【摘要】：目的:在酵母細(xì)胞中異體表達(dá)人類(lèi)抑癌蛋白p53并探討利用酵母檢測(cè)p53功能的可能性。方法:以乳腺癌細(xì)胞株MCF-7(含野生型p53)的RNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA為模板,經(jīng)PCR擴(kuò)增野生型p53基因并克隆于受半乳糖誘導(dǎo)的酵母表達(dá)質(zhì)粒pRS426Gal1/10中,使用定點(diǎn)突變構(gòu)建突變型p53(R248W、G245S、R273H和R249S),經(jīng)測(cè)序確認(rèn)后質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到酵母細(xì)胞,觀(guān)察p53誘導(dǎo)表達(dá)后酵母細(xì)胞的凋亡和生長(zhǎng)狀況。利用蛋白印跡(Western blot)檢測(cè)不同誘導(dǎo)時(shí)間p53的表達(dá),應(yīng)用原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)DNA斷裂、Annexin V-FITC/PI法檢測(cè)細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸外翻指示細(xì)胞凋亡。結(jié)果:野生型p53誘導(dǎo)3小時(shí)后酵母菌即出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制,誘導(dǎo)9小時(shí)后可檢測(cè)到p53表達(dá),并隨時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)增加,生長(zhǎng)抑制更甚,酵母細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡表型。而表達(dá)突變型p53(R248W、G245S、R273H和R249S)的酵母細(xì)胞則未觀(guān)察到明顯的凋亡和生長(zhǎng)抑制。結(jié)論:酵母可異體表達(dá)人類(lèi)抑癌蛋白p53,依據(jù)酵母細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況可反映p53誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能。
[Abstract]:Aim: to express human tumor suppressor protein p53 in yeast cells and explore the possibility of detecting p53 function by yeast. Methods: the RNA reverse transcription product (cDNA) of breast cancer cell line MCF-7 (containing wild type p53) was used as template, and the wild type p53 gene was amplified by PCR and cloned into the yeast expression plasmid pRS426Gal1/10 induced by galactose. The mutant p53 (R248WN G245SN R273H and R249S) was constructed by site-directed mutation. The plasmid was transformed into yeast cells by sequencing. The apoptosis and growth of yeast cells induced by p53 were observed. Western blot (Western blot) was used to detect the expression of p53 at different induction time, in situ end labeling (TUNEL) was used to detect DNA fragmentation, and Annexin V-FITC/PI method was used to detect cell membrane phosphatidyl serine valgus (Phosphatidyl serine valgus) indicating cell apoptosis. Results: three hours after induction of wild type p53, the growth inhibition appeared in yeast, and the expression of p53 was detected after 9 hours of induction. The expression of p53 increased with time, and the growth inhibition was more serious. The typical apoptotic phenotype appeared in yeast cells. But the yeast cells expressing mutant p53 (R248WN G245SU R273H and R249S) showed no obvious apoptosis and growth inhibition. Conclusion: yeast can express human tumor suppressor protein p53 in vivo, which can reflect the function of p53 induced apoptosis according to the growth status of yeast cells.
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R730.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭曉昕;;從酵母細(xì)胞提取細(xì)胞色素[J];國(guó)外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè));1992年05期

2 李波,楊玉馥,劉延范;酵母細(xì)胞在磁化水中生存能力的實(shí)驗(yàn)研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2000年02期

3 Hilleman MR ,張向明;用重組酵母細(xì)胞生產(chǎn)疫苗[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊(cè);1987年02期

4 廖福榮;膠粘紅酵母細(xì)胞對(duì)7-ACA的生物轉(zhuǎn)化[J];國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè));1997年06期

5 王旭東,馮忻;CDK5/p39i抑制酵母細(xì)胞生長(zhǎng)的觀(guān)察[J];貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年05期

6 陳秀云;陳春波;吳玉娟;祝娉婷;李湘鳴;卜仕金;;重組基因酵母細(xì)胞對(duì)DDT類(lèi)農(nóng)藥的雌激素活性研究[J];毒理學(xué)雜志;2006年06期

7 孫漩嶸;曹穎瑛;姜遠(yuǎn)英;;酵母細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2010年02期

8 胡立勇;三種改變酵母細(xì)胞透性方法對(duì)1,6-二磷酸果糖生產(chǎn)的影響[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2004年02期

9 郭波,鄭萍,謝佩蓉,吳玉章,鄒強(qiáng);酵母細(xì)胞表面展示的hDAF對(duì)補(bǔ)體在酵母細(xì)胞表面沉積的抑制作用[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年03期

10 李東江;鄭穎;葉鋒平;張志曉;范泉水;;蛇毒類(lèi)凝血酶基因大腸桿菌和酵母細(xì)胞表達(dá)條件的優(yōu)化[J];西南國(guó)防醫(yī)藥;2010年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 孔日祥;楊志健;張慶;張亞剛;白瑞林;賈士儒;;酵母細(xì)胞連續(xù)流加培養(yǎng)過(guò)程動(dòng)力學(xué)模型的建立與一步預(yù)估控制[A];中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)第三次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

2 林影;植田充美;田中渥夫;;利用蛋白ZZ將EGFP-Fc融合蛋白固定在酵母細(xì)胞表層[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

3 夏惠君;楊瀟;程曉艷;Bernd;Mueller-Roeber;;擬南芥三磷酸肌醇激酶的新功能——在酵母細(xì)胞中參與抗逆反應(yīng)[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

4 夏惠君;楊瀟;Bernd;Mueller-Roeber;;擬南芥三磷酸肌醇激酶的新功能——在酵母細(xì)胞中參與抗逆反應(yīng)[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

5 李冉輝;劉昀;汪為茂;梁翔宇;鄭易之;;大豆PM2蛋白22氨基酸結(jié)構(gòu)域可提高酵母細(xì)胞耐鹽性[A];2007中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年

6 王桂文;姚輝璐;黎永青;;單個(gè)酵母細(xì)胞活化過(guò)程的實(shí)時(shí)拉曼光譜觀(guān)察[A];第六屆全國(guó)光生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

7 李玲;T.Tzfira;V.Citovsky;;VirF存在下VIP1-GFP和VirE2-GFP在酵母細(xì)胞表達(dá)[A];中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

8 孫鐵錚;呂厚山;;類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞活化蛋白激酶的持續(xù)活化和P53的異常表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2003年

9 張躍偉;;經(jīng)皮肝門(mén)靜脈穿刺序貫注射P53和化療栓塞治療原發(fā)性肝癌門(mén)靜脈癌栓療效觀(guān)察[A];第十二屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

10 靖士俠;彭佐良;孫愛(ài)清;;重組人p53腺病毒的藥理作用與臨床應(yīng)用[A];2007年全國(guó)生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 通訊員 周煒邋記者 趙鳳華;細(xì)胞穿上“衣服”存活率大大提高[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

2 記者 劉霞;酵母細(xì)胞“生物電路”研制成功[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

3 倪永華;酵母細(xì)胞之謎[N];山西經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào);2002年

4 記者 倪永華;德國(guó)科學(xué)家揭開(kāi)酵母細(xì)胞之謎[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 達(dá)劍森;重組人雌激素受體基因酵母細(xì)胞對(duì)家畜尿液中雌激素類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

2 鄭科;鋁誘導(dǎo)的酵母細(xì)胞程序性死亡及其信號(hào)調(diào)控研究[D];浙江大學(xué);2007年

3 沈玉保;酵母cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及時(shí)序衰老機(jī)制研究[D];天津大學(xué);2012年

4 石國(guó)榮;新型微膠囊化壁材—改性酵母細(xì)胞的研究與應(yīng)用[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

5 劉超;肝癌非手術(shù)患者p53熱點(diǎn)突變檢測(cè)暨人自噬標(biāo)簽Atg8家族蛋白變異剪接本的結(jié)構(gòu)分析[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

6 劉星;氡致人支氣管上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中p53介導(dǎo)的能量代謝改變[D];蘇州大學(xué);2016年

7 張茂申;P53和微衛(wèi)星不穩(wěn)定在胃癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的相關(guān)性研究[D];青島大學(xué);2017年

8 劉軍葉;p53對(duì)乏氧誘導(dǎo)基因表達(dá)的影響及腺病毒載體介導(dǎo)的腫瘤乏氧靶向性基因治療[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 菅志華;人類(lèi)抑癌蛋白p53誘導(dǎo)酵母細(xì)胞凋亡的研究[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2017年

2 劉怡;構(gòu)建人工合成酵母細(xì)胞生產(chǎn)萜烯類(lèi)化合物[D];天津科技大學(xué);2013年

3 牛書(shū)操;酵母細(xì)胞的通透化及其谷胱甘肽合成能力研究[D];南昌大學(xué);2016年

4 余曉;功率超聲破碎酵母細(xì)胞的影響因素研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 田永杰;響應(yīng)面研究化學(xué)物對(duì)RAD54啟動(dòng)子調(diào)控的紅綠雙信號(hào)發(fā)光酵母細(xì)胞的聯(lián)合基因毒性[D];揚(yáng)州大學(xué);2017年

6 陳萍;熒光顯微技術(shù)在酵母細(xì)胞研究中的應(yīng)用[D];武漢大學(xué);2005年

7 劉瑩;單雙倍體酵母細(xì)胞對(duì)乙醇響應(yīng)的比較脂組學(xué)研究[D];天津大學(xué);2009年

8 蘇彩云;酵母細(xì)胞內(nèi)腔調(diào)控的無(wú)機(jī)納米材料的生物合成及其應(yīng)用[D];河南師范大學(xué);2013年

9 廖原;生物堿Narciclasine抑制酵母生長(zhǎng)的生理生化機(jī)理研究[D];蘭州大學(xué);2006年

10 楊華;高溫和氧化條件下酵母細(xì)胞應(yīng)激產(chǎn)生活性物質(zhì)的研究[D];天津科技大學(xué);2004年

，

本文編號(hào)：2396357