【摘要】：目的研究miR-630在人體三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)情況,探討miR-630是否通過(guò)下調(diào)Sox4影響三陰性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲。方法收集157例行乳腺癌根治術(shù)患者癌組織標(biāo)本及癌旁正常乳腺組織,其中三陰性乳腺癌36例,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)各組(正常乳腺組、非三陰性乳腺癌組、三陰性乳腺癌組)組織中與乳腺癌相關(guān)的miR-630、miR-21、miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表達(dá)情況;蛋白免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)檢測(cè)3組標(biāo)本中細(xì)胞侵襲相關(guān)蛋白COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9的表達(dá)情況;進(jìn)一步在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-630mimic或空質(zhì)粒后,再轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)Sox4的質(zhì)�；蚩召|(zhì)粒至離體培養(yǎng)的細(xì)胞中,Western blot檢測(cè)細(xì)胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表達(dá)情況,劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell法觀察細(xì)胞遷移侵襲情況,利用熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Sox4是miR-630的靶基因。結(jié)果相比于正常乳腺組,miR-630、miR-21在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)降低(P0.01);miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表達(dá)在3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);相比于正常乳腺組及非三陰性乳腺癌組,三陰性乳腺癌組織中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表達(dá)增多(P0.05)。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,相比于空質(zhì)粒組,轉(zhuǎn)染miR-630mimic后,MDA-MB-231細(xì)胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表達(dá)減少(P0.05),MDA-MB-231細(xì)胞的遷移侵襲能力減弱(P0.01);熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-630能夠顯著降低Sox4-3′-UTR質(zhì)粒的熒光素活性(P0.05);相比于過(guò)表達(dá)miR-630+空質(zhì)粒組,轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)miR-630+過(guò)表達(dá)Sox4組,MDA-MB-231細(xì)胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2和MMP-9表達(dá)增加(P0.05),細(xì)胞的遷移侵襲能力增強(qiáng)(P0.01)。結(jié)論在三陰性乳腺癌組織中,miR-630低表達(dá);miR-630可以通過(guò)下調(diào)Sox4從而抑制MDA-MB-231的遷移和侵襲。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of miR-630 in human triple-negative breast cancer tissues and whether miR-630 can affect the invasion of triple-negative breast cancer cell line MDA-MB-231 by down-regulation of Sox4. Methods 157 patients with breast cancer underwent radical mastectomy and normal breast tissues adjacent to breast cancer were collected. Among them, 36 cases of tri-negative breast cancer were detected by real-time fluorescence quantitative PCR (RT-PCR) in each group (normal mammary gland group and non-tri-negative breast cancer group). The expression of miR-630,miR-21,miR-195,miR-134,miR-200a,miR-381,miR-1228 related to breast cancer in tri-negative breast cancer group; The expression of cell invasion-associated protein (COL1A1,COL1A5,MMP-2,MMP-9) in three groups was detected by Western blot (Western blot). Further in the cell experiment, the expression of COL1A1,COL1A5,MMP-2,MMP-9,Sox4 was detected by transfection of miR-630mimic or empty plasmid, and then transfection of plasmid or empty plasmid expressing Sox4 into the cells cultured in vitro with, Western blot. The migration and invasion of cells were observed by scratch test and Transwell method. Luciferase assay was used to verify that Sox4 was the target gene of miR-630. Results the expression of miR-630,miR-21 in tri-negative breast cancer was significantly lower than that in normal breast cancer (P0.01). There was no significant difference in the expression of miR-195,miR-134,miR-200a,miR-381,miR-1228 among the three groups (P0.05). Compared with normal breast cancer group and non-tri-negative breast cancer group, the expression of COL1A1,COL1A5,MMP-2,MMP-9,Sox4 in tri-negative breast cancer tissues increased (P0.05). In the cell experiment, compared with the empty plasmid group, the expression of COL1A1,COL1A5,MMP-2,MMP-9,Sox4 in MDA-MB-231 cells decreased after transfection with miR-630mimic (P0.05), and the migration and invasion ability of MDA-MB-231 cells decreased (P0.01). Luciferase assay showed that miR-630 could significantly reduce the fluorescein activity of Sox4-3'-UTR plasmid (P0.05). Compared with the empty plasmid group of overexpression of miR-630, the expression of COL1A1,COL1A5,MMP-2 and MMP-9 in MDA-MB-231 cells increased (P0.05), and the ability of migration and invasion of MDA-MB-231 cells increased (P0.01). Conclusion the expression of miR-630 is low in tri-negative breast cancer, and miR-630 can inhibit the migration and invasion of MDA-MB-231 by down-regulating Sox4.
【作者單位】： 河北大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科;河北省放化療機(jī)制與規(guī)程研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河北大學(xué)附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室;河北大學(xué)附屬醫(yī)院中西醫(yī)腫瘤科;河北大學(xué)附屬醫(yī)院病理科;
【分類號(hào)】：R737.9

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