本文選題：胃癌 + 長鏈非編碼RNA��； 參考：《江蘇大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:檢測長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)鋅指結構反義轉錄本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)在胃癌患者腫瘤組織、血清及血清外泌體(exosome)中的表達水平,分析其與臨床病理指標的相關性,探討ZFAS1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制,為胃癌提供新的診斷標志物和治療靶點。方法:1、結合生物信息學分析和文獻檢索選擇10種腫瘤相關lnc RNA(CCAT1、MALAT1、PVT1、HULC、GAS5、MYCLO-2、ZFAS1、lnc RNA-ATB、HOTTIP、linc RNA-p21),采用實時熒光定量RT-PCR篩選在胃癌細胞中表達顯著改變(倍數≥2)的lnc RNA。2、采用實時熒光定量RT-PCR檢測ZFAS1在胃癌患者腫瘤組織、血清及血清外泌體中的表達水平,結合患者的臨床病理資料,統(tǒng)計分析ZFAS1表達水平與性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移和TNM分期等病理因素之間的相關性;分析ZFAS1在血清中的穩(wěn)定性,探討其潛在診斷價值。3、采用質粒介導sh RNA干擾ZFAS1在胃癌細胞MGC-803和BGC-823中表達,ZFAS1過表達質粒轉染MKN-28胃癌細胞,實時熒光定量RT-PCR檢測sh RNA干擾和過表達效率;生長曲線和克隆形成實驗檢測干擾和過表達后細胞增殖能力;Transwell遷移實驗檢測干擾和過表達后細胞遷移能力;流式細胞術檢測處理后細胞周期和細胞凋亡變化;實時熒光定量RT-PCR和western blot檢測ZFAS1對細胞增殖和遷移相關基因及蛋白表達的影響。4、提取胃癌細胞BGC-823來源的外泌體,采用透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)、納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)、western blot鑒定外泌體;采用外泌體處理MKN-28細胞,實時熒光定量RT-PCR檢測處理后ZFAS1表達水平;生長曲線和克隆形成實驗檢測外泌體處理后細胞的增殖能力;Transwell遷移實驗檢測處理后細胞的遷移能力;流式細胞術檢測細胞周期的變化;實時熒光定量RT-PCR和western blot檢測處理后細胞增殖、遷移相關基因及蛋白表達的變化。結果:1、實時熒光定量RT-PCR檢測結果表明ZFAS1表達在胃癌患者腫瘤組織、血清以及血清外泌體中顯著增加,并且在血清中穩(wěn)定存在。2、病理相關性分析結果表明胃癌患者腫瘤組織、血清及血清外泌體中ZFAS1高表達均與淋巴結轉移、TNM分期顯著相關(P(27)0.05)。3、sh RNA干擾后ZFAS1表達降低,過表達后ZFAS1表達增加;干擾和過表達實驗結果表明ZFAS1能促進細胞周期進程,抑制細胞凋亡,誘導上皮間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),從而增強胃癌細胞增殖和遷移能力。4、透射電鏡顯示外泌體呈橢圓形雙層膜囊泡結構,納米顆粒跟蹤分析顯示外泌體的大小為50-150nm,濃度為1.0×1011~2.5×1011微粒/毫升,western blot結果表明外泌體含有豐富的CD9和CD81,流式細胞儀檢測結果顯示MKN-28細胞具有較強的外泌體內吞能力。5、外泌體處理后,ZFAS1在MKN-28細胞中表達顯著增加,MKN-28細胞增殖和遷移能力增強,處于S期的細胞比例增加,MKN-28細胞中cyclin D1、Bcl-2、N-cadherin、Slug、Snail、Twist、ZEB1表達增加,Bax、E-cadherin表達降低,細胞外信號調節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinas,ERK)無明顯改變,而磷酸化ERK(p-ERK)表達增加。結論:ZFAS1在胃癌患者腫瘤組織、血清和血清外泌體中高表達,且表達水平與淋巴結轉移和TNM分期顯著相關;ZFAS1能加快細胞周期進程,抑制細胞凋亡,誘導EMT發(fā)生,促進胃癌細胞增殖和遷移;外泌體能通過轉運ZFAS1促進胃癌惡性進展。因此,ZFAS1有望成為胃癌診斷和治療的新分子標志物。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression level of antisense transcript of long noncoding RNA ( lnc RNA ) zinc finger structural antisense transcript 1 ( ZFAS1 ) in tumor tissues , serum and exosome of gastric cancer patients , and to investigate the correlation between the expression levels of ZFAS1 in gastric cancer patients and pathological factors such as sex , age , tumor size , lymph node metastasis and TNM stage . The expression of ZFAS1 in gastric cancer patients was detected by RT - PCR and Western blot . The results showed that the expression of ZFAS1 increased significantly in gastric cancer patients . Conclusion : ZFAS1 can accelerate cell cycle progression , inhibit cell apoptosis , induce EMT to occur , promote gastric cancer cell proliferation and migration , and ZFAS1 is expected to be a new molecular marker for the diagnosis and treatment of gastric cancer .

【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

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本文編號：1869867