【摘要】：背景:胃癌是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,新輔助/輔助化療是胃癌治療的重要臨床手段。然而化療耐藥也是臨床工作中仍不能解決的棘手問題�；熯^程中過度產(chǎn)生的衰老相關分泌表型(Senescence-Associated Secretory Phenotypes,SASPs)被證明是導致化療耐藥的主要原因。Tristetraprolin(ZFP36,TTP,TIS11或稱為Nup475)是一種新興的抑癌蛋白,可通過與SASPs相關細胞因子的mRNA結合,并通過將mRNA運送到細胞P小體(P-Body),介導脫腺苷作用使這些mRNA降解,從而抑制SASPs過度分泌,增強腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。然而TTP在化療誘導的細胞衰老過程中表達是否發(fā)生改變,及TTP表達改變的原因均不明確。同時也無相關文獻報道TTP表達改變是否與對化療藥物的敏感性相關。因此,本實驗擬研究TTP在紫杉醇相對敏感和相對耐藥細胞株衰老模型中TTP表達改變情況,及其表達改變的具體分子機制,以便為提高新輔助/輔助化療敏感性提供新的思路。方法:首先利用紫杉醇對NCL-N87、BGC-823、SGC-7901、HGC-27四種常見胃癌細胞進行初步篩選,鑒別出四株細胞中對紫杉醇相對敏感和相對耐藥細胞株。然后使用紫杉醇分別刺激相對敏感和相對耐藥胃癌細胞,構建兩種胃癌細胞衰老模型,并使用衰老相關β-半乳糖苷酶染色驗證衰老模型構建成功。隨后利用Western-Blot觀察在紫杉醇相對敏感和相對耐藥細胞株衰老模型中TTP表達情況差異,并利用qRT-PCR和ELISA檢測紫杉醇相對敏感細胞衰老前后IL-1a、IL-1β、IL-6和IL-8表達變化。接著使用IL-1a、IL-1β、IL-6、IL-8等細胞因子對紫杉醇相對敏感胃癌細胞進行刺激,初步尋找出刺激TTP表達的關鍵細胞因子。之后利用干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,構建細胞因子干擾細胞衰老模型,并檢測細胞因子干擾衰老模型中TTP表達水平,從而確定細胞因子在衰老過程中對TTP表達的刺激作用。最后通過使用NF-κB信號通路的阻斷劑處理胃癌細胞,確定調(diào)節(jié)TTP表達的信號通路。結果:通過利用紫杉醇初步篩選,結果顯示SGC-7901是對紫杉醇相對耐藥的胃癌細胞株,而BGC-823是對紫杉醇相對敏感的胃癌細胞株。在相對敏感細胞和相對耐藥細胞的衰老模型構建成功后,通過Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)在紫杉醇誘導的BGC-823和SGC-7901細胞衰老模型中,TTP表達水平存在明顯差異,BGC-823衰老模型中TTP表達明顯高于SGC-7901。通過qRT-PCR和ELISA檢測發(fā)現(xiàn),BGC-823衰老后IL-1a、IL-1β、IL-6和IL-8表達明顯較衰老前增高。通過利用IL-1a、IL-1β、IL-6、IL-8四種細胞因子刺激BGC-823細胞,結合IL-1β干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,構建IL-1β(-)細胞衰老模型,并檢測IL-1β(-)細胞衰老模型中TTP表達變化;結果顯示IL-1β是在紫杉醇誘導胃癌細胞衰老過程中TTP表達的主要刺激因子。最后通過使用NF-κB的阻斷劑IKK-Inhibitor VII分別阻斷NF-κB信號通路的經(jīng)典途徑和經(jīng)典+非經(jīng)典途徑,并利用IL-1β刺激阻斷后的細胞、檢測其中TTP表達,證明了在紫杉醇誘導胃癌細胞衰老過程中,IL-1β可通過激活NF-κB經(jīng)典和非經(jīng)典信號通路刺激TTP表達。結論:首先本研究成功構建了紫杉醇誘導的胃癌細胞衰老模型。其次實驗結果顯示IL-1β是紫杉醇誘導細胞衰老過程中TTP表達的主要刺激因子。最后發(fā)現(xiàn)了在紫杉醇誘導胃癌細胞衰老過程中,IL-1β可通過激活NF-κB信號通路經(jīng)典途徑及非經(jīng)典途徑發(fā)揮刺激TTP表達的作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 王長明;許超;衛(wèi)子然;蔡清萍;;進展期胃癌新輔助化療前后IL-6、IL-10的變化及其臨床意義[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年15期

2 Javier Sastre;Jose Angel García-Saenz;Eduardo Díaz-Rubio;;Chemotherapy for gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2006年02期

，

本文編號：2403507