本文選題：細(xì)菌外膜囊泡(OMVs) + 樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)　； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：宮頸癌是威脅全球女性健康的第二大惡性腫瘤,在幾乎100%的宮頸癌患者中均檢測(cè)到了人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的存在。除宮頸癌,HPV還可以引起頭頸癌、肛門和生殖道癌等。目前,盡管國(guó)際上已有預(yù)防性HPV疫苗獲批準(zhǔn)上市,但是鑒于疫苗的接種覆蓋面有限、病毒基因型間交叉保護(hù)力有限、以及預(yù)防性疫苗對(duì)于已經(jīng)建立的HPV長(zhǎng)期感染或腫瘤患者,沒(méi)有明顯的治療作用,HPV仍然是人類健康的重大威脅。因此,研發(fā)治療性HPV疫苗,針對(duì)癌前病變和腫瘤進(jìn)行免疫治療,對(duì)于控制HPV相關(guān)疾病具有廣闊的應(yīng)用前景。然而,目前治療性HPV疫苗臨床研究普遍缺乏顯著的治療效果。研究顯示,不能夠激發(fā)高水平的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答,是腫瘤疫苗設(shè)計(jì)中存在的顯著問(wèn)題。因此,積極開(kāi)發(fā)新型抗原遞送系統(tǒng),增強(qiáng)抗原向抗原遞呈細(xì)胞的遞送,是提高疫苗激發(fā)的腫瘤抗原特異性細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度,增強(qiáng)腫瘤疫苗臨床效力的重要策略。細(xì)菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)為一種蛋白脂質(zhì)體納米顆粒,直徑為20-250nm,由革蘭氏陰性菌在生長(zhǎng)過(guò)程中由外膜突起釋放到胞外。OMVs具有成為疫苗載體的諸多特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì):如可基因重組改造,可進(jìn)行大蛋白及多蛋白呈遞,具多種促進(jìn)抗原遞呈細(xì)胞識(shí)別的受體,具自佐劑活性,作為一種納米顆�？梢源龠M(jìn)向淋巴結(jié)趨化等。此外,B群奈瑟腦膜炎OMVs疫苗的成功臨床應(yīng)用,對(duì)于發(fā)展OMVs成為有潛力的疫苗載體有著重要提示作用。近年,有研究者嘗試將外源蛋白整合到OMVs中,例如將肺炎球菌蛋白PspA成功呈遞在沙門氏菌的OMVs以抵御肺炎雙球菌的感染,以及我們前期研究中將Omp22蛋白呈遞在大腸桿菌E.coli的OMVs上以抵御鮑曼不動(dòng)桿菌的感染,展示OMVs經(jīng)基因工程改造,可承載外源大分子抗原蛋白,誘導(dǎo)特異體液免疫應(yīng)答,有效抵御病原菌的攻擊。然而,以大腸桿菌OMVs作為治療性疫苗載體、激發(fā)抗原特異的細(xì)胞免疫應(yīng)答,其技術(shù)、免疫特點(diǎn)、腫瘤干預(yù)效應(yīng)等相關(guān)的研究尚無(wú)報(bào)道。本研究旨在探討重組細(xì)菌外膜囊泡作為一種新型治療性腫瘤疫苗載體的特點(diǎn)與潛力。研究主要包括:1)利用基因工程手段將腫瘤抗原HPV16型E7蛋白呈遞在大腸桿菌OMVs上,獲得重組OMVs疫苗形式;2)在體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞Raw264.7中,考察重組OMVs將自身成分及模式抗原GFP遞送至抗原遞呈細(xì)胞的能力;在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞(BMDCs)中,探討了重組OMVs被高效攝取的能力、囊泡結(jié)構(gòu)在攝取過(guò)程中的重要性及BMDCs攝取OMVs后的成熟情況;3)在C57BL/6小鼠TC-1移植腫瘤模型中,評(píng)價(jià)了呈遞HPV16 E7抗原的重組OMVs激發(fā)特異細(xì)胞免疫的能力及對(duì)已建立腫瘤的治療性干預(yù)效果。結(jié)果表明,經(jīng)利用ClyA及硫氧還蛋白作為引導(dǎo)序列,可將HPV16E7蛋白呈現(xiàn)于OMVs表面及內(nèi)腔;OMVs可被Raw264.7及BMDCs有效攝取,且囊泡結(jié)構(gòu)對(duì)于攝取效率非常重要;OMVs能夠促進(jìn)BMDCs表面共刺激分子CD80、CD86、CD83、CD40等的高表達(dá)及TNFα的分泌,顯著促進(jìn)BMDCs的功能成熟;無(wú)需混合傳統(tǒng)佐劑,重組OMVs同時(shí)誘導(dǎo)了抗原特異的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答,且具有偏向于誘導(dǎo)Th1/CTL的免疫特點(diǎn);重組OMVs治療性免疫顯著抑制了腫瘤的生長(zhǎng);重組OMVs呈遞E7較之wtOMVs直接混合E7以及弗氏佐劑混合E7,具有更強(qiáng)的免疫效應(yīng)。本研究提示,納米級(jí)的大腸桿菌OMVs在腫瘤免疫治療中可以作為一種潛在的新型疫苗遞送載體,有效激發(fā)腫瘤抗原特異的細(xì)胞免疫應(yīng)答。研究為新型治療性腫瘤疫苗突破探討了嶄新的策略。
[Abstract]:In recent years , the research and development of therapeutic HPV vaccine is a major threat to human health . In this study , we have evaluated the ability of recombinant omVs to express HPV16 E7 protein to antigen - presenting cells in vitro . The results show that recombinant omVs can be used as a potential new vaccine delivery vector in tumor immunotherapy , which can effectively stimulate tumor antigen - specific cellular immune response .
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.33

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2 Hancock REW;陳恩臨;;細(xì)菌外膜新概念[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));1992年01期

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本文編號(hào)：2112183