發(fā)布時間：2018-12-24 09:38

【摘要】：本論文涵蓋以下兩方面內(nèi)容:1、新型水溶性半乳糖酞菁光敏劑光動力診斷結(jié)腸癌動物模型的研究目的:惡性腫瘤已經(jīng)嚴(yán)重危害到人類健康,其中結(jié)腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。我國結(jié)腸癌的發(fā)病率和死亡率呈明顯的上升趨勢,引起了醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。結(jié)腸癌的早期可無任何表現(xiàn),晚期才可能出現(xiàn)大便性狀改變等癥狀。對于結(jié)腸癌的診斷常用方法有:氣鋇雙重造影、內(nèi)窺鏡、CT、核磁等但均有其局限性。而光動力診斷憑借其無輻射、對正常組織損傷小、病人耐受性強、可對腫瘤早期進(jìn)行實時診斷的優(yōu)點脫穎而出成為近年來研究熱點。光敏劑是光動力診斷的關(guān)鍵,因此越來越多的學(xué)者開始對光敏劑進(jìn)行研究和優(yōu)化。本課題采用的是經(jīng)半乳糖基修飾的4種酞菁類光敏劑(T1~T4),通過研究其光譜學(xué)特性、脂水分布系數(shù)、細(xì)胞吸收特性、亞細(xì)胞定位、生物安全性等確定最適合應(yīng)用于診斷的光敏劑并且應(yīng)用于結(jié)腸癌原位模型的診斷,以期為臨床診斷提供一定的實驗數(shù)據(jù)。方法:對光敏劑T1~T4進(jìn)行紫外光譜和熒光光譜檢測;用反向薄層色譜法檢測T1~T4的脂水分布系數(shù);利用熒光分光光度計檢測T1~T4的濃度和孵育時間對結(jié)腸癌CT-26細(xì)胞吸收量的影響;利用激光共聚焦顯微鏡觀察T1~T4的亞細(xì)胞定位情況,MTT法檢測在有無激光照射的情況下,T1對結(jié)腸癌細(xì)胞(LOVO、CT-26)和正常細(xì)胞的細(xì)胞毒作用的差異,并計算IC50值;利用光譜分析儀在結(jié)腸癌原位模型的基礎(chǔ)上研究光敏劑T1的診斷作用。所有實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,并應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行后續(xù)處理,均數(shù)比較采用t檢驗或方差分析(ANOVA S-N-K)檢驗,以P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:T1~T4的紫外吸收最大波長在680nm左右,熒光發(fā)射波長在690nm左右,這符合作為光敏劑紫外吸收光譜和熒光光譜在近紅外區(qū)(600~800)的特征;脂水分布系數(shù)結(jié)果顯示,用半乳糖修飾的酞菁具有較好的水溶性并且隨著取代基數(shù)目的增加其水溶性會增強;結(jié)腸癌細(xì)胞CT-26對T1的吸收量和吸收速率最高最快,T2、T3次之,對T4幾乎無吸收;化合物的細(xì)胞定位結(jié)果顯示在同一濃度下,T1進(jìn)入細(xì)胞的量最多,熒光信號最強并且在溶酶體內(nèi)分布較多,線粒體內(nèi)分布較少;在有無光照條件下,T1對結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用比對正常細(xì)胞的細(xì)胞毒作用強;動物實驗證明,正常結(jié)腸組織、腫瘤組織和激光光動力診斷腫瘤組織在吸收光譜上有差異。(p0.05)結(jié)論:T1憑借其脂溶性最強、吸收速率最快、熒光強度最強等優(yōu)勢可用于結(jié)腸癌熒光成像診斷,并且動物實驗也證實T1介導(dǎo)的光動力熒光成像有一定的應(yīng)用價值和前景。2、新型水溶性半乳糖酞菁光敏劑抗腫瘤特性及其相關(guān)機制研究目的:在研究半乳糖酞菁光敏劑T1對結(jié)腸癌光動力診斷效果的同時我們發(fā)現(xiàn)此類光敏劑對腫瘤有一定的抑制作用,因此本課題對新型光敏劑半乳糖酞菁對結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響及其相關(guān)機制進(jìn)行了研究,為光動力治療結(jié)腸癌提供一定的實驗依據(jù)。方法:利用MDC染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測在IC50濃度時,TI-PDT對結(jié)腸癌細(xì)胞的自噬、凋亡和壞死情況;利用掃描電鏡和透射電鏡觀察在IC50濃度時,TI-PDT對結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的影響;RT-PCR檢測在IC50濃度時,T1-PDT對結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)Bcl-2、Bax、Beclin1基因表達(dá)的影響。所有實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,并應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行后續(xù)處理,均數(shù)比較采用t檢驗或方差分析(ANOVA S-N-K)檢驗,以P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:T1-PDT可誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)生自噬,對細(xì)胞的凋亡影響較小。掃描電鏡和透射電鏡結(jié)果表明T1-PDT可引起細(xì)胞自噬,產(chǎn)生自噬小體。對線粒體的破壞不明顯,可引起細(xì)胞膜的皺縮、偽足消失,甚至破裂。RT-PCR結(jié)果證明,T1-PDT對Bcl-2、Bax基因的表達(dá)影響小,可增強Beclin-1基因的表達(dá)。(P0.05)結(jié)論:T1介導(dǎo)的光動力治療結(jié)腸癌的主要機制是引起腫瘤細(xì)胞自噬。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.35;R730.49

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2390470