本文選題：ZNF545 + DNA甲基化�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學》2016年博士論文

【摘要】：惡性腫瘤已經成為我國最主要的死亡原因和非常重要的公共健康問題,2015年的癌癥預計發(fā)病人數和死亡人數分別為429.2萬和281.4萬,即每天約有1.2萬人新患癌癥和7500人死于癌癥。多發(fā)性骨髓瘤(MM)是一種常見的血液系統(tǒng)惡性腫瘤,其以腫瘤性漿細胞在骨髓中克隆性增殖為主要特點,目前自體干細胞移植和化療等傳統(tǒng)方法未見良好的治療獲益;宮頸癌作為女性最為常見的惡性腫瘤之一,其死亡率和發(fā)病率近年來有明顯升高趨勢;而食管癌一直是我國發(fā)病率和死亡率最高的四大癌癥之一。總的來說,對于腫瘤進展期的治療和如何早期發(fā)現尚待進一步探索和研究。然而,表觀遺傳學為癌癥的早期發(fā)現、治療和預后判斷等提供了可能的發(fā)展方向。其中,DNA甲基化這一重要的表觀調控機制,可能對于多種腫瘤的早期診斷及預后判斷等均具有臨床意義。KRAB鋅指蛋白(Krüppel-associated box domain-zinc finger proteins,KRAB-ZFPs)是機體最常見的一類轉錄因子。鋅指蛋白545(ZNF545)是KRAB-ZFP蛋白家族的成員之一。已有文獻報道其在胃癌、鼻咽癌、食管癌、結腸癌、宮頸癌和乳腺癌等腫瘤中出現不同程度的甲基化和表達水平的明顯降低,并可能具有顯著性抑制腫瘤細胞生長的生物學功能,但其在多發(fā)性骨髓瘤中尚未見報道,且在宮頸癌和食管癌等腫瘤中的作用分子機制未明。由此我們推測znf545可能作為一個候選抑癌基因在多發(fā)性骨髓瘤、宮頸癌和食管癌中影響腫瘤的發(fā)生。本研究通過逆轉錄聚合酶鏈式反應(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,rt-pcr)、實時熒光定量聚合酶鏈式反應(real-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction,real-timepcr)、甲基化特異性聚合酶鏈式反應(methylationspecificpcr,msp)、蛋白免疫印跡(westernblot,wb)和在線數據庫的方法分析了人多發(fā)性骨髓瘤、宮頸癌和食管癌細胞株、腫瘤組織及其正常組織中znf545基因的表達差異及甲基化狀態(tài);采用5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-aza-dc)聯合組蛋白去乙�；敢种苿┣啪豠(trichostatina,tsa)的方法處理znf545表達沉默或下調的腫瘤細胞株。通過軟瓊脂或平板克隆形成實驗、mts細胞增殖實驗和annexinv-fitc/pi流式細胞術等體外實驗檢測了znf545對多發(fā)性骨髓瘤、宮頸癌和食管癌細胞增殖和凋亡的影響,并進一步采用定量pcr和wb的方法檢測了znf545對p53分子信號通路的影響。結果發(fā)現,相對于正常組織或癌旁組織,多發(fā)性骨髓瘤、宮頸癌和食管癌組織或細胞株的znf545的表達水平均有不同程度的下調或沉默。對有znf545甲基化的腫瘤細胞株去甲基化處理后出現了其mrna表達水平的恢復。同時,多發(fā)性骨髓瘤細胞株(km3和rpmi8226)、宮頸癌細胞株(hela)和食管癌細胞株(kyse150),以及28.3%(13/46)的多發(fā)性骨髓瘤組織和76.6%(49/64)的食管癌組織存在znf545基因啟動子的甲基化。體外細胞功能實驗結果示,ZNF545能夠有效抑制腫瘤細胞的增殖并促進凋亡,從而發(fā)揮其抑制腫瘤細胞生長的生物學功能,并且進一步發(fā)現其可能是通過靶向轉錄激活p53通路的活化進而發(fā)揮其抑制腫瘤細胞生長的作用。綜上所述,ZNF545可能作為一個抑癌基因,參與了多發(fā)性骨髓瘤、宮頸癌和食管癌發(fā)生等過程,也為進一步在人類腫瘤中找到早期診斷和判斷預后的分子指標,或為腫瘤的靶向治療提供了一定的理論依據。
[Abstract]:Malignant tumors have become the leading cause of death and a very important public health problem in China. In 2015, the number of cancer patients and the number of deaths were 4 million 292 thousand and 2 million 814 thousand respectively, that is, about 12 thousand people with cancer and 7500 people died of cancer each day. Multiple myeloma (MM) is a common malignant tumor of the blood system, which is a common malignant tumor. The clonal proliferation of tumor plasma cells in the bone marrow is the main characteristic, and the traditional methods such as autologous stem cell transplantation and chemotherapy have not benefited well. Cervical cancer is one of the most common malignant tumors in women. The mortality and incidence of cancer have been obviously increased in recent years, and the incidence and mortality of esophageal cancer have always been the incidence and mortality in our country. One of the highest four major cancers. In general, the treatment and early detection of the progression of the tumor remains to be further explored and studied. However, epigenetics provides a possible direction for early detection of cancer, treatment and prognosis. Among them, the important apparent regulatory mechanism of DNA methylation may be for a variety of swelling. The early diagnosis and prognosis of the tumor are all of clinical significance.KRAB zinc finger protein (Kr u ppel-associated box domain-zinc finger proteins, KRAB-ZFPs) is the most common class of transcription factors. Zinc finger protein 545 (ZNF545) is one of the members of the KRAB-ZFP protein family. It has been reported in the literature on gastric cancer, nasopharyngeal carcinoma, esophageal and colon cancer. There is a significant reduction in methylation and expression levels in cervical and breast cancer, and it may have a significant biological function to inhibit tumor cell growth, but it has not been reported in multiple myeloma, and the molecular mechanism of the role in cervical and esophageal cancer is not clear. Therefore, we speculate that znf545 A candidate tumor suppressor gene may affect the occurrence of tumors in multiple myeloma, cervical and esophageal cancer. The present study uses reversetranscriptionpolymerasechainreaction (RT-PCR), real-time quantitative polymerase chain reaction (real-timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction,) Real-timepcr), methylation specific polymerase chain reaction (methylationspecificpcr, MSP), protein immunoblotting (Westernblot, WB) and online database analysis of human multiple myeloma, cervical and esophageal cancer cell lines, the difference in the expression of znf545 gene and the methylation status in the tumor tissues and their normal groups, and the use of 5- nitrogen heterozygosity. 2- deoxycytidine (5-aza-dC) combined with histone deacetylase inhibitor treacycin a (trichostatina, TSA) to treat znf545 expressing silent or down regulated tumor cell lines. Experiments were made by soft agar or flat clones, MTS cell proliferation and annexinv-fitc/pi flow cytometry were used to detect znf545 to multiple bone in vitro. The effect of the proliferation and apoptosis of myeloma, cervical and esophageal cancer cells, and further using quantitative PCR and WB methods to detect the effect of znf545 on the p53 molecular signaling pathway. Results showed that the expression level of znf545 in multiple myeloma, cervical and esophageal cancer tissues, or cell lines, relative to normal tissue or Para cancerous tissue were varying degrees. Downregulation or silence. After demethylation of tumor cell lines with znf545 methylation, the level of mRNA expression was recovered. Multiple myeloma cell lines (KM3 and RPMI8226), cervical cancer cell lines (Hela) and esophageal cancer cell lines (kyse150), and 28.3% (13/46) multiple myeloma tissue and 76.6% (49/64) esophageal cancer group The results show that ZNF545 can effectively inhibit the proliferation and promote apoptosis of the tumor cells in vitro, and thus play its biological function in inhibiting the growth of the tumor cells, and further discover that it may be activated by the activation of the p53 pathway by target transcription and then to inhibit the tumor. In summary, ZNF545 may be a tumor suppressor gene, involved in multiple myeloma, cervical and esophageal carcinogenesis, and also to find molecular indicators for early diagnosis and prognosis in human tumors, or to provide a theoretical basis for the target treatment of tumor.

【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.3;R737.33;R735.1

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本文編號：1826736