【摘要】：[背景]胰腺癌早期即具有極強的侵襲轉(zhuǎn)移能力,導(dǎo)致臨床上確診胰腺癌的患者手術(shù)可切除率低,臨床預(yù)后極差。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT)被認為是腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵機制之一,但通常只能對原位腫瘤及轉(zhuǎn)移灶進行研究,無法對腫瘤細胞血行轉(zhuǎn)移過程中的EMT進行觀察,因此少有針對胰腺癌EMT全程的研究。而循環(huán)腫瘤細胞(Circulating tumor cell, CTC)除可作為“液體活檢”之外,因其產(chǎn)生與EMT直接相關(guān)也被認為是研究循環(huán)血中EMT的重要工具,使得針對胰腺癌原位腫瘤-外周血腫瘤細胞-轉(zhuǎn)移灶的EMT全程研究成為可能。[目的]1.評估胰腺癌CTC作為“液體活檢”的臨床應(yīng)用前景。2.通過比較胰腺癌原位腫瘤、外周血CTC和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中上皮和間質(zhì)標(biāo)志物的表達對胰腺癌EMT的全程進行解析。[方法]1.采用SET-iFISH法對胰腺癌患者外周血CTC進行分類計數(shù)及動態(tài)監(jiān)測,分析不同分類計數(shù)與手術(shù)、化療、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、臨床病理及預(yù)后的相關(guān)性。2.采用芯片法對胰腺癌患者外周血CTC進行上皮標(biāo)志物E-cadherin和間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin的染色,分析不同EMT分類情況與手術(shù)、化療、臨床病理的相關(guān)性。3.應(yīng)用免疫組化對確診胰腺導(dǎo)管腺癌患者的原位腫瘤及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中上皮標(biāo)志物E-cadherin和間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin進行染色及評分,分析EMT水平與臨床病理及預(yù)后的相關(guān)性；并通過與芯片法中CTC染色情況比較對胰腺癌EMT全程進行解析。[結(jié)果]1. SET-iFISH法：研究共對27名研究對象(20名胰腺導(dǎo)管腺癌患者、5名胰腺良性占位及2名健康受試者)的63例血標(biāo)本進行檢測。CTC分類計數(shù)與手術(shù)、化療、臨床病理特征呈現(xiàn)一定變化趨勢,而術(shù)前檢測到CTM的患者具有更短的OS(P=0.027)和PFS(p=0.015)。在原位腫瘤及胰腺癌腹水轉(zhuǎn)移細胞中以上皮型細胞為主,而外周血CTC中絕大多數(shù)為非上皮型細胞。2.芯片法：研究共對24名研究對象(22名胰腺導(dǎo)管腺癌患者及2名健康受試者)的46例血標(biāo)本進行檢測,并對CTC中EMT情況(E、EM、E=M、EM和M型)進行分類計數(shù)。手術(shù)可導(dǎo)致CTC總數(shù)(p=0.005)及M型CTC(p=0.000)計數(shù)下降,而化療則導(dǎo)致E型CTC (p=0.004)計數(shù)下降,進而導(dǎo)致間質(zhì)為主型CTC比例則呈上升趨勢。CTC總數(shù)與臨床分期、T分期及遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)(p0.05),但CTC中上皮和間質(zhì)比例與侵襲轉(zhuǎn)移等臨床病理特征間相關(guān)性不具有統(tǒng)計學(xué)意義。3.研究共納入27名確診胰腺導(dǎo)管腺癌的患者,其癌組織中E-cadherin的IHC評分與分化程度(p=0.016)呈正相關(guān),而Vimentin與分化程度負相關(guān)(p=0.016)。EM組和EM組平均無病生存期分別為627.5±49.0天和337.1±80.9天,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.867,p=0.027)。胰腺癌癌組織中E-cadherin表達下降而Vimentin表達升高。胰腺癌原位腫瘤及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中以E-cadherin表達為主,而外周血CTC上上皮及間質(zhì)比例約各占50%。[結(jié)論]1.液體活檢：CTM與胰腺癌不良預(yù)后密切相關(guān)；胰腺癌CTC分類計數(shù)與臨床分期、T分期及遠處轉(zhuǎn)移相關(guān),并隨手術(shù)、化療、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移成一定變化趨勢。2.胰腺癌EMT全程：胰腺癌原位腫瘤-外周血CTC-轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)呈現(xiàn)EMT/MET變化趨勢,EMT與化療及不良預(yù)后相關(guān),但其與侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系仍需進一步研究。
[Abstract]:[background] pancreatic cancer has a very strong invasion and metastasis ability in the early stage, resulting in low surgical excision rate and poor clinical prognosis in patients with clinically confirmed pancreatic cancer. Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) is considered to be one of the key mechanisms of tumor invasion and metastasis, but usually only in situ tumors and metastases. The study can not be used to observe the EMT in the metastasis of tumor cells. Therefore, there are few studies on the whole process of pancreatic cancer EMT, and the Circulating tumor cell (CTC) can be used as a "liquid biopsy", and the direct correlation with EMT is also recognized as an important tool to study EMT in circulating blood. EMT in situ tumor of pancreatic cancer - peripheral blood tumor cell metastasis is possible. [Objective]1. to evaluate the clinical application of pancreatic cancer CTC as "liquid biopsy".2. through comparison of pancreatic cancer in situ tumors, the expression of epithelial and interstitial markers in peripheral blood CTC and metastatic lymph nodes for the whole process of pancreatic cancer EMT. Methods]1. was used to count and monitor the peripheral blood CTC of the patients with pancreatic cancer by SET-iFISH method. The correlation between different classification counts and surgery, chemotherapy, recurrence and metastasis, clinicopathology and prognosis of.2. were analyzed by chip method for the staining of the epithelial markers E-cadherin and the interstitial marker Vimentin of the peripheral blood CTC of the pancreatic cancer patients. The correlation of different EMT classification, operation, chemotherapy, and clinicopathological correlation.3. applied immunohistochemistry to stain and score the epithelial markers E-cadherin and interstitial marker Vimentin in the patients with pancreatic ductal adenocarcinoma in situ, and to analyze the correlation between the level of EMT and the clinicopathology and prognosis. The whole process of EMT in pancreatic cancer was analyzed by CTC staining. [results]1. SET-iFISH method: a total of 63 blood specimens of 27 subjects (20 patients with pancreatic duct adenocarcinoma, 5 benign pancreatic occupying sites and 2 healthy subjects) were examined for the.CTC classification count and operation, chemotherapy and clinicopathological features. Patients with CTM before operation had shorter OS (P=0.027) and PFS (p=0.015). In situ tumors and pancreatic carcinoma ascites metastasis cells were dominant, while most of the peripheral blood CTC was non epithelial cell.2. chip method: a total of 24 subjects (22 patients with pancreatic ductal adenocarcinoma and 2 healthy subjects) were studied. The blood samples were detected and the EMT status in CTC (E, EM, E=M, EM and M type) was counted. The operation could lead to the decrease of the total number of CTC (p=0.005) and M CTC (p=0.000). Shift correlation (P0.05), but the correlation between the proportion of epithelial and interstitial tissue in CTC and invasion and metastasis was not statistically significant. The.3. study was included in 27 patients with pancreatic ductal adenocarcinoma. The IHC score of E-cadherin was positively correlated with the degree of differentiation (p=0.016) in the cancer tissue, while Vimentin was negatively correlated with the degree of differentiation (p=0.016).EM. The average disease-free survival period of group and EM group was 627.5 + 49 days and 337.1 + 80.9 days respectively. The difference was statistically significant (x 2=4.867, p=0.027). The expression of E-cadherin in pancreatic cancer tissues was decreased, and Vimentin expression was increased. The majority of the pancreatic carcinoma in situ tumor and metastatic lymph node were E-cadherin table, while the proportion of epithelium and interstitial in peripheral blood was about CTC 50%.[conclusion]1. liquid biopsy: CTM is closely related to poor prognosis of pancreatic cancer; CTC classification of pancreatic cancer is associated with clinical staging, T staging and distant metastasis, and with surgery, chemotherapy, recurrence and metastasis to a certain trend of.2. pancreatic cancer EMT: pancreatic cancer in situ tumor - peripheral blood CTC- transfer lymph nodes present EMT/MET trend. EMT is associated with chemotherapy and poor prognosis, but its relationship with invasion and metastasis still needs further study.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.9

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本文編號：2162309