本文選題：宮頸鱗癌 + 肽基脯氨酰同分異構(gòu)酶(Pin1)　； 參考：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:本研究以維吾爾族婦女宮頸癌為對象,從腫瘤組織和細(xì)胞水平上,明確宮頸癌發(fā)生、擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移與肽基脯氨酰同分異構(gòu)酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,Pinl)可能誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及調(diào)節(jié)上皮和間質(zhì)組織屬性基因表達(dá)水平的關(guān)系,探討基于EMT的宮頸癌發(fā)病機(jī)制、早期預(yù)警和臨床治療檢控指標(biāo)。方法:(1)收集宮頸標(biāo)本組織標(biāo)本共189例,其中宮頸鱗癌(CSCC)16例、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ-Ⅲ)32例和正常對照41例,采用免疫組織化學(xué)方法檢測 Pin1、E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Snail1及Vimentin)蛋白質(zhì)表達(dá)水平,分析腫瘤臨床參數(shù)與上述指標(biāo)變化的關(guān)系。(2)實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測宮頸癌HeLa,SiHa,C33a細(xì)胞中Pin1 mRNA本底表達(dá);針對Pin1的cDNA序列,構(gòu)建短發(fā)夾RNA干擾載體(shRNA),轉(zhuǎn)染SiHa細(xì)胞,建立RNAi表達(dá)細(xì)胞模型,運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR和Western blot技術(shù)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后Pin1 mRNA和蛋白水平的變化;同時檢測轉(zhuǎn)染Pin1-siRNA后,SiHa宮頸癌細(xì)胞內(nèi)EMT 相關(guān)蛋白 E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Snail1 和 Vimentin mRNA 和蛋白水平情況;(3)應(yīng)用MTT(四甲基偶氮唑鹽)法、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞儀技術(shù),分別分析Pin1特異性sh-RNA轉(zhuǎn)染后,宮頸癌細(xì)胞增殖活性,遷移率和細(xì)胞凋亡率的細(xì)胞生物學(xué)指標(biāo)。結(jié)果:(1)免疫組織化學(xué)分析結(jié)果顯示,隨著宮頸癌及癌前病變發(fā)生,Pin1蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著上升(P0.05),N-cadherin和Snail1等間質(zhì)組織屬性蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著上調(diào)(P0.05),而E-cadherin和β-catenin等上皮組織屬性蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.05),而且宮頸癌的較高臨床分期、中低組織分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也伴有上述5種蛋白質(zhì)表達(dá)水平的顯著變化(P0.05),可能呈現(xiàn)一種Pin1誘導(dǎo)的宮頸癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)、惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移趨勢。(2)HeLa、SiHa和C33a宮頸癌細(xì)胞均有Pin1 mRNA表達(dá),其中SiHa宮頸癌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平較高;Pin1特異性sh-RNA轉(zhuǎn)染后,Pin1轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào),伴有E-cadherin和β-catenin等上皮組織屬性基因表達(dá)水平顯著上調(diào),而N-cadherin、Snail1和Vimentin等間質(zhì)組織屬性基因表達(dá)水平顯著上調(diào)(P0.05),呈現(xiàn)Pin1誘導(dǎo)的EMT相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控趨勢;根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)指標(biāo)分析,Pin1特異性sh-RNA轉(zhuǎn)染后,SiHa宮頸癌細(xì)胞增殖活性顯著下降(P0.05),細(xì)胞遷移能力降低,細(xì)胞凋亡率增加,呈現(xiàn)典型的EMT相關(guān)細(xì)胞表型。結(jié)論:(1)臨床基礎(chǔ)研究顯示,宮頸癌發(fā)生、惡性轉(zhuǎn)化、中低分化和轉(zhuǎn)移可能伴有Pin1和間質(zhì)組織屬性基因表達(dá)水平上調(diào),上皮組織屬性基因表達(dá)下調(diào),存在典型的EMT發(fā)展過程;(2)根據(jù)RNAi細(xì)胞模型研究,抑制宮頸癌細(xì)胞內(nèi)Pin1表達(dá),引起上皮組織屬性基因下調(diào),間質(zhì)組織屬性基因表達(dá)上調(diào),在一定程度上逆轉(zhuǎn)EMT相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控和細(xì)胞表型變化,推測Pin1可能調(diào)節(jié)上皮和間質(zhì)組織屬性基因表達(dá)調(diào)控,從而誘導(dǎo)宮頸上皮組織的EMT過程。
[Abstract]:Objective: to identify the occurrence of cervical cancer in Uygur women from tumor tissue and cell level. The relationship between proliferation and metastasis and peptidyl-prolyl cis-trans isomerasePinl) may induce epithelial-mesenchymal transition (EMT) and regulate the expression of epithelial and interstitial tissue attribute genes, and explore the pathogenesis of cervical cancer based on EMT. Early warning and clinical treatment prosecution indicators. Methods A total of 189 cervical tissue specimens were collected, including 16 cases of cervical squamous cell carcinoma, 32 cases of cin 鈪，

本文編號：1822924