本文選題：人BREB基因 + 克隆��； 參考：《眼科新進(jìn)展》2017年12期

【摘要】：目的構(gòu)建人BRE1B基因真核表達(dá)載體,并初步探討該基因?qū)ρ跙16黑色素瘤細(xì)胞生長的影響。方法將傳代培養(yǎng)的眼B16黑色素瘤細(xì)胞隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(轉(zhuǎn)染p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒)和對(duì)照組(轉(zhuǎn)染p CMV質(zhì)粒)。以乳腺癌文庫為模板應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增出人BRE1B基因的CDS編碼區(qū)序列,構(gòu)建p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒,將p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒和p CMV質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染眼B16黑色素瘤細(xì)胞后,應(yīng)用Western blot法檢測BRE1B蛋白的表達(dá),應(yīng)用CCK8法和克隆形成法檢測該重組質(zhì)粒對(duì)眼B16黑色素瘤細(xì)胞生長的影響。結(jié)果 PCR技術(shù)擴(kuò)增出人BRE1B基因CDS編碼區(qū)序列,且條帶與預(yù)期大小一致;與對(duì)照組相比,菌液PCR鑒定結(jié)果為陽性,雙酶切的條帶長度分別為大約4000 bp和3050 bp,測序鑒定人BRE1B基因的編碼序列與插入的DNA序列完全一致;Western blot結(jié)果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒在實(shí)驗(yàn)組眼B16黑色素瘤細(xì)胞成功表達(dá),對(duì)照組則未檢測到特異條帶;CCK8法和克隆形成法結(jié)果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重組質(zhì)粒能夠抑制眼B16黑色素瘤細(xì)胞的生長。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了帶有p CMV-Tag-2B標(biāo)簽的人BRE1B基因真核表達(dá)載體,并發(fā)現(xiàn)該基因抑制眼B16黑色素瘤細(xì)胞的生長。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression vector of human BRE1B gene and to investigate the effect of human BRE1B gene on the growth of B16 melanoma cells. Methods B16 melanoma cells were randomly divided into two groups: the experimental group (transfected with p CMV-Tag-2B-BRE1B recombinant plasmid) and the control group (transfected with p CMV plasmid). Using breast cancer library as template, the CDS coding region of human BRE1B gene was amplified by PCR technique, and the recombinant plasmid of p CMV-Tag-2B-BRE1B was constructed. After transient transfection of p CMV-Tag-2B-BRE1B recombinant plasmid and p CMV plasmid into B16 melanoma cells, The expression of BRE1B protein was detected by Western blot assay, and the effect of the recombinant plasmid on the growth of B16 melanoma cells was detected by CCK8 assay and clone formation method. Results the sequence of CDS coding region of human BRE1B gene was amplified by PCR, and the band was the same size as expected. Compared with the control group, the results of PCR identification were positive. The length of the double enzyme digested bands was about 4000 BP and 3050 BP, respectively. The coding sequence of human BRE1B gene was identical with the inserted DNA sequence. The results of Western blot showed that the recombinant plasmid of p CMV-Tag-2B-BRE1B was successfully expressed in B16 melanoma cells of experimental group. In the control group, no specific band CCK8 assay and clone forming method were detected. The results showed that the recombinant plasmid of p CMV-Tag-2B-BRE1B could inhibit the growth of B16 melanoma cells. Conclusion the eukaryotic expression vector of human BRE1B gene with p CMV-Tag-2B tag was successfully constructed, and it was found that the gene inhibited the growth of B16 melanoma cells.
【作者單位】： 錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助(編號(hào):81472589、81672602、81402345、81502264)~~
【分類號(hào)】：R739.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 白玲,陳保生;穩(wěn)定表達(dá)組織因子的黑色素瘤細(xì)胞中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的誘導(dǎo)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2003年01期

2 肖國宏;羅成群;唐國茂;周建大;;人內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染原代成人黑色素瘤細(xì)胞[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

3 李鳳云;免疫RNA引起對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的溶解[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1978年S1期

4 王亞珍;呂品田;王鳳紅;鄭振茹;;赤芍總苷聯(lián)合卡鉑對(duì)黑色素瘤細(xì)胞生長的抑制及相關(guān)機(jī)制研究[J];醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制;2011年12期

5 楊方黎;唐均英;米彥;姚陳果;王劍飛;;納秒級(jí)陡脈沖電場誘導(dǎo)人黑色素瘤細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤凋亡作用及機(jī)制[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年13期

6 李鳳云;黑色素瘤細(xì)胞浸出物在試管內(nèi)抑制淋巴細(xì)胞對(duì)瘤細(xì)胞的毒性作用[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1978年S1期

7 羅惠先,劉云華,余達(dá)經(jīng),周潔萍;高溫所致黑色素瘤細(xì)胞的生長及其表面變化的掃描電鏡觀察[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1990年02期

8 任師顏;;腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞對(duì)自體黑色素瘤細(xì)胞的溶解及有關(guān)臨床效果[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);1992年01期

9 李永和,陳識(shí)杰,朱涵能,莫素珍,高素梅,何介薇,金為翹;α_2-巨球蛋白對(duì)黑色素瘤細(xì)胞作用的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1996年05期

10 賀莉芳;萬啟惠;劉暉;張曦;;家蠅幼蟲抗菌蛋白對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的影響[J];中國公共衛(wèi)生;2006年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 桑紅;;積雪甙對(duì)黑色素瘤細(xì)胞生長影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];2002中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2002年

2 林治榮;沈斌;冉胤威;杜俊蓉;王衛(wèi)華;鄭士杰;;不同融合基因修飾的黑色素瘤細(xì)胞體外目的基因表達(dá)及體內(nèi)致瘤性的研究[A];中國藥理學(xué)會(huì)第八次全國代表大會(huì)論文摘要集（第二部分）[C];2002年

3 向青;徐梅;肖誠;李紅艷;徐波;郭宇鵬;耿傳營;潘琳;房青;唐勁天;;空間環(huán)境對(duì)黑色素瘤細(xì)胞基因表達(dá)的影響[A];中國空間科學(xué)學(xué)會(huì)第16屆空間生命學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

4 陳炳卿;薛英本;薛英威;劉瑞海;;共軛亞油酸對(duì)鼠黑色素瘤細(xì)胞與轉(zhuǎn)移相關(guān)的細(xì)胞行為的影響[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

5 王淙;李永梅;郭劉斌;馬俊遠(yuǎn);姜麗平;;四種常用美白成分對(duì)皮膚黑色素瘤細(xì)胞的作用[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2013年

6 林治榮;沈斌;冉胤威;杜俊蓉;王衛(wèi)華;鄭士杰;;不同融合基因修飾的黑色素瘤細(xì)胞體外目的基因表達(dá)及體內(nèi)致瘤性的研究[A];中國藥理學(xué)會(huì)第八次全國代表大會(huì)暨全國藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

7 陳瑾;;DKK1對(duì)黑色素瘤細(xì)胞侵襲能力的抑制作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

8 宋旭;;長非編碼RNA參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程[A];生命的分子機(jī)器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)摘要集[C];2012年

9 孫保存;倪春生;孫濤;趙秀蘭;郄碩;劉易欣;王星輝;古強(qiáng);戚紅;;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與黑色素瘤細(xì)胞B16相互作用的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)暨第九屆全國病理大會(huì)論文匯編[C];2007年

10 向敏;顧振綸;梁中琴;周文軒;郭次儀;;熊果酸對(duì)小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 通訊員 李靜 記者 馬躍華;黑色素瘤細(xì)胞生長可被抑制[N];光明日報(bào);2013年

2 王小舒;未來治療皮癌只需涂抹乳霜[N];北京日報(bào);2012年

3 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科教授 粟秀初;腦瘤為何被誤診為腦膜炎[N];健康報(bào);2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 王寅;5-脂氧合酶抑制劑對(duì)黑色素瘤細(xì)胞a375轉(zhuǎn)移的抑制作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 李群;Survivin的下調(diào)對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的黑色素瘤細(xì)胞凋亡抗性的影響機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

3 趙萬洲;乙酰乳香酸（BC-4）抗腫瘤作用的分子機(jī)制及黑色素瘤細(xì)胞基本生物學(xué)特性的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

4 趙小瑜;rhIL-24對(duì)A375黑色素瘤細(xì)胞體內(nèi)外抗腫瘤效應(yīng)及其分子機(jī)理的研究[D];蘇州大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王曉利;EPS-8沉默和過表達(dá)對(duì)黑色素瘤細(xì)胞A375生物學(xué)行為的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

2 陳晨;6-姜烯酚通過下調(diào)PKM2的表達(dá)抑制黑色素瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 宋登燕;miR-106b-5p抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖功能的初步研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

4 殷娜;重樓皂苷Ⅰ對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞的增殖抑制作用的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓健;干擾素-γ對(duì)黑色素瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張婧思;間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制的研究[D];北京交通大學(xué);2016年

7 李延峰;靶向eEF-2K對(duì)黑色素瘤細(xì)胞Vemurafenib治療敏感性的影響及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

8 門穎麗;4.1B對(duì)小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響[D];鄭州大學(xué);2016年

9 藍(lán)弘文;MUC1對(duì)黑色素瘤細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移的作用及其分子機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2016年

10 周憶新;裂解型基因重組腺病毒對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞及小鼠肝癌抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2007年

，

本文編號(hào)：1868951