本文選題：肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2D + 惡性膠質(zhì)瘤�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景和目的惡性膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腦腫瘤,約占所有腦腫瘤的50%以上,星形細(xì)胞瘤是最常見的腦膠質(zhì)瘤。根據(jù)他們的侵襲性,世界衛(wèi)生組織(WHO)將它們劃分為(1)I級(jí):毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤(PA),好發(fā)于兒童;(2)II級(jí):低度惡性星形細(xì)胞瘤(LGA),占所有神經(jīng)膠質(zhì)瘤的25%,好發(fā)年齡為30-40歲;(3)III級(jí):間變型星形細(xì)胞瘤(AA),易轉(zhuǎn)化為Ⅳ級(jí);(4)IV級(jí):多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM),好發(fā)年齡為45~60歲。惡性星形細(xì)胞瘤(MA)主要包括AA及GBM,其中GBM占50%~80%。其中I級(jí)和II級(jí)的低度惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤(LGG)和III級(jí)和IV級(jí)或高度惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤(HGG)。在過去的十年中,盡管在腦膠質(zhì)瘤治療方面,包括手術(shù)切除、放化療及腫瘤免疫治療等綜合治療取得了巨大的進(jìn)展,但高度惡性膠質(zhì)瘤患者中位生存期僅12-15個(gè)月,主要是由于對(duì)惡性膠質(zhì)瘤形成的潛在分子機(jī)制缺乏了解。腦惡性膠質(zhì)瘤具有侵襲性極高、預(yù)后極差的生物學(xué)特點(diǎn),從而導(dǎo)致其易復(fù)發(fā),死亡率高,為了有效解決這一臨床難題,非常有必要深入研究惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生及侵襲的分子機(jī)制,識(shí)別參與膠質(zhì)瘤形成與發(fā)展的新基因,從而有針對(duì)性的研究預(yù)防和治療惡性膠質(zhì)瘤,才能有效的尋找新的治療策略,改善患者的預(yù)后。肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2家族(myocyte enhancer factor 2,MEF2)是一類發(fā)揮多種生理功能的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子,該家族包括MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D四個(gè)成員。它們在骨骼肌、心肌、神經(jīng)組織和免疫系統(tǒng)的發(fā)育過程和正常生理功能的維持中發(fā)揮重要功能。如同其他重要的發(fā)育相關(guān)因子一樣,MEF2D也參與了癌癥的發(fā)生過程。MEF2D促使正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象在白血病中被首先報(bào)道。部分急性淋巴細(xì)胞白血病的患者的1號(hào)染色體與19號(hào)染色體發(fā)生易位,造成了MEF2D部分編碼區(qū)與DAZAP1發(fā)生融合,產(chǎn)生了MEF2D/DAZAP1與DAZAP1/MEF2D兩種融合蛋白。通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),研究者發(fā)現(xiàn)過表達(dá)MEF2D不僅賦予正常細(xì)胞在低血清條件下的增殖能力,加快其分裂速度,而且對(duì)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生也有抑制作用,能夠增強(qiáng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的存活。后來有研究發(fā)現(xiàn),MEF2D參與了肝癌的發(fā)生。研究證實(shí),MEF2D在肝癌中異常高表達(dá),這種高表達(dá)與肝癌的預(yù)后不良相關(guān)。而且MEF2D通過調(diào)控細(xì)胞周期g2/m,在肝癌的致瘤性方面扮演著重要角色。在肝癌細(xì)胞中下調(diào)mef2d表達(dá),將導(dǎo)致細(xì)胞生長抑制。有研究證實(shí)mef2d的替代多聚腺苷酸化亞型在正常和gbm腦組織差異表達(dá)。而且,mef2家族蛋白還參與了神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關(guān)因子2的調(diào)控。此外,mef2d能夠激活bcl-w的轉(zhuǎn)錄表達(dá),這使得mef2d可以在腫瘤細(xì)胞的抗凋亡中發(fā)揮作用。然而,對(duì)于mef2d在惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的表達(dá)譜和功能知之甚少。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)mef2d在惡性膠質(zhì)瘤組織及惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(u87mg、u251mg)中異常高表達(dá),不斷有證據(jù)表明mef2d表達(dá)可能是惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生和進(jìn)展中的關(guān)鍵因子。在這項(xiàng)研究中,我們試圖研究惡性膠質(zhì)瘤中mef2d的功能和表達(dá),通過研究mef2d表達(dá)水平與惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞致瘤性的相關(guān)性,進(jìn)一步闡明mef2d在惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生中的生物學(xué)功能,提供新的用于惡性膠質(zhì)瘤臨床預(yù)后參考的蛋白分子,為今后針對(duì)惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展制定新的治療策略提供新靶點(diǎn)。方法:1.細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,u87mg(從含有g(shù)fap陽性細(xì)胞惡性腦瘤衍生)和u251mg(從一個(gè)惡性膠質(zhì)瘤患者分類為iv級(jí)來源的),hela細(xì)胞(hela細(xì)胞用作mef2d陽性對(duì)照)均購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心。初級(jí)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)物根據(jù)前人方法所述取得。生長環(huán)境:細(xì)胞培養(yǎng)液dmem,10%胎牛血清,置于含有5%二氧化碳、37攝氏度的培養(yǎng)箱中,根據(jù)細(xì)胞在鏡下觀察的生長情況,判定細(xì)胞傳代時(shí)間,通常每1-2天將生長旺盛的u87mg、u251mg、hela、星形膠質(zhì)細(xì)胞傳代。2.原代培養(yǎng)/倫理聲明本研究所采用的人腦惡性膠質(zhì)瘤標(biāo)本(腫瘤組織及癌旁正常組織)從成都軍區(qū)總醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除獲得,由成都軍區(qū)總醫(yī)院的倫理審查委員會(huì)審查批準(zhǔn),并取得病人或親屬的書面知情同意。惡性膠質(zhì)瘤組織切成小塊。機(jī)械操縱后獲得單細(xì)胞懸浮液。對(duì)于原發(fā)性星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),樣品按照前人方法(具體見實(shí)驗(yàn)部分)的程序,由成都軍區(qū)總醫(yī)院的倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn),取得孕婦的書面知情同意,從流產(chǎn)胎兒獲得。方法簡要地說,在除去腦膜后,從前囟腦組織切成片,用胰蛋白酶消化。將消化的細(xì)胞通過一個(gè)鋼網(wǎng)過濾并在補(bǔ)充有15%fbs中dmem中培養(yǎng),免疫熒光法檢測gfap的表達(dá)。3.免疫組化免疫組織染色是關(guān)于使用鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶連接法,對(duì)手術(shù)獲取的惡性膠質(zhì)瘤標(biāo)本,進(jìn)行福爾馬林固定、石蠟包埋和組織切片。用mef2d和ki67抗體分別檢測mef2d和ki67的表達(dá)。蘇木素用于對(duì)細(xì)胞核染色。根據(jù)tunel細(xì)胞凋亡檢測試劑盒的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行凋亡實(shí)驗(yàn)。4.實(shí)時(shí)熒光定量pcr(qrt-pcr)根據(jù)rna提取試劑盒的操作指南對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(u87mg、u251mg)提取總rna。實(shí)時(shí)熒光定量pcr按照前人實(shí)驗(yàn)描述的方法進(jìn)行。簡要地說,第一鏈cdna合成和擴(kuò)增根據(jù)primescripttmrt試劑盒的操作進(jìn)行;實(shí)時(shí)熒光定量pcr根據(jù)sybr預(yù)混料前的taq與rotor-gene的6000qrt-pcr系統(tǒng)的操作說明進(jìn)行。以下為引物序列:mef2d(正向)5'-agggaaataaccaaaaaactaccaaa-3';mef2d(反向)5'-gctacatgaacacaaaaacagagacc-3';gapdh(正向)5'-gcgagatcgcactcatcatct-3';gapdh(反向)5'-tcagtggtggacctgacc-3'。gapdh的mrna水平被用于歸一化。在基因表達(dá)水平上的變化倍數(shù)使用2△△ct法計(jì)算。5.病毒載體慢病毒載體由王博士(病理科,哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院)提供,其中包括lv-gfp(過表達(dá)綠色熒光蛋白對(duì)照組),lv-mef2d(過表達(dá)mef2d),lv-shmef2d-1、lv-shmef2d-2(不同程度下調(diào)mef2d表達(dá))和lv-ctrl(陰性對(duì)照組)。6.westernblot分析根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行蛋白質(zhì)樣品和免疫印記。簡言之,將細(xì)胞用裂解緩沖液在12,000rpm離心15min后,用bca蛋白測定試劑盒對(duì)組織或細(xì)胞蛋白質(zhì)的濃度進(jìn)行測定。然后通過sds-page在凝膠上分離總蛋白。7.增殖試驗(yàn)被不同慢病毒感染后的細(xì)胞以1000個(gè)每孔的濃度種植于96孔板中。mts溶液(3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2h-etrazolium,innersalt,四氮唑藍(lán)鹽化合物)根據(jù)promega推薦的方法來檢測細(xì)胞增殖率。8.克隆形成實(shí)驗(yàn)u87mg細(xì)胞用文中所示的慢病毒載體感染后,按照每個(gè)培養(yǎng)皿2000個(gè)細(xì)胞濃度接種在3.5cm的培養(yǎng)皿中。u251mg細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞用文中所示的慢病毒載體感染后,每孔100個(gè)細(xì)胞的濃度接種于24孔板中。將細(xì)胞放置在37℃,在5%co2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10天。隨后將細(xì)胞用福爾馬林固定,用結(jié)晶紫染色。我們定義50個(gè)細(xì)胞作為一個(gè)克隆。9.細(xì)胞周期檢測通過流式細(xì)胞儀pi染色后如前人中描述的細(xì)胞周期流程操作。簡而言之,將細(xì)胞鋪于6孔板中,每孔2×105個(gè)細(xì)胞的濃度并用慢病毒處理。處理后48小時(shí),收集細(xì)胞于240μlpbs和560μl的100%乙醇中,并在-20℃下固定過夜。細(xì)胞沉淀通過離心收集,并再懸浮于含有20mmedta和1mg/mlrna酶的500μlpbs中,然后在37℃下孵育1小時(shí)。pi溶液(50微克/毫升)的混合物用于樣品染色。然后將樣品進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析,并在536nm的激發(fā)波長和617nm的發(fā)射波長進(jìn)行檢測。10.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡將需檢測的細(xì)胞鋪于6孔板中,每孔2×105個(gè)細(xì)胞的濃度,并用慢病毒處理。慢病毒處理后48小時(shí),收集細(xì)胞,胰蛋白酶處理,并用完全培養(yǎng)基洗滌一次。細(xì)胞(5×105)重新懸浮500μl1×bindingbuffer緩沖液中,并用異硫氰酸熒光素(fitc)標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白v染色。染色后立即進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測分析。11.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究六周齡的雄性balb/c裸小鼠用于本研究,購自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。在小鼠(n=12)顱內(nèi)注射感染了10moi的lv-shmef2d-1或lv-ctrl5×106u87mg細(xì)胞。40天內(nèi)每天記錄他們的死亡情況。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均經(jīng)成都軍區(qū)總醫(yī)院動(dòng)物研究倫理審查委員會(huì)審查通過。腫瘤的體積通過公式計(jì)算“v=(長度×寬度2)/2”。12.統(tǒng)計(jì)分析每組實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次,實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù),采用spss20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。mef2d表達(dá)和存活之間的相關(guān)性由秩數(shù)檢驗(yàn)評(píng)估。mef2d表達(dá)與其他變量之間的關(guān)系,我們使用了兩種獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。實(shí)時(shí)熒光定量pcr、細(xì)胞的生長速度和克隆形成的結(jié)果均通過雙側(cè)獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。比較多樣本量差異的顯著性使用單向評(píng)估anova或雙向anova方差分析,所有數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。p0.05(*)和p0.01(**)分別表示“差異顯著”和“差異非常顯著”。結(jié)果:1.mef2d表達(dá)水平升高預(yù)示惡性膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良。為了研究mef2d的在患有惡性膠質(zhì)瘤患者預(yù)后中的作用,我們使用qrt-pcr法進(jìn)行檢測惡性膠質(zhì)瘤患者中mef2d的mrna水平。在iii級(jí)和iv級(jí)組織學(xué)分類的惡性膠質(zhì)瘤標(biāo)本中,分為一個(gè)mef2d高組和mef2d低組(我們通過相對(duì)定量rq平均值定義mef2d高/低)。與mef2d低組中相比,在mef2d高組中的患者預(yù)后較差(p=0.031)。此外,這些患者的樣本mef2dmrna水平與世界衛(wèi)生組織分級(jí)(2007年)正相關(guān)(p=0.048)。idh1/2突變也與mef2dmrna水平正相關(guān)(p=0.029)。但是,mef2dmrna水平和組織學(xué)分類之間沒有顯著的關(guān)聯(lián)(p=0.064)。為了確認(rèn)mef2d在腫瘤細(xì)胞中的定位,我們對(duì)惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤樣本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測。免疫組織化學(xué)染色表明,mef2d蛋白主要定位于癌細(xì)胞的細(xì)胞核中。因此,通過westernblot和免疫組化評(píng)估,mef2d蛋白的表達(dá)水平在惡性膠質(zhì)瘤腫瘤組織與鄰近正常組織相比表達(dá)更高。mef2dmrna表達(dá)水平在這些樣品中也通過qrt-pcr進(jìn)行測定,mef2d在腫瘤組織中mrna的表達(dá)水平比相鄰的正常組織表達(dá)顯著更高(p=0.03,0.02和0.02)。此外,與mef2d的蛋白水平低的星形膠質(zhì)細(xì)胞相比,u87mg,u251mg和hela癌細(xì)胞(hela細(xì)胞用作mef2d陽性細(xì)胞系),mef2d在癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平比星形膠質(zhì)細(xì)胞更高(p0.04)。這些結(jié)果表明,惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系具有異常高表達(dá)的mef2d。2.mef2d下調(diào)抑制惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的增殖。因?yàn)閻盒陨窠?jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的mef2d表達(dá)水平高,我們用攜帶特異性靶向的mef2dmrna的短發(fā)夾rna的慢病毒載體(lv-shmef2d-1,lv-shmef2d-2)或?qū)φ战M(lv-ctrl)感染的u87mg和u251mg細(xì)胞。感染后72小時(shí),我們通過免疫印跡和qrt-pcr檢測,研究u87mg和u251mg細(xì)胞的mef2d蛋白和mrna的水平。在u87mg和u251mg惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中,lv-shmef2d-1和lv-shmef2d-2導(dǎo)致了大約65-95%mef2d蛋白表達(dá)下降。qrt-pcr數(shù)據(jù)還顯示,在惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中,shrna也下調(diào)了mef2d的mrna水平。mef2d下調(diào)被認(rèn)為減少了u87mg細(xì)胞的增殖。在感染lv-shmef2d-1或lv-shmef2d-2的u251mg細(xì)胞中也有同樣的情況,但對(duì)照組lv-ctrl細(xì)胞沒有這種效果(p=0.02和0.01)。此外,u87mg細(xì)胞感染lv-shmef2d-1或lv-shmef2d-2后的細(xì)胞克隆數(shù)受此影響,隨mef2d的水平下降而減少(p=0.01和0.01)。在u251mg細(xì)胞中也得到了類似的結(jié)果(p=0.01和0.02)。因此,mef2d的下調(diào)可以減少u87mg和u251mg細(xì)胞中的克隆數(shù),這表明mef2d在惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的增殖中至關(guān)重要。3.mef2d影響惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的細(xì)胞周期和凋亡。為了研究mef2d促進(jìn)惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的增殖機(jī)制,使用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期進(jìn)程。u87mg和u251mg惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞感染了lv-shmef2d-1,lv-shmef2d-2,或是lv-ctrl。這與此前肝癌中的報(bào)道結(jié)果相一致,在u87mg和u251mg細(xì)胞沉默mef2d表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞周期的s期和g2/m期的阻滯。mef2d可以調(diào)節(jié)在肝癌中靶基因如cdkn1a,gadd45a,和gadd45b的轉(zhuǎn)錄。為了證實(shí)在惡性膠質(zhì)瘤中,mef2d是否調(diào)節(jié)這些基因,我們研究了mef2d的靶基因mrna水平。我們的數(shù)據(jù)證實(shí),在u87mg細(xì)胞中沉默mef2d表達(dá)導(dǎo)致cdkn1a,gadd45a和gadd45b的表達(dá)增加。我們還研究mfe2d的下調(diào)是否導(dǎo)致惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡。使用流式細(xì)胞術(shù)分析檢測lv-shmef2d-1或lv-shmef2d-2處理后的腫瘤細(xì)胞凋亡水平。凋亡細(xì)胞的百分比通過fitc-膜聯(lián)蛋白v/pi染色來確定。我們的數(shù)據(jù)表明,不同mef2d水平細(xì)胞凋亡率顯著不同。在lv-shmef2d-1和lv-shmef2d-2感染組凋亡率分別為39.4%和38.2%。與此相反,lv-ctrl感染組有較低的凋亡率(6.1%)。這些結(jié)果表明,mef2d通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期s期和g2/m期的延遲,影響腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖。另外,剪切的parp水平表明,細(xì)胞凋亡途徑被誘導(dǎo)。因此,在mef2d沉默的細(xì)胞系中,剪切的parp蛋白的水平升高。綜上所述,我們的結(jié)果強(qiáng)化了先前的發(fā)現(xiàn),即mef2d促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖,參與細(xì)胞周期進(jìn)展,并且在抑制細(xì)胞凋亡中起重要作用。4.mef2d的過表達(dá)促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程。我們接下來研究mef2d過表達(dá)是否促進(jìn)了正常腦的星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程。感染過表達(dá)lv-mef2d的星形膠質(zhì)細(xì)胞的mef2d水平升高,western印跡分析證實(shí)感染lv-mef2d之后的mef2d蛋白水平顯著增加。qrt-pcr數(shù)據(jù)表明,lv-mef2d感染的星形膠質(zhì)細(xì)胞的mfe2d的mrna水平高于對(duì)照細(xì)胞(p=0.01)。通過mts測定感染lv-mef2d或lv-gfp的星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖率。我們發(fā)現(xiàn),mef2d過表達(dá)增加星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖(p=0.03)。此外,與對(duì)照病毒相比(lv-gfp),過表達(dá)mef2d升高星形膠質(zhì)細(xì)胞的菌落數(shù)(p=0.04)。此外,我們對(duì)慢病毒過表達(dá)mef2d的星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程進(jìn)行了評(píng)估的。在星形膠質(zhì)細(xì)胞的過度表達(dá)mef2d增加g0/g1期的細(xì)胞的百分比,同時(shí)降低細(xì)胞百分比中的g2/m和s期�？偟膩碚f,mef2d促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,并加速在星形膠質(zhì)細(xì)胞g2/m期的過渡。5.mef2d的下調(diào)削弱了惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的致瘤性。為了研究mef2d是否促進(jìn)惡性膠質(zhì)瘤的致瘤性,在已建立的小鼠惡性膠質(zhì)瘤模型基礎(chǔ)上進(jìn)行mef2d下調(diào)影響的檢測。與對(duì)照組相比,mef2d低表達(dá)的惡性膠質(zhì)瘤異種移植組具有更高的存活率。值得注意的是,顱內(nèi)注射的u87mg細(xì)胞40天后,mef2d缺陷組有50%的存活率,而對(duì)照組均沒有存活。lv-shmef2d-1感染組(5.6±5.3立方毫米)比Lv-CTRL感染組中腫瘤的平均大小顯著較小(15.2±8.7立方毫米)(P=0.04)。Western免疫印跡、q RT-PCR和免疫組化染色檢測均顯示MEF2D在LV-CTRL感染組腫瘤中存在廣泛表達(dá),而在LV-sh MEF2D-1感染組的腫瘤中,MEF2D的表達(dá)明顯降低。為了確認(rèn)移植了shMEF2D的惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的小鼠的存活率增加是否是由于細(xì)胞增殖抑制或細(xì)胞毒作用影響,我們通過Ki67染色和TUNEL測定法,分別分析移植瘤腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡。結(jié)果表明,相比于Lv-CTRL感染組,Lv-shMEF2D-1感染組具有更弱的Ki67染色和更強(qiáng)的TUNEL染色。對(duì)MEF2D表達(dá)情況、Ki67和TUNEL陽性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果表明在Lv-CTRL-和Lv-shMEF2D-1治療組,MEF2D陽性率分別為82.5%,3.9%。Lv-CTRL-和Lv--shMEF2D-1治療組的Ki67在細(xì)胞中表達(dá)百分比分別為64.2%和28.6%。TUNEL染色表明他們的凋亡率分別為8.6%和57.8%。這些結(jié)果表明體內(nèi)的MEF2D缺陷降低了惡性膠質(zhì)瘤的致瘤性。結(jié)論:1.在惡性膠質(zhì)瘤患者標(biāo)本中,異常高表達(dá)MEF2D,從而導(dǎo)致惡性膠質(zhì)瘤的預(yù)后較差。2.通過下調(diào)MEF2D介導(dǎo)了細(xì)胞周期S期和G2/M期的阻滯并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,進(jìn)而抑制惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的增殖。3.MEF2D在星形膠質(zhì)細(xì)胞的過度表達(dá)通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程加速細(xì)胞增殖。4.裸鼠惡性膠質(zhì)瘤模型顯示,MEF2D缺乏可以阻止惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤在體內(nèi)形成。5.最后我們的結(jié)論是MEF2D可以充當(dāng)惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤的潛在致癌基因,因此可作為一個(gè)惡性膠質(zhì)瘤治療的候選目標(biāo)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41

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4 姚小紅;卞修武;平軼芳;陳劍鴻;王清良;蔣雪峰;;惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞甲�；氖荏w表達(dá)及其活化后促瘤細(xì)胞增殖和血管生成因子產(chǎn)生的作用[J];癌癥;2007年03期

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6 花瑋;周良輔;毛穎;肖保國;朱劍宏;王曉梅;姚瑜;;惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞在不同培養(yǎng)液和不同時(shí)期中CD133陽性細(xì)胞比率的變化[J];中國臨床神經(jīng)科學(xué);2008年06期

7 謝珊珊;朱文博;顏敏;林園;張海鵬;邱鵬新;蘇興文;顏光美;胡海燕;;3β,5α,6β-三羥基膽甾烷誘導(dǎo)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡[J];中國病理生理雜志;2013年04期

8 袁葛;趙繼宗;劉巍;;端粒酶反義基因?qū)盒阅z質(zhì)瘤細(xì)胞生長的作用[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

9 史德剛;范鈺;朱夫;張積仁;;靶向survivin基因RNAi沉默表達(dá)對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年06期

10 劉猛,劉玉光,吳承遠(yuǎn);惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞缺氧反應(yīng)研究概況[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2005年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前2條

1 盧慧敏;;低氧誘導(dǎo)因子-1α對(duì)惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化的影響及機(jī)制(英文)[A];全國第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 韓磊;岳曉;張安玲;楊e，

本文編號(hào)：1797580