【摘要】：口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)簡稱口腔癌,是頭頸部最常見的惡性腫瘤,可造成患者進食、語言、呼吸等功能障礙及容貌、心理改變,晚期患者生存率低。局部復發(fā)和頸部淋巴結及遠處轉移是其致死的主要原因。近年來,腫瘤微環(huán)境在口腔癌發(fā)生發(fā)展中的作用備受關注,腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associated macrophages,TAMs)作為主要的基質細胞,能誘導上皮間質轉化(epithelial to mesenchymal transition,EMT),與口腔癌進展及預后密切相關。目的:分析CD68,CD163在口腔癌組織中的表達與患者臨床病理特征、預后及EMT的關系,探討TAMs誘導口腔癌細胞發(fā)生EMT促其侵襲轉移的可能機制。方法:本研究首先通過免疫組化檢測127例口腔癌組織標本中TAMs標記物CD68、CD163及EMT相關標記物的表達水平,統(tǒng)計分析其與口腔癌臨床病理特征及預后的關系;同時,通過體外誘導分化M1型和M2型巨噬細胞,采用實時定量PCR,免疫蛋白印跡技術和免疫熒光對其表型進行鑒定;在此基礎上,構建不同的炎癥微環(huán)境,分別刺激口腔癌細胞cal27,通過實時定量PCR,免疫蛋白印跡技術和免疫熒光、細胞侵襲和劃痕實驗等方法檢測了不同炎癥微環(huán)境對口腔癌細胞侵襲、增殖能力的影響以及EMT相關的標記物表達水平,進一步探討了 TAMs誘導口腔癌細胞發(fā)生EMT的機制。結果:CD68陽性巨噬細胞浸潤影響患者生存率,而CD163陽性巨噬細胞浸潤和口腔癌細胞高表達CD163均與患者的生存密切相關,是重要的獨立預后因子。我們發(fā)現(xiàn)CD68和CD163不僅在巨噬細胞中表達,在口腔癌細胞中亦有表達,并且口腔癌細胞表達CD163與EMT標記物E-cadherin和vimentin顯著相關,提示TAMs與口腔癌EMT密切相關。通過體外實驗經(jīng)GM-CSF刺激后巨噬細胞CD68表達升高,M-CSF刺激后巨噬細胞CD163,CD206,IL10表達上升,成功誘導分化獲得M1型和M2型巨噬細胞。分別收集其條件培養(yǎng)基刺激口腔癌細胞cal27發(fā)現(xiàn),M2型條件培養(yǎng)基能誘導cal27發(fā)生EMT,侵襲和轉移能力增強。而分別加入TGF-β細胞因子后,M1型+TGF-β具有誘導cal27發(fā)生EMT,促其侵襲轉移的能力;但是M2型+TGF-β則使cal27發(fā)生EMT的能力減弱,侵襲能力下降。相反,兩組條件培養(yǎng)基中加入TGF-β抑制劑后,cal27發(fā)生EMT和侵襲轉移能力均下降。結論:本研究發(fā)現(xiàn),TAMs與口腔癌發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關,其可能的機制為TAMs可誘導口腔癌細胞發(fā)生EMT而促進其侵襲轉移,TGF-β在其中可能發(fā)揮著關鍵作用。
[Abstract]:Oral squamous cell carcinoma (oral squamous cell carcinomas) is the most common malignant tumor in head and neck. Local recurrence and cervical lymph node and distant metastasis were the main causes of death. In recent years, the role of tumor microenvironment in the occurrence and development of oral cancer has attracted much attention. As the main stromal cells, tumor-associated macrophages can induce the transition of epithelial stroma into (epithelial to mesenchymal, which is closely related to the progression and prognosis of oral cancer. Objective: to investigate the relationship between the expression of CD68 and CD163 and clinicopathological features, prognosis and EMT in oral cancer cells, and to explore the possible mechanism of EMT induced invasion and metastasis of oral cancer cells induced by TAMs. Methods: in this study, the expression of TAMs markers CD68, CD163 and EMT related markers were detected by immunohistochemistry in 127 cases of oral carcinoma, and the relationship between CD68 and CD163 and clinicopathological features and prognosis of oral carcinoma was analyzed statistically. The phenotypes of M 1 and M 2 macrophages were identified by real-time quantitative PCR, Western blot and immunofluorescence, and different inflammatory microenvironments were constructed on the basis of in vitro induction and differentiation of M 1 and M 2 macrophages. Oral cancer cell cal27 was stimulated by real-time quantitative PCR, Western blot, immunofluorescence, cell invasion and scratch test. The invasion of oral cancer cells was detected by different inflammatory microenvironments. The effect of TAMs on proliferation and the expression level of EMT related markers further explored the mechanism of EMT induced by TAMs. Results the survival rate of patients was affected by the infiltration of macrophages positive to CD68, while that of CD163 positive macrophages and high expression of CD163 in oral cancer cells were closely related to the survival of the patients, which was an important independent prognostic factor. We found that CD68 and CD163 were expressed not only in macrophages, but also in oral cancer cells. The expression of CD163 in oral cancer cells was significantly correlated with EMT markers E-cadherin and vimentin, suggesting that TAMs was closely related to EMT. The expression of CD68 in macrophages was increased after GM-CSF stimulation in vitro. After stimulation with M-CSF, the expression of CD163, CD206 and IL-10 in macrophages was increased, and M1 and M2 macrophages were successfully induced to differentiate into M 1 and M 2 type macrophages. The conditioned medium was collected to stimulate oral cancer cell cal27. It was found that M 2 conditioned medium could induce cal27 to develop EMTs and enhance the ability of invasion and metastasis. TGF- 尾 can induce the invasion and metastasis of cal27, but M2 TGF- 尾 can weaken the ability of cal27 to produce EMT and decrease the ability of invasiveness. On the contrary, TGF- 尾 inhibitor decreased the ability of EMT and invasion and metastasis in both groups. Conclusion: Tams are closely related to the occurrence, development and prognosis of oral cancer. The possible mechanism of TGF- 尾 may be that TAMs can induce the occurrence of EMT and promote the invasion and metastasis of oral cancer cells. TGF- 尾 may play a key role in this study.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R739.8

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 Jatin Shah;黃俊偉;周維國;黃志剛;;口腔癌[J];中國醫(yī)學文摘(耳鼻咽喉科學);2008年06期

2 楊靜;梁新華;;年輕人口腔癌的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2008年06期

3 鄭家偉;鐘來平;張志愿;;口腔癌的預防[J];中國口腔頜面外科雜志;2009年02期

4 孫玉娟;孫正;;乙醇與口腔癌臨床流行病學的研究進展[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2009年02期

5 萬闊;;用好牙刷 防口腔癌[J];農家科技;2009年04期

6 陸新萍;王代友;;口腔癌多藥耐藥的研究現(xiàn)狀[J];醫(yī)學綜述;2010年06期

7 宋文婷;李敏;彭驪蘇;林梅;;口腔癌和癌前病變臨床檢測的現(xiàn)狀[J];臨床口腔醫(yī)學雜志;2010年05期

8 秦偉;;口腔癌影響因素研究[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2010年06期

9 ;發(fā)達國家及發(fā)展中國家口腔癌發(fā)病率[J];中國口腔頜面外科雜志;2010年05期

10 曹婷;;口腔癌的病因與預防[J];中國醫(yī)藥指南;2011年14期

相關會議論文 前10條

1 王麗薇;孫莉;譚寧;;人細胞色素P450 2A6基因在口腔癌中表達的研究[A];中國解剖學會第十一屆全國組織學與胚胎學青年學術研討會論文匯編[C];2009年

2 曹新穎;;口腔癌和癌前病損的研究[A];中華口腔醫(yī)學會全科口腔醫(yī)學專業(yè)委員會第一次學術年會會議論文集[C];2009年

3 賀宇彤;陳萬青;張思維;李賀;楊楊;;中國2004～2005年口腔癌死亡分析——第三次死因回顧抽樣調查資料分析[A];全國腫瘤流行病學和腫瘤病因學學術會議論文集[C];2011年

4 趙士芳;劉雁鳴;何立波;樊立潔;;口腔癌中誘導型一氧化氮合酶表達與微血管形成關系的研究[A];第一屆全國口腔頜面部腫瘤學術會議論文匯編[C];2001年

5 吳煜農;王陳飛;宋曉萌;葉金海;;口腔癌患者手術前后生存質量狀況的初步研究[A];中華醫(yī)學會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學術會議論文匯編（下）[C];2007年

6 孫玉娟;孫正;;飲酒與口腔癌臨床流行病學現(xiàn)況的初步研究[A];第七屆全國口腔黏膜病暨第五屆口腔中西醫(yī)結合大會論文匯編[C];2008年

7 李向春;張素欣;段玉芹;;口腔癌患者手術前后細胞免疫功能變化的檢測及臨床意義[A];第五屆全國中醫(yī)藥免疫學術研討會——暨環(huán)境·免疫與腫瘤防治綜合交叉會議論文匯編[C];2009年

8 張陳平;;口腔癌治療規(guī)范的思考[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

9 王陳飛;宋曉萌;吳煜農;;口腔癌患者手術前后生存質量狀況的初步研究[A];第八次全國口腔頜面—頭頸腫瘤會議論文匯編[C];2009年

10 張志華;曹新穎;;口腔癌的早期診斷和癌前病損的研究[A];中華口腔醫(yī)學會全科口腔醫(yī)學專業(yè)委員會第一次學術年會會議論文集[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 上海瑞金醫(yī)院瑞安腫瘤中心 蔡德江;劣質假牙誘發(fā)口腔癌[N];健康時報;2008年

2 本報記者 項錚;嚼檳榔真能患口腔癌嗎？[N];科技日報;2013年

3 重慶萬州 崔鍵;可怕的口腔癌[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

4 ;男人口腔癌的警訊[N];貴州日報;2005年

5 郭成兵;細說口腔癌[N];健康報;2004年

6 健康時特約記者　 劉遠橋 鄒爭春;80%口腔癌可以預防[N];健康時報;2006年

7 黃芳;怎樣預防口腔癌[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

8 浙江省人民醫(yī)院口腔科副主任醫(yī)師 黃煒邋宋黎勝 整理;口腔癌與生活方式有關[N];健康報;2007年

9 劉橋斌;臺灣口腔癌因檳榔高發(fā)？[N];健康時報;2007年

10 李博;上海找到口腔癌治療新方案[N];科技日報;2008年

相關博士學位論文 前10條

1 蔡菁華;多能干細胞因子Oct4和Sox2對口腔癌發(fā)生發(fā)展作用的實驗研究[D];鄭州大學;2016年

2 胡永;腫瘤相關巨噬細胞促口腔癌侵襲轉移的機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2016年

3 余世斌;蛋白激酶C在口腔癌形成過程中的作用和分子機制研究[D];武漢大學;2004年

4 王蓓克;基于金納米棒的多功能復合材料在口腔癌診斷與治療中的應用[D];武漢大學;2015年

5 劉華;口腔癌引流區(qū)淋巴結反應性增生與轉移關系的研究[D];四川大學;2005年

6 張素欣;不同方式負載抗原后外周血樹突狀細胞對口腔癌抑瘤作用的體內外實驗研究[D];河北醫(yī)科大學;2007年

7 韓波;反義HIF-1α基因轉染提高口腔癌放療敏感性的相關基礎研究[D];四川大學;2005年

8 謝春;化療后口腔癌手術安全邊界確定的臨床及病理學研究[D];四川大學;2004年

9 陳方淳;腫瘤壞死因子α單核苷酸多態(tài)性與口腔癌發(fā)病風險的Meta分析[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

10 王麗京;Slit-Robo信號在口腔癌形成中的功能研究[D];蘭州大學;2008年

相關碩士學位論文 前10條

1 郭大魁;口腔癌與嚼食檳榔相關性研究[D];大連醫(yī)科大學;2008年

2 楊佳;口腔癌患者術前心理健康狀況的調查分析[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

3 蔣麗娟;口腔癌VEGF誘導致耐受性DC對T細胞免疫功能的影響[D];南京大學;2016年

4 王紅媛;羅格列酮與長春新堿合用對人口腔表皮樣癌細胞的抗腫瘤作用研究[D];山東大學;2016年

5 龍小佳;HPV16E6、p53和TLR1在口腔癌中的表達研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

6 周美玲;MT1-MMP調控MMPs表達促口腔癌侵襲轉移的機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2016年

7 丁繼平;3D打印個體化口腔放療支架的研制及初步臨床評估[D];上海交通大學;2015年

8 杜聞;長株潭地區(qū)口腔癌患者血液微量元素檢測臨床相關研究[D];南華大學;2016年

9 馮雪峰;口腔癌患者就醫(yī)延遲現(xiàn)狀及其影響因素的研究[D];大連醫(yī)科大學;2016年

10 李向春;口腔癌患者手術、化療前后細胞免疫功能變化的檢測及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學;2009年

，

本文編號：2155899