本文選題：乳腺癌 + TET1��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：第一部分構(gòu)建低表達(dá)TET1的MCF-7細(xì)胞株目的:乳腺癌近些年來的發(fā)病率逐年升高,其治療形成了以手術(shù)、化療、內(nèi)分泌治療、放療、靶向治療及生物治療為主的綜合治療。然而,乳腺癌的致死率依舊高居女性惡性腫瘤死亡率的第三位。這其中,有超過90%的死亡是由于腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移引起的。因此,探索腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)。有研究表明,10-11異位蛋白(ten-eleven translocation1,TET1)作為促DNA去甲基化過程中的重要蛋白,可以催化5-甲基胞嘧啶(5m C)轉(zhuǎn)化為5-羥甲基胞嘧啶(5hm C),實(shí)現(xiàn)DNA去甲基化和基因表達(dá)的調(diào)控。因此,本研究以人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株為模型,通過沉默TET1基因表達(dá),研究TET1對(duì)MCF-7細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,以期為腫瘤的臨床診治提供新的靶點(diǎn)。材料與方法:應(yīng)用慢病毒轉(zhuǎn)染方法,構(gòu)建TET1低表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株(MCF-7-si TET1)以及攜帶e GFP的陰性對(duì)照穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株(MCF-7-negative control,MCF-7-NC),運(yùn)用SYBR Green法實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TET1在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá),Western blot法檢測(cè)TET1在蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果:成功建立低表達(dá)TET1的MCF-7細(xì)胞模型(MCF-7-si TET1),用SYBR Green法實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)TET1的表達(dá),結(jié)果示,在MCF-7-si TET1中,與MCF-7-NC組相比,MCF-7-si TET1細(xì)胞中TET1表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001);Western blot法檢測(cè)TET1表達(dá),應(yīng)用Image J掃描其灰度值,結(jié)果表明,與MCF-7-NC組相比,MCF-7-siTET1細(xì)胞中TET1表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:成功構(gòu)建沉默TET1的MCF-7-si TET1穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株模型。第二部分TET1對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響目的:10-11異位蛋白(ten-eleven translocation1,TET1)在DNA去甲基化過程中發(fā)揮重要作用,可通過催化5m C轉(zhuǎn)化為5hm C實(shí)現(xiàn)DNA去甲基化和基因表達(dá)的調(diào)控。有研究指出,TET1基因的突變與多種實(shí)體瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān),但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。因此,本研究探究TET1對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖、遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響,并通過實(shí)驗(yàn)初步探究TET1影響的相關(guān)分子機(jī)制,以期為腫瘤的臨床診治提供新的思路。材料與方法:1倒置顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染細(xì)胞形態(tài),以MCF7-NC作為陰性對(duì)照組,以MCF-7作為空白對(duì)照組,運(yùn)用CCK-8法檢測(cè)沉默TET1對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響,利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、TranswellTM檢測(cè)TET1對(duì)細(xì)胞遷移、侵襲能力的作用,最后應(yīng)用Western blot檢測(cè)TET1與EMT相關(guān)蛋白(E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin)分子的表達(dá)。2應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析,兩獨(dú)立樣本的比較應(yīng)用成組t檢驗(yàn)分析,多組間均數(shù)的比較應(yīng)用單因素方差分析,多樣本均數(shù)間的多重比較應(yīng)用Tukey檢驗(yàn)分析,數(shù)據(jù)運(yùn)用mean±SD表示,每組實(shí)驗(yàn)不少于3個(gè)獨(dú)立樣本的重復(fù),以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力,MCF-7組與MCF-7-NC組相比,細(xì)胞增殖未見明顯差異,而MCF-7-si TET1組細(xì)胞增殖能力相較前兩組明顯升高(P0.001)。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,MCF-7組與MCF-7-NC組相比,細(xì)胞增殖未見明顯差異,而MCF-7-si RNA組細(xì)胞增殖能力高于MCF-7-NC組和MCF-7組(P0.0001)。2細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力,與MCF-7組及MCF-7-NC組相比,MCF-7-si TET1組細(xì)胞的遷移能力顯著增強(qiáng)(P0.01)。3 TranswellTM小室檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力,與MCF-7組和MCF-7-NC組相比,MCF-7-si TET1組細(xì)胞的侵襲能力顯著上升(P0.0001)。4選用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),MCF-7-NC組和MCF-7-si TET1組細(xì)胞形態(tài)無明顯變化,進(jìn)一步運(yùn)用Western blot法檢測(cè)EMT相關(guān)標(biāo)志物:與MCF-7組和MCF-7-NC組細(xì)胞相比,MCF-7-si TET1組細(xì)胞的E-cadherin表達(dá)降低(P0.0001),N-cadherin表達(dá)升高(P0.0001)、Vimentin表達(dá)升高(P0.01),β-catenin表達(dá)升高(P0.01)。結(jié)論:TET1可以抑制MCF-7細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力,其可能與通過Wnt/β-catenin通路抑制EMT的發(fā)生有關(guān)。
[Abstract]:The expression of TET1 in MCF - 7 - si TET1 cell line MCF - 7 - si TET1 was detected by SYBR Green method . The effects of TET1 on proliferation , migration and invasion of breast cancer MCF - 7 cells were investigated . Compared with MCF - 7 and MCF - 7 - NC groups , the expression of E - cadherin in MCF - 7 - si TET1 group increased significantly ( P0.01 ) .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Binhua P.Zhou;;Epithelial-mesenchymal transition in breast cancer progression and metastasis[J];癌癥;2011年09期

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本文編號(hào)：1848578