本文選題：胃癌 + DLC1�。� 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：1研究背景：胃癌已經(jīng)成為全世界第四大常見的惡性腫瘤和第二大癌癥相關(guān)死亡原因。雖然傳統(tǒng)的組織病理學(xué)分類可以較好地預(yù)測(cè)胃癌的治療結(jié)果和預(yù)后,但具有相同病理組織類型的患者常由于個(gè)體差異而具有不同的預(yù)后,這可能是歸因于遺傳異質(zhì)性的差異。廣泛根治性切除術(shù)是局限期胃癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方式。然而,術(shù)后復(fù)發(fā)仍然是治療失敗的主要原因。不同的胃癌患者對(duì)治療的反應(yīng)不同,目前還沒(méi)有已知明確的生物學(xué)標(biāo)志物可準(zhǔn)確預(yù)測(cè)胃癌輔助化療的療效。氟尿嘧啶類和奧沙利鉑聯(lián)合方案被廣泛的用于胃癌的輔助化療,但是至今也沒(méi)有可靠的分子標(biāo)志物能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)氟尿嘧啶類(氟尿嘧啶注射液或卡培他濱)和奧沙利鉑組合(FP-LOHP)在胃癌輔助化療中的療效。肝癌缺失基因.-1 (deleted in liver cancer 1, DLC1)作為GTP酶激活蛋白(G TPase activated protein, GAP)在腫瘤中發(fā)揮抑制腫瘤活性。起初,D LC1是在肝細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)下調(diào),其下調(diào)在肝細(xì)胞癌中的發(fā)生率約50%。此后,研究陸續(xù)報(bào)道了DLC1 mRNA在諸如淋巴瘤、結(jié)直腸癌和胃癌等多種惡性腫瘤中下調(diào)。研究表明,沉默DLC1可促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移,而恢復(fù)DLC1的表達(dá)能抑制細(xì)胞遷移、增殖等惡性生物學(xué)行為。雖然DLC1基因的下調(diào)在胃癌細(xì)胞系中已被證實(shí),但DLC1蛋白在胃癌中的表達(dá)狀態(tài)及其預(yù)后意義仍不明確,尤其是其在胃癌輔助化療中的作用仍未知。另一方面,DLC1的下調(diào)和尿路上皮癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、肺癌、皮膚黑色素瘤、卵巢癌的不良預(yù)后關(guān)系密切。此外,有研究表明DLC1的低表達(dá)與依托泊苷、卡鉑在肺癌中的化療敏感性有關(guān)。因此我們推測(cè),胃癌中DLC1的表達(dá)狀態(tài)可能通過(guò)影響某些化療藥物的療效而影響預(yù)后�；诋�(dāng)前的研究結(jié)果,我們推測(cè)DLC1在胃癌中的低表達(dá)與其不良預(yù)后有關(guān)。此外,我們還嘗試著就DLC1是否會(huì)影響某些化療藥物的療效進(jìn)行探索。因此,我們用免疫組化染色方法檢測(cè)了DLC1蛋白在胃癌和相應(yīng)的正常粘膜樣本中的表達(dá)水平,并分析了胃癌中DLC1蛋白表達(dá)水平與臨床病理特征、生存、復(fù)發(fā)及輔助化療療效的關(guān)系。2.材料和方法2.1病人隨訪所有納入研究的患者都于2000-2011年在南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院(中國(guó)廣州)行組織病理學(xué)檢查,并被確診為胃癌。所有患者都根據(jù)AJCC癌癥分期手冊(cè)(第7版,2010)分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期。我們還隨訪了各個(gè)患者的術(shù)后復(fù)發(fā)時(shí)間(time to relapse,TTR)和／或總生存時(shí)間(overall survival,OS), TTR為手術(shù)切除到復(fù)發(fā)(磁共振成像或CT檢查發(fā)現(xiàn))的時(shí)間段,OS則為手術(shù)到胃癌相關(guān)死亡的時(shí)間段,因其他原因死亡的情況則定義為刪失。所有數(shù)據(jù)均源自醫(yī)院病歷系統(tǒng)記錄或電話隨訪。共收集288對(duì)胃癌樣本和相應(yīng)的癌旁組織。用福爾馬林固定所有樣品,并進(jìn)行石蠟包埋。2.2免疫組化染色評(píng)分兩個(gè)未接觸過(guò)患者臨床病理資料的病理學(xué)專家對(duì)DLC1蛋白的免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)分。免疫組化染色的總分等于染色面積和染色強(qiáng)度得分的乘積。于10倍鏡的視野下進(jìn)行觀察并評(píng)分,基于每100個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性染色細(xì)胞的平均百分比計(jì)算染色面積,染色面積評(píng)分具體標(biāo)準(zhǔn)如下：0分(0%-10%),1分(11%-25%),2分(26%-50%),3分(51%-75%),和4分(大于75%)。染色強(qiáng)度具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：0分(陰性),1分(弱黃色),2分(黃色或深黃)和3分(褐色或深褐色)。所有患者根據(jù)染色總分分為兩組：DLCl蛋白低表達(dá)組(總分0-5)和DLC1蛋白高表達(dá)組(總分6-12)。2.3統(tǒng)計(jì)分析我們用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。用卡方檢驗(yàn)評(píng)估DLC1蛋白表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性。采用one-way ANOVA或Student's t-test檢驗(yàn)對(duì)DLC1蛋白免疫組化染色總分進(jìn)行分析比較。用Kaplan-Meier法作生存曲線,并采用對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)(log-rank)檢測(cè)生存曲線之間的差異。用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸進(jìn)行單因素和多因素的分析以研究死亡和復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。本研究中所有P值都為雙向,且P0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3研究結(jié)果3.1患者臨床病理特征及治療情況總結(jié)我們對(duì)288例患者的總生存時(shí)間(OS)進(jìn)行了隨訪(IB-III期251例,IV期37例)。其中,251例IB-III期患者行D2胃大部切除術(shù),術(shù)后接受了輔助化療,但均未接受過(guò)放化療或術(shù)前化療。此外,對(duì)所有IB-III期患者還進(jìn)行了至復(fù)發(fā)時(shí)間(TTR)的隨訪。在接受過(guò)輔助化療的患者中,有104例接受了奧沙利鉑聯(lián)合氟尿嘧啶類(FP-LOHP)輔助化療,而其他147例則接受了不包含F(xiàn)P-LOHP的化療方案治療。所有患者年齡均處于25～85歲不等(中位年齡52歲)。隨訪時(shí)間為0.5～79.0月不等(中位隨訪時(shí)間為26.3月)。3.2 I)LCl蛋白在胃癌和周圍正常胃黏膜組織中的考我們用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)了所有石蠟包埋胃癌樣品和相應(yīng)癌旁正常組織中DLC1蛋白的表達(dá)狀態(tài)。結(jié)果顯示,DLC1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中,且大多數(shù)胃癌樣品中DLC1蛋白的免疫組化染色評(píng)分低于相應(yīng)的癌旁組織[73.61%(212/288對(duì))](P0.001)。DLC1蛋白低表達(dá)在胃癌組織樣本中的發(fā)生率[75.69%(218/288對(duì))]較正常黏膜高[21.18%(61/288)](P0.001)。3.3 DLC1蛋白表達(dá)水平與胃癌臨床病理特征的關(guān)系為了進(jìn)一步探索DLC1蛋白在胃癌進(jìn)展過(guò)程中的作用,我們分析了DLC1蛋白表達(dá)水平與患者臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系�？ǚ綑z驗(yàn)結(jié)果顯示,DLC1蛋白表達(dá)高低與胃癌的TMN分期(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況(N)(P0.001)、腫瘤浸潤(rùn)深度(T)(P=0.004)、腫瘤大小(P0.001)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況(P=0.040)有關(guān)。但是DLC1蛋白表達(dá)水平與如下病理特征無(wú)明顯關(guān)系：腫瘤的分化程度(P=0.098),年齡(P=0.814)及性別(P=0.260)。同時(shí),DLC1蛋白在胃癌中表達(dá)的總體水平顯著低于相對(duì)應(yīng)的正常黏膜組織(P0.001)。此外,TNM分期較晚(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移較多(P0.001)、浸潤(rùn)深度較深(P0.001)、腫瘤體積較大(P0.001)以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率較高(P0.001)的胃癌組織樣本中DLC1蛋白染色評(píng)分往往較低。然而,不同分化程度的腫瘤之間免疫組化染色評(píng)分沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.116)。這些結(jié)果提示,DLC1蛋白表達(dá)水平在胃癌進(jìn)展過(guò)程中降低。此外,我們還對(duì)胃癌中DLC1蛋白表達(dá)水平與某些化療療效之間的關(guān)系進(jìn)行了研究。3.4胃癌中DLCl蛋白水平與預(yù)后的關(guān)系我們進(jìn)行了單因素和多因素回歸分析以探索胃癌中DLC1蛋白的預(yù)后意義。單因素分析結(jié)果顯示,腫瘤大小(P0.001)、腫瘤分化程度(P0.001)、TNM分期(P0.001)、腫瘤侵襲深度(T)(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(N)(P0.001)和DLC1蛋白表達(dá)水平(P0.001)均與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)。且腫瘤大小(P0.001)、腫瘤分化程度(P0.001)、TNM分期(P0.001)、腫瘤侵襲深度(T)(P0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況(N)(P0.001)及DLC1蛋白表達(dá)水平(P0.001)也與胃癌患者的生存相關(guān)。與此同時(shí),對(duì)這些參數(shù)進(jìn)行多變量分析,我們發(fā)現(xiàn)DLC1蛋白表達(dá)水平是復(fù)發(fā)(P=0.004)和生存(P=0.001)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。且DLC1蛋白低表達(dá)患者的復(fù)發(fā)(HR,2.232；95%CI,1.295-3.847)和死亡(HR,2.910；95%CI,1.543-5.488)風(fēng)險(xiǎn)是高表達(dá)者2倍以上。以上數(shù)據(jù)表明,通過(guò)免疫組化檢測(cè)DLC1蛋白表達(dá)可以預(yù)測(cè)胃癌的復(fù)發(fā)和死亡風(fēng)險(xiǎn)。為進(jìn)一步探索DLC1蛋白低表達(dá)對(duì)胃癌復(fù)發(fā)和總生存的影響,我們使用Kaplan-Meier生存分析法對(duì)至復(fù)發(fā)時(shí)間(TTR)和總生存時(shí)間(OS)進(jìn)行分析。在251例IB-Ⅲ期患者中,DLC1蛋白低表達(dá)者比高表達(dá)者具有更短的TTR(3年無(wú)復(fù)發(fā)生存率分別為30.1%和73.4%)。另外,在288例IB-Ⅳ期患者中DLC1蛋白低表達(dá)患者相對(duì)于高表達(dá)者表現(xiàn)出更短的總生存時(shí)間(5年生存率率是21.2%和62.8%)。我們還分別分析了DLC1蛋白表達(dá)對(duì)IB-Ⅲ期患者(均接受根治性切除術(shù))和Ⅳ期患者(均行姑息性手術(shù))總生存時(shí)間的影響。結(jié)果表明,無(wú)論是IB-Ⅲ期還是IV期患者,DLC1低表達(dá)患者生存時(shí)間相對(duì)較短。其中IB-Ⅲ期DLC1低表達(dá)胃癌患者的中位TTR為26.0個(gè)月,而IB-Ⅳ期患者的中位OS為36.0個(gè)月。同時(shí),在IB-Ⅲ期患者中超過(guò)半數(shù)的DLC1陽(yáng)性患者至隨訪結(jié)束也未復(fù)發(fā)。3.5 DLCl蛋白表達(dá)水平與胃癌術(shù)后輔助化療療效的關(guān)系FP-LOHP被廣泛的用于胃癌輔助化療中。然而,不同患者對(duì)FP-LOHP反應(yīng)差別很大,且目前沒(méi)有可靠的生物標(biāo)記物可準(zhǔn)確預(yù)測(cè)該化療組合的臨床治療效果。因此,我們迫切希望了解DLC1蛋白表達(dá)水平是否會(huì)影響FP-LOHP的臨床治療效果。在此,我們對(duì)251例接受過(guò)輔助化療的IB-III期胃癌患者進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示,在接受過(guò)FP-LOHP輔助化療的DLC1蛋白高表達(dá)患者[DLC-1 (+)/FP-LOHP(+)]中,一半以上復(fù)發(fā)時(shí)間超過(guò)3年(89.6%),且總生存時(shí)間超過(guò)5年(69.0%)。因此中位無(wú)復(fù)發(fā)時(shí)間或中位總生存時(shí)間未給出。Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,接受了FP-LOHP作為輔助化療的胃癌患者復(fù)發(fā)率和死亡率比接受其他化療方案者相對(duì)較低。但是,只有在DLC1蛋白高表達(dá)組中接受了FP-LOHP輔助化療者[DLC1(+)/FP-LOHP(+)]相對(duì)于接受其他化療方案者[DLC1(+)/FP-LOHP(-)]顯示出更長(zhǎng)的TTR和OS,而在DLC1低表達(dá)組中接受FP-LOHP方案化療患者相對(duì)接受其他化療方案患者無(wú)明顯獲益。4.研究結(jié)論(1).DLC1蛋白在胃癌中表達(dá)降低。(2).DLC1蛋白表達(dá)降低與胃癌進(jìn)展有關(guān),且預(yù)示著不良預(yù)后。(3).DLC1蛋白高表達(dá)胃癌患者可從氟尿嘧啶和奧沙利鉑聯(lián)合輔助化療中獲益。
[Abstract]:Although the downregulation of DLC1 in gastric cancer has been confirmed , it is suggested that the expression of DLC1 can promote cell proliferation and metastasis . Total survival time ( OS ) and total survival time ( OS ) of DLC1 protein were analyzed by using Kaplan - Meier method . The results were as follows : 0 ( 0 % -10 % ) , 1 ( 11 % -25 % ) , 2 ( 26 % -50 % ) , 3 ( 51 % -75 % ) , and 4 ( > 75 % ) . The expression of DLC1 protein in gastric cancer was significantly lower than that in normal mucosa ( P = 0 . 001 ) . The expression level of DLC1 protein was significantly lower than that of normal mucosa ( P = 0 . 001 ) .
95 % CI , 1.295 - 3.847 ) and death ( HR , 2.910 ;
The results showed that the expression level of DLC1 in patients with stage IB - 鈪，

本文編號(hào)：2010362