【摘要】：[目的]腎細胞癌在全世界是非常常見的腎惡性腫瘤之一,在人腫瘤中占2-3%,透明細胞癌是最常見的類型。盡管當(dāng)前醫(yī)學(xué)診療技術(shù)的快速提高,特別是影像學(xué)診斷鑒別技術(shù)的高速發(fā)展,腎腫瘤患者的預(yù)后仍然不良。相比較非轉(zhuǎn)移腎腫瘤患者的腫瘤特異性存活率(70%),轉(zhuǎn)移性腎腫瘤患者5年腫瘤特異性存活率僅為27.1%,而且腎透明細胞癌傾向于轉(zhuǎn)移。令人遺憾的是,腎腫瘤的轉(zhuǎn)移的機制和對治療抵抗性,我們現(xiàn)在仍然沒有完全清楚,這里仍然需要更多研究和關(guān)注。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),是組織中表皮細胞向間皮細胞轉(zhuǎn)換的病理生理過程,在腫瘤向鄰近和遠處組織器官侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著非常重要的作用。發(fā)生EMT過程中,表皮細胞失去它的細胞極性,以及細胞和細胞之間的緊密連接,進而獲得間皮細胞的特征,使腫瘤細胞具有較強的侵襲轉(zhuǎn)移能力,轉(zhuǎn)移播散至遠處的臟器器官。這個現(xiàn)象過程由腫瘤微環(huán)境中的多個復(fù)合體和生長因子所引起,TGF-β就是這樣一個在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中具有促進和抑制雙重作用的因子。已有研究關(guān)注TGF-β在腫瘤發(fā)生EMT的不同階段發(fā)揮著的重要作用,但其在EMT初始反應(yīng)過程的作用仍存在未明確之處。Smad4被認為是TGF-β通路和BMP信號通路的關(guān)鍵中間傳導(dǎo)蛋白,研究顯示Smad4蛋白的缺失使TGF-β經(jīng)典的信號通路失去功能,而TGF-β從早期的腫瘤抑制作用到晚期的腫瘤促進作用。通過TGF-β信號通路的經(jīng)典和非經(jīng)典的途徑,TGF-β因子發(fā)揮著潛在的誘導(dǎo)形成EMT的作用,Smad4蛋白可以作為腎腫瘤患者預(yù)后的獨立因子。組蛋白乙酰化和去乙�；墙M蛋白表觀學(xué)修飾一種,調(diào)控基因表達的一種機制。組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶和去乙�；赴l(fā)揮重要作用,伴隨著組蛋白的乙�；腿ヒ阴；�,從而影響著腫瘤基因表達的沉默和激活。VPA屬于Ⅰ類HDAC類抑制劑,數(shù)十年來作為經(jīng)典的抗癲癇藥物用于臨床,研究發(fā)現(xiàn)VPA還具有多種的抗腫瘤潛能,具有抑制腫瘤細胞的增殖,生長和分化,以及腎癌細胞的周期,凋亡。根據(jù)目前的研究,VPA具有調(diào)控Smad4的表達和抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的能力,鑒于Smad4在EMT過程中的重要作用,我們認為VPA可能通過調(diào)節(jié)Smmad4蛋白,進而抑制EMT過程,達到抑制腎腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用。[方法]:腎癌細胞系給以不同濃度、不同作用時間的VPA刺激,利用實時定量PCR技術(shù)和免疫蛋白印跡技術(shù)驗證VPA作用后Smad4和EMT相關(guān)指標的改變。以過表達Smad4質(zhì)粒和小干擾RNA轉(zhuǎn)染腎腫瘤細胞786-0,通過免疫蛋白印記技術(shù)實驗檢測在上調(diào)或下調(diào)Smad4水平后,786-0細胞EMT相關(guān)蛋白指標的改變。利用免疫組化技術(shù)檢測省立醫(yī)院東院病理科,39例腎透明細胞癌臨床標本中,Smad4,TIF1-γ和TGF-β蛋白表達量差異。[結(jié)果]:根據(jù)VPA調(diào)控EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子,我們的研究指出VPA抑制腎癌的EMT過程是通過改變Smad4的表達水平,Smad4經(jīng)過TGF-β1的誘導(dǎo),形成Smad3/4復(fù)合物從而誘導(dǎo)腫瘤EMT過程,從而可作為抗腫瘤的靶點抑制腎癌細胞的侵襲能力。
[Abstract]:[Objective] Renal cell carcinoma (RCC) is one of the most common renal malignancies in the world, accounting for 2-3% of all human tumors, and clear cell carcinoma is the most common type. The tumor-specific survival rate (70%) of patients with metastatic renal tumors was only 27.1% at 5 years, and clear-cell renal carcinoma tended to metastasize. Unfortunately, the mechanisms of metastasis and resistance to treatment of renal tumors are still not fully understood. More research and attention are needed here. Transforming (EMT) is a pathophysiological process in which epidermal cells transform into mesothelial cells. It plays an important role in the invasion and metastasis of tumor to adjacent and distant tissues and organs. This phenomenon is caused by multiple complexes and growth factors in the tumor microenvironment. TGF-beta is such a factor that can promote and inhibit tumor invasion and metastasis. Smad4 is considered to be a key intermediate transduction protein in the TGF-beta pathway and BMP signaling pathway. Studies have shown that the deletion of Smad4 proteins disrupts the classical signal pathway of TGF-beta and TGF-beta is suppressed by early tumors. Through the classical and non-classical pathways of the TGF-beta signaling pathway, TGF-beta plays a potential role in inducing the formation of EMT. Smad4 protein can be used as an independent prognostic factor in patients with renal tumors. Histone acetylation and deacetylation are epigenetic modifications of histones that regulate gene expression. Histone acetyltransferases and deacetylases play an important role, accompanied by histone acetylation and deacetylation, which affect the silence and activation of tumor gene expression. VPA belongs to class I HDAC inhibitors. For decades, VPA has been used as a classical antiepileptic drug in clinic. It has been found that VPA also has a variety of anti-swelling properties. According to current research, VPA has the ability to regulate the expression of Smad4 and inhibit the invasion and metastasis of tumor. Considering the important role of Smad4 in the process of EMT, we believe that VPA may inhibit the EMT process by regulating the Smmad4 protein. [Methods] Renal cancer cell lines were stimulated by VPA at different concentrations and at different time of action. The changes of Smad4 and EMT related indexes after VPA treatment were verified by real-time quantitative PCR and Western blotting. Smad4 plasmid and small interfering RNA were overexpressed and transfected into renal tumor cells 786-0. Immunohistochemistry was used to detect the expression of Smad4, TIF1-gamma and TGF-beta in 39 cases of renal clear cell carcinoma (RCC) in the Department of Pathology, East Hospital of Provincial Hospital. Our study indicates that VPA inhibits the EMT process of renal cell carcinoma by altering the expression of Smad4. Smad4 is induced by TGF-beta 1 to form Smad3/4 complex, which induces the EMT process of tumor, and can be used as an anti-tumor target to inhibit the invasion of renal cell carcinoma.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.11

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本文編號：2226858