發(fā)布時(shí)間：2018-05-25 23:11

  本文選題：膠質(zhì)瘤 + 長(zhǎng)鏈非編碼RNA��； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的采用shRNA ATB敲減膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中ATB后,研究其對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響。方法本研究采用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)方法檢測(cè)ATB在人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87與正常人腦膠質(zhì)細(xì)胞HEB中的表達(dá)情況。并在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了ATB表達(dá)載體sh RNA ATB質(zhì)粒,利用構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞株,獲取新的U87細(xì)胞,該細(xì)胞具有低表達(dá)ATB的特點(diǎn)。應(yīng)用MTT法檢測(cè)敲減ATB后對(duì)U87細(xì)胞增殖的影響;應(yīng)用細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲減ATB后對(duì)U87細(xì)胞克隆增殖能力的影響;應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)敲減ATB后對(duì)U87細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。應(yīng)用Western blot法檢測(cè)敲減ATB后PCNA蛋白表達(dá)情況。結(jié)果qRT-PCR結(jié)果顯示,人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87中ATB表達(dá)水平與正常人腦膠質(zhì)細(xì)胞HEB相比,較之明顯上調(diào)(P0.01);與shRNA正常對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染了shRNA-ATB的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞能的ATB水平顯著較少(P0.01);細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)顯示shRNA-ATB實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞克隆形成能力較shRNA對(duì)照組明顯降低(P0.01);MTT結(jié)果表明敲減細(xì)胞內(nèi)ATB后細(xì)胞增殖的速率較sh RNA對(duì)照組有明顯的較低(P0.01)。Transwell實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了敲減膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中的ATB后,細(xì)胞遷移和侵襲能力明顯受到抑制(P0.01)。此外,Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證敲減膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞中的ATB后,可使PCNA表達(dá)降低。結(jié)論靶向敲減U87細(xì)胞中的ATB后能夠抑制其增殖、遷移和侵襲,表明ATB基因可能是膠質(zhì)瘤患者的潛在治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of shRNA ATB knockout on the proliferation, migration and invasion of human glioma cell line U87. Methods the expression of ATB in human glioma cell line U87 and normal human glial cell line HEB was detected by real-time quantitative PCRQ RT-PCR. On this basis, the ATB expression vector sh RNA ATB plasmid was constructed and transfected into human glioma U87 cell line by using the constructed plasmid, and a new U87 cell line was obtained. The cell line has the characteristics of low expression of ATB. MTT assay was used to detect the effect of knockdown ATB on U87 cell proliferation; cell clone assay was used to detect the effect of knockdown ATB on U87 cell clone proliferation; Transwell assay was used to detect the effect of ATB knockout on U87 cell migration and invasion. Western blot method was used to detect the expression of PCNA protein after knockout ATB. Results qRT-PCR results showed that the expression of ATB in human glioma cell line U87 was significantly up-regulated than that in normal human glioma cell line HEB, and compared with that in normal shRNA control group. The ATB level of the experimental group transfected with shRNA-ATB was significantly lower than that of the control group, and the cell clone ability of the shRNA-ATB experimental group was significantly lower than that of the shRNA control group. The results showed that the cell proliferation rate after knockdown of ATB in the experimental group was significantly lower than that in the sh group. In the RNA control group, the ATB in U87 cells was further reduced by P0.01U. Transwell assay. The ability of cell migration and invasion was significantly inhibited (P 0.01). In addition, Western blot assay further demonstrated that the expression of PCNA decreased after ATB was reduced in U87 cells. Conclusion targeting ATB in U87 cells can inhibit its proliferation, migration and invasion, suggesting that ATB gene may be a potential therapeutic target for glioma patients.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：1935010