【摘要】：肺癌是目前中國人癌癥死亡的最主要原因,針對肺癌的早期診斷、早期治療,精準靶向治療等是目前的研究熱點。本論文主要分為兩部分,第一部分:大細胞肺癌作為肺癌的的一種少見類型,其發(fā)生率低,診斷困難,其生長迅速,全身轉移發(fā)生早,預后較其他類型的非小細胞肺癌差,因此提高大細胞肺癌的臨床診斷具有十分重要的意義。大細胞肺癌是指不具有鱗癌、腺癌、小細胞肺癌的病理特點的非小細胞肺癌。Syn、CD56和Cg A等病理標志物來區(qū)分大細胞神經內分泌癌及大細胞非神經內分泌癌,但是診斷的敏感性,準確性不高。Secretagogin(SCGN)是一種在消化系統(tǒng)腫瘤中新發(fā)現(xiàn)的標志物,研究發(fā)現(xiàn)其聯(lián)合臨床經典Maker可以提高診斷的準確率。但是在大細胞神經內分泌癌中表達情況的研究不多。本研究中,我們檢測33例大細胞肺癌以及肺癌細胞系中SCGN的表達,并進一步分析SCGN表達陽性的患者其臨床特征,探討其作為新的神經內分泌標志物對大細胞肺癌的檢測的可能。第二部分:表皮生長因子受體基因作為肺腺癌重要的驅動基因,在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。EGFR酪氨酸激酶抑制劑具有腫瘤抑制作用。在具有EGFR突變的NSCLC患者中,使用EGFR-TKI療效優(yōu)于傳統(tǒng)的化療,且毒副作用小,病人耐受性好。而Rb是人體內重要的抑癌基因,通過控制細胞周期的進程,抑制細胞的過度增殖。Rb-E2F信號通路是調控細胞周期的關鍵信號分子和通路,通常情況下,Rb與E2F1結合,使E2F1沒有活性,但在腫瘤中經常有各種因素導致Rb失活,使細胞增殖,導致腫瘤發(fā)生。多項研究已經證實,在肺癌中普遍存在Rb蛋白的表達異常。比如,有研究顯示非小細胞肺癌中約20%-40%存在Rb蛋白表達降低。因此Rb的異常普遍存在于肺癌中,是肺癌重要的發(fā)病因素。我們通過免疫組化檢測23例EGFR突變的肺腺癌患者標本中Rb、pRb-780和pRb-795的表達情況,分析與患者的臨床信息的關系,探討使用細胞周期抑制劑是否能有效抑制EGFR突變細胞的惡性增殖。第一部分:(1)首先在用Western Blot檢測A549、H661、H1650、H292、H358、HEK293、3T3細胞系中SCGN、Cg A、Syn、CD56的表達,結果示Syn,SCGN與Cg A在H1650中高表達,在H358,H292以及H661中均呈低表達或者不表達,具有一定的相關性,CD56僅在A549細胞系中高表達。(2)我們進行細胞免疫組化染色進一步驗證肺癌細胞系中SCGN的表達情況以及表達位置,結果提示:SCGN在免疫組化中染色結果與免疫蛋白印跡的結果是一致的。在HEK293以及A549中高表達,并在細胞核以及細胞質中表達。進一步在A549細胞系中對四種Maker進行免疫熒光共定位檢測,結果示在A549細胞中存在共定位表達。(3)我們通過免疫組化以及免疫熒光驗證在33例既往術后診斷為大細胞肺癌值標本中SCGN的表達以及與其他三種Maker的表達位置關系。在17例LCNEC患者中有16例呈SCGN陽性表達,16例大細胞肺癌患者中只有2例陽性(p0.001)。說明SCGN的表達與大細胞神經內分泌癌顯著相關且SCGN與Cg A、Syn、CD56在大細胞肺癌中表達具有一致性(p=0.001,p=0.003和p=0.019);分析SCGN蛋白的表達與性別、年齡、吸煙狀況、轉移狀態(tài)和臨床分期,未見相關性。免疫熒光結果示SCGN與Cg A,Syn和CD56在腫瘤組織細胞中共定位表達,同時SCGN表達的范圍以及染色強度要明顯高于其他的標志物。第二部分:在23例EGFR突變的肺腺癌患者的癌組織和肺癌周圍的正常肺組織中,分別進行Rb,pRb-780,pRb-795的免疫組化染色。結果示:(1)69.6%(16/23)的患者存在Rb表達降低/缺失,73.9%(17/23)的患者存在pRb-780染色增強,69.6%(16/23)患者存在pRb-795的過表達。(2)Rb的表達情況與患者臨床病理生理特征分析后發(fā)現(xiàn),在不同年齡、性別、吸煙史、臨床分期、腫瘤位置及不同的EGFR突變位點的患者中未見顯著性差異。(3)進一步分析Rb,pRb-780,pRb-795的表達與患者臨床信息的關系,在肺癌中Rb的表達情況與患者臨床病理生理特征分析后發(fā)現(xiàn),與年齡、性別、吸煙史、臨床分期、腫瘤位置及不同的EGFR突變位點沒有顯著性差異;(4)pRb-780蛋白在III期/IV期患者中與I期/II期患者相比,pRb-780蛋白過表達率更高,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.022);pRb-795在I期/II期患者相比,III期/IV期有更多的患者存在過表達,但是差異不顯著(P=0.074);結論:1.SCGN在肺癌細胞系以及大細胞肺癌組織中高表達,且SCGN與CD56,Cg A,Syn,存在共定位表達;SCGN表達的陽性率,染色程度明顯高于其他的神經內分泌標志物,提示SCGN可以單獨或者聯(lián)合其他的標志物用于神經內分泌腫瘤的診斷。2.在EGFR突變的肺腺癌患者中,Rb的表達缺失/減弱或過度磷酸化;Rb功能異常可能是EGFR突變肺腺癌患者中存在的重要發(fā)病機制。
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【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：2251622