本文選題：骨肉瘤 + 微小RNA-��； 參考：《山東醫(yī)藥》2017年48期

【摘要】：目的探討微小RNA-432(miR-432)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及其作用機(jī)制。方法采用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)人骨肉瘤細(xì)胞MG-63、人成骨細(xì)胞h FOB1.19中miR-432表達(dá)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期MG-63細(xì)胞隨機(jī)分為三組,分別轉(zhuǎn)染miRNA對(duì)照質(zhì)粒(miR-NC組)、miR-432抑制質(zhì)粒(miR-432 inhibitor組)及miR-432過(guò)表達(dá)質(zhì)粒(miR-432組),轉(zhuǎn)染48 h時(shí)進(jìn)行接種培養(yǎng),分別檢測(cè)細(xì)胞增殖(吸光度值)、遷移和侵襲情況。利用miRWalk和miRanda生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)miR-432靶基因可能為致癌基因CX3CL1,分別構(gòu)建含有miR-432結(jié)合位點(diǎn)的CX3CL1基因3'-UTR區(qū)野生型(CX3CL1-wt)和突變型(CX3CL1-mut)熒光素酶報(bào)告載體。將MG-63細(xì)胞分別共轉(zhuǎn)染CX3CL1-wt或CX3CL1-mut報(bào)告載體和miR-432載體(觀察組),并設(shè)置共轉(zhuǎn)染miR-NC載體作為對(duì)照組。轉(zhuǎn)染48 h時(shí),采用雙熒光素酶試劑盒檢測(cè)相對(duì)熒光素酶活性。結(jié)果 MG-63細(xì)胞中miR-432相對(duì)表達(dá)量低于h FOB1.19細(xì)胞(P0.01)。miR-NC組、miR-432 inhibitor組、miR-432組細(xì)胞中miR-432相對(duì)表達(dá)量分別為1.00±0.01、0.47±0.03、3.62±0.03,組間比較P均0.01。miR-432組培養(yǎng)24、36、48 h的細(xì)胞吸光度值均明顯低于miR-NC組、miR-432 inhibitor組,miR-432 inhibitor組均明顯高于miR-NC組。miR-432 inhibitor組及miR-432組細(xì)胞相對(duì)遷移率分別為(122±7)%、(65±4)%,相對(duì)侵襲率分別為(189±25)%、(49±11)%;上述指標(biāo)組間比較P均0.05。CX3CL1-wt和miR-432共轉(zhuǎn)染MG-63細(xì)胞后,觀察組相對(duì)熒光素酶活性低于對(duì)照組(P0.05);CX3CL1-mut和miR-432共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,對(duì)照組和觀察組相對(duì)熒光素酶活性分別為1.00±0.11、0.93±0.13,兩組比較P0.05。結(jié)論 miR-432過(guò)表達(dá)可抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,靶向調(diào)控致癌基因CX3CL1可能是其作用機(jī)制。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of microRNA-432miR-432) on proliferation, migration and invasion of osteosarcoma cells and its mechanism.Methods qRT-PCR technique was used to detect the expression of miR-432 in human osteosarcoma cell line MG-63 and human osteoblast h FOB1.19.The MG-63 cells in logarithmic growth phase were randomly divided into three groups. They were transfected with miRNA control plasmid / miR-NC group and miR-432 overexpression plasmid / mmiR-432 inhibitor group respectively. The cells were inoculated and cultured at 48 h after transfection.Cell proliferation (absorbance value), migration and invasion were measured.MiRWalk and miRanda bioinformatics software were used to predict that the miR-432 target gene might be the oncogene CX3CL1. The luciferase report vectors of CX3CL1 gene 3'-UTR region CX3CL1-wtand mutant CX3CL1-mutase containing miR-432 binding sites were constructed, respectively.MG-63 cells were cotransfected into CX3CL1-wt or CX3CL1-mut report vector and miR-432 vector respectively (observation group), and cotransfected miR-NC vector was set as control group.The relative luciferase activity was detected by double luciferase kit at 48 h after transfection.Results the relative expression of miR-432 in MG-63 cells was lower than that in h FOB1.19 cells (P 0.01). The relative expression of miR-432 in miR-432 inhibitor group was 1. 00 鹵0. 01 鹵0. 01 鹵0. 03 鹵3. 62 鹵0. 03 respectively. The absorbance of miR-432 in P 0.01.miR-432 group was significantly lower than that in miR-NC group after 24 ~ 36 48 h culture.The relative mobility of the cells in the miR-NC group was significantly higher than that in the miR-NC group. The relative mobility of the cells in the inhibitor group and the miR-432 group were 122 鹵7 and 65 鹵4, respectively, and the relative invasion rates were 189 鹵25 and 49 鹵11. The P 0.05.CX3CL1-wt and miR-432 cotransfected MG-63 cells were compared between the two groups.The activity of relative luciferase in the observation group was lower than that in the control group (P 0.05), CX3CL1-mut and miR-432 cotransfected cells. The relative luciferase activity in the control group and the observation group was 1.00 鹵0.110.93 鹵0.13, respectively, compared with that in the two groups (P 0.05).Conclusion overexpression of miR-432 can inhibit proliferation, migration and invasion of osteosarcoma cells, and target regulation of oncogene CX3CL1 may be its mechanism.
【作者單位】： 濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院;
【分類號(hào)】：R738.1

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9 朱U，

本文編號(hào)：1766393