發(fā)布時(shí)間：2018-04-27 01:23

  本文選題：TESTIN基因 + 抑癌基因　； 參考：《蘇州大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：第一部分TESTIN基因在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)水平目的:探討子宮內(nèi)膜癌中TESTIN基因的表達(dá)水平,為子宮內(nèi)膜癌的早期診斷提供依據(jù)。方法:收集68例子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織68例及相應(yīng)的癌旁組織68例,其中子宮內(nèi)膜樣腺癌60例,子宮漿液性乳頭狀腺癌8例。免疫組化法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織及其癌旁正常組織中TESTIN基因的蛋白表達(dá)水平并對(duì)TESTIN基因表達(dá)與臨床參數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用甲基化特異性PCR檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織、細(xì)胞中TESTIN基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài),分析其與TESTIN表達(dá)水平之間的相關(guān)性。結(jié)果:子宮內(nèi)膜癌的癌旁正常組織中TESTIN蛋白呈陽(yáng)性表達(dá),而絕大部分(52/68)的子宮內(nèi)膜癌組織中TESTIN蛋白表達(dá)顯著下降(p0.O1)。進(jìn)一步分析顯示:子宮內(nèi)膜樣腺癌組中TESTIN蛋白表達(dá)水平下降率較漿液性乳頭狀腺癌組明顯升高(χ2=13.34,p=0.001)。根據(jù)MSP的結(jié)果,44.1%(30/68)的子宮內(nèi)膜癌中TESNTIN啟動(dòng)子為高甲基化狀態(tài),而在正常內(nèi)膜組織中僅為3.6%(1/28),p0.001)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示TESNTIN啟動(dòng)子高甲基化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.03)顯著相關(guān)。同時(shí),TESTIN表達(dá)水平下降與其高甲基化狀態(tài)相關(guān)(p=0.021)。甲基化處理可恢復(fù)AN3CA細(xì)胞內(nèi)TESTIN表達(dá)。結(jié)論:TESTIN基因在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)顯著下降,啟動(dòng)子區(qū)域的高甲基化是TESTIN基因在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)缺失的主要原因。第二部分TESTIN在子宮內(nèi)膜癌中的作用機(jī)制目的:探討TESTIN甲基化在子宮內(nèi)膜癌中的作用及其分子機(jī)制。方法:分別構(gòu)建TESTIN過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3.1-TESTIN和干擾質(zhì)粒sh RNA-TESTIN;將上述兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞并構(gòu)建穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR方法和western blot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后TESTIN基因的表達(dá)。應(yīng)用MTT法、克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、實(shí)時(shí)PCR和western blot等方法檢測(cè)TESTIN對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、克隆形成和侵襲能力的影響,光學(xué)顯微鏡下觀察子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,實(shí)時(shí)PCR和western blot方法檢測(cè)與EMT相關(guān)的E-鈣粘連蛋白、Snail,波蛋白和N-鈣粘連蛋白的m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化。分別使用TESTIN穩(wěn)定過(guò)表達(dá)和干擾的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株建立建立子宮內(nèi)膜癌裸鼠模型,觀察TESTIN對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用,驗(yàn)證TESTIN對(duì)EMT過(guò)程的調(diào)控。結(jié)果:在AN3CA細(xì)胞中,TESTIN過(guò)表達(dá)可明顯抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)、克隆形成和侵襲能力;同時(shí),TESTIN過(guò)表達(dá)后誘導(dǎo)AN3CA細(xì)胞出現(xiàn)上皮性轉(zhuǎn)變,上皮性標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)水平明顯上升,而間質(zhì)性標(biāo)志物Snail,N-cadherin,vimentin的表達(dá)則被顯著抑制;相反地,在TESTIN敲低的Ishikawa細(xì)胞中,細(xì)胞的生長(zhǎng)、克隆形成和侵襲能力得到增強(qiáng);同時(shí),干擾TESTIN基因后Ishikawa細(xì)胞由上皮細(xì)胞形態(tài)向間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)方向轉(zhuǎn)化,作為上皮性細(xì)胞標(biāo)志物的E-cadherin的表達(dá)顯著下降,而間質(zhì)性細(xì)胞標(biāo)志物vimentin,N-cadherin,snail的表達(dá)顯著上升。在子宮內(nèi)膜癌動(dòng)物模型中,TESTIN過(guò)表達(dá)顯著抑制了AN3CA移植瘤的生長(zhǎng)速度,而TESTIN沉默則加快了Ishikawa移植瘤的生長(zhǎng)。結(jié)論:TESTIN在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)揮抑癌基因的角色,其同時(shí)可對(duì)EMT過(guò)程進(jìn)行負(fù)調(diào)控。
[Abstract]:The expression level of TESTIN gene in endometrial carcinoma was analyzed by using methylation specific PCR to detect the expression level of TESTIN gene in endometrial carcinoma . Results : The expression level of TESTIN protein in endometrial carcinoma was significantly lower than that in serous papillary adenocarcinoma ( 蠂 2 = 13.34 , p = 0.001 ) . According to MSP results , 44.1 % ( 30 / 68 ) of endometrial cancer had a hypermethylation status and only 3.6 % ( 1 / 28 ) , p0.001 ) in normal endometrium . The expression of TESTIN in endometrial carcinoma was studied by means of real - time PCR and western blot .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王永學(xué);潘凌亞;黃惠芳;沈鏗;郎景和;;年輕子宮內(nèi)膜癌患者孕激素保守治療臨床分析[J];中華腫瘤防治雜志;2011年07期

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本文編號(hào)：1808560