【摘要】：研究背景根據(jù)ER、PR、her-2、Ki67的表達(dá)情況可將乳腺癌分為預(yù)后相對較好的Luminal A型、Luminal B型和預(yù)后相對較差的Her-2過表達(dá)型、三陰性乳腺癌。作為一種高異質(zhì)性腫瘤,不同分子分型的乳腺癌患者的預(yù)后存在巨大差異,即使在Luminal A型乳腺癌中,仍有一部分患者的預(yù)后接近三陰性患者,由此可見目前的乳腺癌分子分型仍不夠完善。因此,在乳腺癌各分子亞型中進(jìn)一步尋找有預(yù)后意義的分子標(biāo)記物具有重要的臨床意義。Aur-A作為細(xì)胞有絲分裂期的關(guān)鍵激酶,與多種腫瘤的發(fā)生有密切的聯(lián)系,但其是否可作為乳腺癌的獨立預(yù)后因素仍存在爭論。同時Aur-A對乳腺癌患者的預(yù)后中的具體分子機(jī)制尚不清楚,有待進(jìn)一步深入研究。實驗?zāi)康某醪教接慉ur-A是否可作為不同亞型乳腺癌中進(jìn)一步區(qū)分預(yù)后的更準(zhǔn)確的風(fēng)險標(biāo)記物。通過分子信號通路的研究,更好的了解Aur-A的生物學(xué)功能及其作用機(jī)制。實驗方法(1)利用310例,具備12年完整隨訪資料的人乳腺癌組織芯片,進(jìn)行免疫組化染色,分析Aur-A在乳腺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。通過進(jìn)一步分層分析了解Aur-A是否能篩選出各型乳腺癌患者中預(yù)后不良的亞群。(2)以代表Luminal A型乳腺癌的MCF-7細(xì)胞系作為體外實驗的研究對象,運用siRNA敲除MCF-7細(xì)胞中的Aur-A或使用Aur-A選擇性抑制劑Amg900抑制Aur-A的活性,通過克隆形成、CCK-8細(xì)胞增殖、劃痕實驗、transwell侵襲、遷移實驗等實驗方法研究Aur-A在Luminal A型乳腺癌的增殖及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。用Western blot和RT-PCR方法探索Aur-A發(fā)揮相應(yīng)作用的分子機(jī)制。(3)運用MCF-7細(xì)胞分別建立慢病毒敲除的荷瘤模型和Amg900抑制劑的藥物干預(yù)模型,兩組模型分別設(shè)置相應(yīng)的陰性對照和空白對照。觀察兩種模型瘤體生長速度：并運用免疫組化染色檢測瘤體Aur-A、Ki67、Cofilin、P-Cofilin、PHH3以及Src的表達(dá)水平。實驗結(jié)果第一部分：Aur-A在浸潤性乳腺癌中高表達(dá),310例患者中陽性表達(dá)率達(dá)到80.65%(250/310), Aur-A的陽性和陰性表達(dá)分布與年齡(P=0.451)、病理分級(P=0.318)、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.777)、腫瘤部位(P=0.387)、臨床分期(P=0.902)、CK5/6(P=0.099)、AR (P=0.512)等無顯著相關(guān)性：但與腫瘤大小(P=0.0.030)、ER(P=0.044)、PR(P=0.027)、Her-2 (P=0.000)、Ki-67 (P=0.013)、P53 (P=0.029)、EGFR(P=0.036)、Cofilin(P=0.000)、分子分型(P=0.000)等指標(biāo)具有顯著相關(guān)(P0.05)。Kaplan-Meie r生存分析顯示,Aur-A過表達(dá)是乳腺癌不良預(yù)后的獨立危險因素。進(jìn)一步分層分析發(fā)現(xiàn),Aur-A在LuminalA型乳腺癌中的表達(dá)與其預(yù)后有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.03)。單因素Cox回歸分析結(jié)果示,Aur-A、ER、PR、EGFR、 AR、FAK、Cofilin、Aur-B、分子分型、腫瘤分期等指標(biāo)具有統(tǒng)計學(xué)意義,然而多因素Cox分析中卻只有Aur-A 和 Cofilin可作為獨立預(yù)后因素。結(jié)果表明,Aur-A可作為Luminal A型乳腺癌患者預(yù)后評估的風(fēng)險標(biāo)記物。第二部分：基于第一部分實驗,對Aur-A的生物學(xué)功能及作用機(jī)制展開初步研究。Aur-A在代表Luminal A型乳腺癌的MCF-7細(xì)胞株中高表達(dá),使用siRNA敲除MCF-7細(xì)胞中的Aur-A或使用Aur-A選擇性抑制劑Amg900抑制Aur-A的活化后,觀察到其細(xì)胞增殖能力、遷移、侵襲能力、劃痕愈合能力及克隆形成能力均明顯減弱。siRNA敲除細(xì)胞內(nèi)的Aur-A后Cofilin-F-actin通路的磷酸化程度增高,從而減少Cofilin活性的非磷酸化部分,導(dǎo)致Cofilin-F-actin通路的活性降低：另外Aur-A被敲除后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子TGF-β、Snail、Vimentin表達(dá)下降,E-cadherin蛋白表達(dá)升高；Src、FAK等侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子亦發(fā)生相應(yīng)改變。這些信號通路中的改變均有可能是Aur-A導(dǎo)致乳腺癌不良預(yù)后的分子機(jī)制。第三部分：裸鼠成瘤及抑制劑干預(yù)實驗結(jié)果表明,Aur-A病毒敲除細(xì)胞系在裸鼠體內(nèi)成瘤體積和重量明顯小于對照組;在MCF-7裸鼠成瘤模型中給予Aur-A的選擇性抑制Amg900可有效的控制腫瘤的生長。同時免疫組化結(jié)果示Aur-A敲除后裸鼠體內(nèi)成瘤中的Cofilin、PHH3等的表達(dá)無明顯的差異性,但Aur-A、Src、Ki67的表達(dá)量明顯低于對照組,P-Cofilin明顯高表達(dá)。結(jié)論Aur-A可作為乳腺癌的獨立預(yù)后因素；對于Luminal A型乳腺癌,其預(yù)后意義尤為顯著。Aur-A作為上游基因可調(diào)控Cofilin-F-actin、Src、FAK 及 EMT相關(guān)因子TGF-β、Snail、 Vimentin、E-cadherin等蛋白的表達(dá),通過其它多條侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)信號通路的分子共同作用,實現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控。Aur-A有望成為Lumianl A型乳腺癌預(yù)后風(fēng)險評估的標(biāo)記物及潛在的治療靶點。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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