白的表達情況,分析了其與賁門癌及食管鱗狀細胞癌臨床病例特征各指標間的關(guān)系,探討了BRAF基因突變在賁門癌及食管鱗狀細胞癌的臨床意義,為今后制備BRAF基因抑制劑、尋找應(yīng)用于賁門癌及食管鱗狀細胞癌分子靶向治療的新靶點提供理論基礎(chǔ)及實驗依據(jù)。方法:收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科在2014年2月-2014年12月期間經(jīng)手術(shù)治療的賁門癌、食管鱗狀細胞癌患者新鮮組織標本共91例。其中賁門癌標本46例,食管鱗狀細胞癌標本45例。在賁門癌標本中,男性患者38例,女性患者8例,男女比例為4/1,病人平均年齡為59.8歲,高分化4例,中分化22例,低分化20例。在食管鱗狀細胞癌標本中,男性患者27例,女性患者18例,男女比例為3/2,病人平均年齡為61.3歲,高分化3例,中分化31例,低分化11例。所有患者術(shù)前均未進行放療及化療,全部手術(shù)切除標本均經(jīng)病理證實。對照組選取這91例患者的新鮮遠癌組織標本(距癌組織邊緣5cm以上)。分別記錄患者性別、年齡、病理類型、分化程度、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病例情況。采用組織全基因組提取、聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)和基因測序方法,檢測實驗組和對照組標本中BRAF基因的突變情況,并運用免疫組化方法檢測了兩種癌組織及相應(yīng)遠癌組織中BRAF蛋白的表達情況,分析其與賁門癌及食管鱗狀細胞癌臨床病例特征的關(guān)系。采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析,兩組計數(shù)資料的比較采用四格表資料的卡方檢驗,兩組等級資料的比較采用Mann-whitney U秩和檢驗,檢測結(jié)果以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1賁門癌、食管鱗狀細胞癌組織中BRAF基因突變檢驗結(jié)果及臨床特點在46例賁門癌組織中檢測到3例存在于BRAF基因第15外顯子突變,其第11外顯子均未見突變。突變類型均為V600E,即基因突變發(fā)生在第15外顯子的第1799個核苷酸,導(dǎo)致其編碼的纈氨酸被谷氨酸取代。在遠癌組織中未檢測到上述突變。免疫組化結(jié)果顯示3例BRAF基因突變的賁門癌組織陽性表達BRAF蛋白;3例患者均伴有周圍淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移,均可見脈管瘤栓,TNM分期分別IIIB、IIIB、IIIC期,分化程度分別為II級、II級、III級,患者性別均為男性,年齡分別是59歲,68歲與55歲。在45例食管鱗狀細胞癌組織中未檢測到BRAF基因第11外顯子和第15外顯子存在突變。測序結(jié)果顯示,有4個樣品在第11外顯子上增加了一個堿基C或T,即會造成密碼子移碼突變,結(jié)合免疫組化結(jié)果顯示該標本BRAF蛋白陽性表達,考慮該結(jié)果可能為測序誤差所致。2賁門癌、食管鱗狀細胞癌組織中BRAF蛋白表達及臨床病例特征之間的關(guān)系免疫組化結(jié)果顯示在46例賁門癌組織標本中,22例賁門癌細胞中可見分布于腫瘤細胞胞漿中的棕色顆粒,BRAF蛋白表達呈陽性,表達陽性率為47.82%;在相應(yīng)遠癌組織中僅3例出現(xiàn)棕色顆粒,表達陽性率為6.52%。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,兩者具有顯著性差異(P0.05)。在45例食管鱗狀細胞癌組織標本中,28例食管鱗狀細胞癌組織BRAF蛋白表達呈陽性,表達陽性率為62.22%;在相應(yīng)遠癌組織中僅4例出現(xiàn)棕色顆粒,表達陽性率為8.89%。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,兩者具有顯著性差異(P0.05)。本研究顯示46例賁門癌組織中BRAF蛋白陽性表達共22例,總的陽性率為47.82%。男性陽性率50.0%,女性陽性率37.5%;年齡60歲以上(包括60歲)患者陽性率60.0%,60歲以下患者陽性率38.5%;低分化者陽性率40.0%,中分化者陽性率59.1%,高分化者陽性率25.0%;Ⅰ期患者陽性率18.2%,Ⅱ期患者陽性率33.3%,Ⅲ期患者陽性率75.0%;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率62.5%,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率14.3%。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,BRAF蛋白的表達陽性與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(χ2=9.073,P0.05)及TNM分期(Z=-3.242,P0.05)有關(guān),與患者性別、年齡及腫瘤分化程度無關(guān)。45例食管鱗狀細胞癌組織中BRAF蛋白陽性表達共28例,總陽性率為62.22%。分布為:男性陽性率55.6%,女性陽性率72.2%;年齡60歲以上(包括60歲)患者陽性率53.6%,60歲以下患者陽性率76.5%;低分化者陽性率72.7%,中分化者陽性率54.8%,高分化者陽性率100.0%;Ⅰ期患者陽性率21.4%,Ⅱ期患者陽性率50.0%,Ⅲ期患者陽性率88.2%;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率82.6%,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率40.9%。統(tǒng)計學(xué)分析顯示,BRAF蛋白的表達陽性與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(χ2=8.318,P0.05)及TNM分期(Z=-3.718,P0.05)有關(guān),與患者性別、年齡及腫瘤分化程度無關(guān)。結(jié)論:1本實驗結(jié)果提示BRAF基因突變在賁門癌的發(fā)展中具有一定作用,可能是賁門癌生存不良的新預(yù)測因素,可望作為賁門癌的分子靶向治療新的目的基因。而BRAF基因突變可能不是食管鱗狀細胞癌發(fā)生和發(fā)展的原因。2 BRAF蛋白高表達與賁門癌、食管鱗狀細胞癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),BRAF蛋白表達在賁門癌和食管鱗狀細胞癌的發(fā)展階段發(fā)揮更多作用,其可能在賁門癌和食管鱗狀細胞癌病理診斷和臨床預(yù)后方面具有一定的應(yīng)用價值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735

【參考文獻】

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1 翟篤明;王松林;賈淞淋;郭成業(yè);;中國人非小細胞肺癌B-RAF基因(V600E)突變的研究[J];中國實驗診斷學(xué);2012年02期

2 王國清;魏文強;喬友林;;賁門癌篩查和早診早治的經(jīng)驗[J];中國腫瘤;2011年07期

3 陳志峰;宋國慧;侯俊;郭翠蘭;靳國良;孟凡書;白文龍;;食管癌高發(fā)區(qū)1.5萬隊列人群內(nèi)鏡篩查與食管癌胃癌死亡研究[J];中國腫瘤臨床;2009年19期

4 陳志峰;侯浚;賀宇彤;;食管胃交界腺癌——食管癌高發(fā)區(qū)面臨的新課題[J];腫瘤防治研究;2007年11期

5 張立瑋;溫登瑰;王士杰;李英賽;于衛(wèi)芳;王曉玲;王俊和;李素平;李永偉;王順平;爾立綿;叢慶文;馬彩芬;;食管癌高發(fā)區(qū)賁門癌、胃癌流行強度分析及其對內(nèi)鏡篩查的啟示[J];腫瘤防治研究;2005年12期

6 賴少清,王國清;賁門不同位點癌前病變情況調(diào)查[J];癌癥;2001年03期

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本文編號：2442114