本文選題：腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 + 食管癌　； 參考：《鄭州大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的食管癌發(fā)病率居惡性腫瘤第四位。我國(guó)食管癌發(fā)病率一直位于前列,全世界近50%的食管癌發(fā)生在中國(guó),截止2015年底,我國(guó)新發(fā)食管癌患者達(dá)到了47.79萬(wàn)人,食管癌已然成為嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一。我國(guó)臨床上常見(jiàn)的食管癌類型為食管鱗狀細(xì)胞癌,浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是其高死亡率的原因。研究表明,食管癌的發(fā)生和浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移是多項(xiàng)因子共同協(xié)同的結(jié)果,浸潤(rùn)在腫瘤組織間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞被稱為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(tumour associated macrophages,TAMs),TAMs在不同的微環(huán)境下表現(xiàn)出不同的功能活化,一般分為兩種:一種是經(jīng)典活化的巨噬細(xì)胞,也稱為M1型巨噬細(xì)胞,在腫瘤進(jìn)程中對(duì)瘤細(xì)胞具有抑制和殺傷的作用;另一種是替代性活化的巨噬細(xì)胞,稱為M2型巨噬細(xì)胞,具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖的作用。研究發(fā)現(xiàn)在胃癌、肝癌、卵巢癌等惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中都可見(jiàn)M2型巨噬細(xì)胞的出現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討M2型巨噬細(xì)胞參與食管癌脈管生成的可能機(jī)制,從而為進(jìn)一步尋找抑制食管癌轉(zhuǎn)移的新靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。方法1.將人淋巴瘤U937單核細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),采用免疫細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記該細(xì)胞中CD206、CD163的表達(dá),鑒定其表型。2.采用pma及白介素-4(il-4)將人淋巴瘤u937單核細(xì)胞誘導(dǎo)為單核細(xì)胞來(lái)源的m2型巨噬細(xì)胞,與食管癌ec9706細(xì)胞共培養(yǎng)作為實(shí)驗(yàn)組,將單獨(dú)培養(yǎng)的食管癌ec9706細(xì)胞作為對(duì)照組。3.運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(elisa)分別檢測(cè)兩組細(xì)胞上清液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vegf)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-c(vegf-c)的濃度。4.采用westernblot方法檢測(cè)兩組細(xì)胞的vegf、vegf-c蛋白的表達(dá)。5.運(yùn)用rt-pcr法檢測(cè)各組細(xì)胞中vegf、vegf-cmrna的表達(dá)。6.采用免疫組織化學(xué)法(sp法)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組移植瘤組織中vegf、vegf-c的表達(dá),并運(yùn)用cd206、cd163標(biāo)記tams。7.利用原位雜交法檢測(cè)各組裸鼠移植瘤組織中vegfmrna、vegf-cmrna的表達(dá)。8.采用免疫組化對(duì)cd31染色,標(biāo)記各組裸鼠移植瘤組織中的血管,計(jì)算mvd值。9.采用免疫組化對(duì)d2-40染色,標(biāo)記各組裸鼠移植瘤組織中的淋巴管,計(jì)算lmvd值。10.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,符合正態(tài)分布的計(jì)量資料,統(tǒng)計(jì)分析采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s);陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料均數(shù)間的比較采用t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。結(jié)果:1.人淋巴瘤u937單核細(xì)胞cd163,cd206陽(yáng)性表達(dá)率均為100%。說(shuō)明人淋巴瘤u937單核細(xì)胞可作為tams細(xì)胞繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.人淋巴瘤u937細(xì)胞通過(guò)白介素-4誘導(dǎo)18h后,形態(tài)由球型逐漸變?yōu)槎噙呅?并開始貼壁生長(zhǎng)。3.elisa方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞上清液中vegf濃度為(104.33±0.79),對(duì)照組濃度為(99.81±0.63),兩組結(jié)果進(jìn)行比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。實(shí)驗(yàn)組vegf-c濃度為(224.85±29.33),對(duì)照組濃度為(208.40±24.59),實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。4.westernblot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組中vegf蛋白的表達(dá)量為(0.60±0.04),對(duì)照組vegf蛋白表達(dá)量為(0.19±0.02),二者比較,實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量對(duì)照組,差異具有顯著性(p0.05)。實(shí)驗(yàn)組vegf-c蛋白的表達(dá)量為(1.13±0.23);對(duì)照組VEGF-C蛋白表達(dá)量為(0.75±0.12),兩者比較,實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量高于對(duì)照組,差異具有顯著性(P0.05)。5.經(jīng)過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè),實(shí)驗(yàn)組中VEGF mRNA表達(dá)量(1.33±0.03)大于對(duì)照組(1.18±0.02),兩組比較有差異(P0.05);實(shí)驗(yàn)組VEGF-C mRNA表達(dá)量(1.38±0.06)大于對(duì)照組(1.08±0.04),兩組比較有差異(P0.05)。6.免疫組織化學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組移植瘤組織中VEGF蛋白表達(dá)率(52.41±15.26%)明顯高于對(duì)照組(45.19±18.63%),兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);實(shí)驗(yàn)組VEGF-C蛋白表達(dá)率(48.23±15.32%)大于對(duì)照組(40.69±12.78%),且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。7.免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組中CD206的計(jì)數(shù)(31.22±14.27個(gè)/HP)高于對(duì)照組(26.83±12.11個(gè)/HP),差異具有顯著性(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組中CD163的計(jì)數(shù)(29.78±12.36個(gè)/HP)高于對(duì)照組(22.53±10.38個(gè)/HP),兩組之間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。8.原位雜交方法檢測(cè)VEGF mRNA的表達(dá),結(jié)果實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性率(31.63±13.21%)明顯高于對(duì)照組,(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組中VEGF-C mRNA陽(yáng)性率(37.51±3.59)明顯高于對(duì)照組(31.27±3.12%),兩組之間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。9.實(shí)驗(yàn)組MVD值為(29.21±5.78個(gè)/HP),對(duì)照組MVD值為(26.58±6.53個(gè)/HP),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。10.實(shí)驗(yàn)組LMVD值為(12.13±1.37個(gè)/HP),對(duì)照組LMVD值為(10.09±1.21個(gè)/HP),兩組比較,差異具有顯著性(P0.05)。結(jié)論1.人淋巴瘤U937單核細(xì)胞作為TAMs細(xì)胞,可以促進(jìn)食管癌EC9706細(xì)胞分泌VEGF、VEGF-C因子。2.M2型巨噬細(xì)胞可通過(guò)VEGF、VEGF-C促進(jìn)裸鼠食管癌移植瘤組織血管、淋巴管的生成。
[Abstract]:The expression of vascular endothelial growth factor ( vegf ) and vascular endothelial growth factor - c ( vegf - c ) in esophageal squamous cell carcinoma was detected by immunohistochemistry ( sp method ) . The expression of VEGF - C in the experimental group was significantly higher than that in the control group ( P < 0.05 ) . The expression of VEGF - C in the experimental group was significantly higher than that in the control group ( P < 0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：2011622