本文選題：乳腺癌干細(xì)胞 + NMI��； 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:乳腺癌是全球癌癥中導(dǎo)致女性死亡的主要因素之一。目前主要的治療方法包括手術(shù)、放療以及化療。然而,即使通過(guò)治療,乳腺癌也存在一定的可能性復(fù)發(fā),而造成這種可能的主要原因之一,便是由于乳腺癌干細(xì)胞的存在。研究表明,乳腺癌組織中存在一群CD44+CD24-的腫瘤細(xì)胞,它們具有極強(qiáng)的復(fù)制及自我更新能力,將此細(xì)胞群稱為乳腺癌干細(xì)胞。它們數(shù)量極少,但對(duì)于常規(guī)的放化療不敏感,因此靶向乳腺癌干細(xì)胞是目前治療乳腺癌的重要方向。NMI是一種能與多種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的蛋白,它通過(guò)與其它轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合,參與多種細(xì)胞活動(dòng),如DNA損傷、細(xì)胞周期及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等,并且在乳腺癌細(xì)胞中,主要發(fā)揮抑癌作用。然而,NMI對(duì)于乳腺癌干細(xì)胞的影響目前知之甚少。因此,進(jìn)一步研NMI在乳腺癌干細(xì)胞發(fā)生發(fā)展中的功能和具體的分子機(jī)制,從而為乳腺癌的診斷和治療提供新靶標(biāo)具有重要意義。方法:1.通過(guò)成球?qū)嶒?yàn)富集乳腺癌干細(xì)胞并利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其CD44/CD24表達(dá)情況;利用Western blot及q RT-PCR檢測(cè)NMI及干性指標(biāo)Nanog、Oct4及Sox2的表達(dá)情況;利用GEO數(shù)據(jù)庫(kù)GSE15192 m RNA表達(dá)數(shù)據(jù),分析在CD44+CD24-及CD44-CD24+細(xì)胞群體中,NMI、CD44及CD24的表達(dá)情況。2.敲低及過(guò)表達(dá)NMI后,通過(guò)Western blot,q RT-PCR,成球?qū)嶒?yàn)及流式細(xì)胞術(shù),檢測(cè)NMI對(duì)于乳腺癌干細(xì)胞干性特性的影響。3.通過(guò)檢測(cè)NMI敲低后,h TERT啟動(dòng)子熒光素酶活性,檢測(cè)NMI是否能影響h TERT轉(zhuǎn)錄活性;通過(guò)檢測(cè)NMI敲低后進(jìn)行Western blot,檢測(cè)NMI能否影響h TERT蛋白水平;通過(guò)敲低NMI同時(shí)敲低h TERT,或者過(guò)表達(dá)NMI同時(shí)過(guò)表達(dá)h TERT后進(jìn)行Western blot、流式細(xì)胞術(shù)、成球?qū)嶒?yàn)、transwell及免疫熒光,檢測(cè)NMI對(duì)于乳腺癌細(xì)胞干性特點(diǎn)的影響,是否是通過(guò)h TERT介導(dǎo)的。4.動(dòng)物實(shí)驗(yàn),通過(guò)皮下注射腫瘤細(xì)胞,構(gòu)建裸鼠荷瘤動(dòng)物模型,檢測(cè)NMI穩(wěn)定敲低/過(guò)表達(dá)的細(xì)胞系及其對(duì)照細(xì)胞系成瘤能力變化情況,并同時(shí)引入h TERT,進(jìn)行rescue實(shí)驗(yàn);通過(guò)尾靜脈注射NMI穩(wěn)定過(guò)表達(dá)細(xì)胞系及其對(duì)照細(xì)胞系,檢測(cè)NMI過(guò)表達(dá)后,對(duì)于乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響。5.利用GEO數(shù)據(jù)庫(kù),分析NMI與h TERT表達(dá)的相關(guān)性;利用組織芯片,進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,檢測(cè)NMI與h TERT表達(dá)的相關(guān)性;分析NMI,h TERT與臨床病理分期及預(yù)后的關(guān)系。6.利用免疫共沉淀及質(zhì)譜,尋找與NMI共同作用于h TERT的轉(zhuǎn)錄因子,并進(jìn)行Western blot驗(yàn)證。結(jié)果:1.相比于乳腺癌細(xì)胞,NMI在乳腺癌干細(xì)胞中呈低表達(dá);2.敲低NMI,能增強(qiáng)干性相關(guān)基因NANOG、OCT4及SOX2的表達(dá),增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞成球能力及CD44+CD24-細(xì)胞群體比例;3.過(guò)表達(dá)NMI,能抑制干性相關(guān)基因NANOG、OCT4及SOX2的表達(dá),抑制乳腺癌細(xì)胞成球能力及CD44+CD24-細(xì)胞群體比例;4.NMI通過(guò)抑制h TERT轉(zhuǎn)錄,從而影響乳腺癌細(xì)胞干性特征;5.NMI通過(guò)h TERT影響乳腺癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化能力及裸鼠成瘤能力;6.在臨床樣本中,NMI與h TERT表達(dá)呈負(fù)相關(guān);7.NMI通過(guò)與YY1相互作用下調(diào)h TERT。結(jié)論:在正常乳腺組織中NMI表達(dá)水平較癌組織高,且NMI與h TERT表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)表明,NMI能抑制乳腺癌細(xì)胞干性特點(diǎn),且該能力是由h TERT介導(dǎo)。NMI通過(guò)抑制h TERT轉(zhuǎn)錄,從而抑制乳腺癌細(xì)胞干性特點(diǎn)。
[Abstract]:Purpose : Breast cancer is one of the main factors leading to female death in cancer of breast cancer . The main reasons for breast cancer stem cell are surgery , radiotherapy and chemotherapy . The expression of NMI , CD44 and CD24 in breast cancer stem cells is studied by Western blot and q RT - PCR . The expression of NMI in breast cancer cells was determined by subcutaneous injection of NMI . NMI can inhibit the dry character of breast cancer cells , and the ability is mediated by h . NMI can inhibit the transcription of hTERT , thus inhibiting the dry character of breast cancer cells .

【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1827933