發(fā)布時間：2018-04-16 09:38

  本文選題：參芪扶正注射液 + 干擾素-α��； 參考：《北京中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文

【摘要】：原發(fā)性肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是目前世界上最常見的,而且是惡性程度最高的惡性腫瘤之一,位居全球惡性腫瘤死因的第3位。由于較高的乙型肝炎感染率,我國是肝癌的高發(fā)國家,每年至少30萬人死于肝癌,占全世界肝癌死亡人數的半數以上,是我國第二位癌癥殺手。近年世界各地肝癌的發(fā)病率有上升的趨勢。經過幾十年努力,肝癌的臨床與基礎研究均取得了一定進展,但肝癌的總體預后并沒有得到顯著的改善,其5年生存率僅為3%-5%。手術仍是目前治療肝癌最有效的方法,但肝癌手術后總復發(fā)率高達50%-100%,術后高轉移復發(fā)率已成為進一步提高遠期療效的瓶頸,也是攻克肝癌的關鍵。因此,尋找臨床切實可用的措施來減少肝癌術后復發(fā)轉移尤為必要。IFN-α具有抗病毒感染、調節(jié)免疫功能、抑制細胞增殖、抗腫瘤新生血管形成等生物學作用,現已被廣泛應用到肝癌等惡性腫瘤的治療研究中。研究顯示大劑量長期使用IFN-α可抑制裸鼠體內肝癌細胞的增殖及侵襲性。目前,IFN-α已成為臨床預防肝癌術后復發(fā)的常規(guī)治療方案之一。但是由于部分肝癌患者不能耐受長期大量使用IFN-α所帶來的不適及副作用,限制了其在臨床上的廣泛應用,而且臨床隨機分組研究發(fā)現肝癌切除術后給予IFN-α治療雖可延長患者的生存,推遲復發(fā),但與對照組相比復發(fā)率并未降低,部分患者在停藥一段時間后再次使用IFN-α療效不佳。究其原因是長期使用IFN-α后肝癌對其產生耐藥性。因此明確肝癌對IFN-α產生耐藥性的原因,并據此采取有效的針對性措施,將有助于提高IFN-α的療效,降低IFN-α的使用劑量及副作用,降低術后復發(fā)轉移率,對于提高肝癌患者的預后具有十分重要的意義。我們研究發(fā)現益氣扶正法的代表藥物參芪扶正注射液可有效抑制肝癌的生長轉移,并證實其可顯著增強肝癌組織內STAT1表達,鑒于STAT1的高表達是降低IFN-a耐藥性的關鍵,我們推測參芪扶正注射液可有效減少肝癌對IFN-a的耐藥性。本研究通過建立具有肺轉移潛能的人肝癌細胞株MHCC97L及其裸鼠肝癌模型,采用MTT、Transwell、ELISA、熒光定量PCR、Western Blot、免疫組化、寡核苷酸芯片及RNA干擾等技術,系統(tǒng)研究參芪扶正注射液協同IFN-a抑制肝癌生長轉移及復發(fā)的作用,揭示參芪扶正注射液對JAK/STAT信號通路的影響,闡明參芪扶正注射液降低IFN-a耐藥性的機制,為臨床聯合使用參芪扶正注射液和IFN-a防治肝癌術后復發(fā)轉移提供理論依據。研究目的:1.觀察參芪扶正注射液協同IFN-α抑制肝癌細胞MHCC97L增殖及侵襲的作用;2.構建STAT1基因"沉默"的肝癌細胞MHCC97L瘤株,并驗證其STAT1基因表達抑制效果;3.在STAT1基因"沉默"的MHCC97L瘤株上檢驗其侵襲性及增殖能力,從而驗證參芪扶正注射液協同IFN-α抑制肝癌細胞的機制。研究方法:1.觀察參芪扶正注射液協同IFN-α抑制肝癌細胞MHCC97L增殖及侵襲的作用;1.1通過MTT實驗研究參芪扶正注射液協同IFN-α對MHCC97L瘤株增殖作用的影響培養(yǎng)復旦大學肝癌研究所建立的具有肺轉移潛能的人肝癌細胞株MHCC97L,通過細胞增殖實驗(MTT)檢測小劑量參芪扶正注射液及IFN-α單獨或聯合使用對MHCC97L細胞增殖的影響;1.2通過體外侵襲實驗實驗研究參芪扶正注射液協同IFN-α對MHCC97L瘤株侵襲性的影響通過體外侵襲實驗(Transwell)檢測參芪扶正注射液及IFN-α單獨或聯合使用對MHCC97L細胞侵襲性的影響Western Blot/RT-PCR實驗檢測參芪扶正注射液及IFN-α單獨或聯合使用對MHCC97L細胞STAT1表達的影響。2.構建STAT1基因"沉默"的肝癌細胞MHCC97L瘤株,并驗證其STAT1基因表達抑制效果:收集前一實驗獲取的腫瘤細胞(大劑量IFN-α單獨治療組及參芪扶正注射液和IFN-α聯合治療組肝癌細胞);用SuperArrαy公司JAK/STAT信號通路寡核苷酸芯片篩選上述肝癌組織差異表達基因(該芯片包含所有已知的JAK/STAT家族成員、激活JAK/STAT信號通路的受體、STAT蛋白相關的核輔助因子及共同活化因子、STAT誘導蛋白及負反饋調節(jié)蛋白);Western Blot及熒光定量PCR技術從蛋白質及mRNA水平驗證寡核苷酸芯片篩選出的差異表達基因。3.在STAT1基因"沉默"的MHCC97L瘤株上檢驗其侵襲性及增殖能力:3.1通過MTT實驗研究參芪扶正注射液協同IFN-α對MHCC97L瘤株增殖作用的影響:培養(yǎng)STAT1基因"沉默"的MHCC97L瘤株,通過細胞增殖實驗(MTT)檢測小劑量參芪扶正注射液及IFN-α單獨或聯合使用對STAT1基因"沉默"的MHCC97L細胞增殖的影響;3.2通過體外侵襲實驗實驗研究參芪扶正注射液協同IFN-α對STAT1基因"沉默"的MHCC97L瘤株侵襲性的影響;通過體外侵襲實驗(Transwell)檢測參芪扶正注射液及IFN-α單獨或聯合使用對STAT1基因"沉默"的MHCC97L細胞侵襲性的影響。研究結果:MTT實驗發(fā)現:與單獨使用IFN-α比較,參芪扶正注射液聯合IFN-α可顯著增強對人肝癌MHCC97-L的抑制作用;Transwell實驗發(fā)現:參芪扶正注射液聯合小劑量 IFN-α 組 MHCC97L 細胞遷移個數(17.67±1.53)與小劑量 IFN-α 組(27.67±3.06)細胞遷移個數相比較顯著降低;RT-PCR實驗結果顯示:參芪扶正注射液組的MHCC97L細胞STAT1 mRNA的表達量明顯高于NaCl陰性對照組,說明0.5g/L的參芪扶正注射液可以有效上調肝癌細胞MHCC97L的STAT1 mRNA表達。而IFN-α組與陰性對照組相比較無顯著性差異;Western blot實驗結果顯示:參芪扶正注射液組的MHCC97L細胞STAT1蛋白質的表達量明顯高于NaCl陰性對照組,說明0.5g/L的參芪扶正注射液可以有效上調肝癌細胞MHCC97L的STAT1蛋白質表達。而IFN-α組與陰性對照組相比較無顯著性差異;通過RNAi有效實現了 MHCC97L的STAT1基因過表達,并成功構建了 STAT1基因RNAi病毒載體質粒,經慢病毒載體轉染人肝癌細胞MHCC97L后,STAT1基因在mRNA水平及蛋白質水平出現了明顯抑制;參芪扶正注射液聯合IFN-α對STAT1基因"沉默"后的MHCC97L細胞株的抑制作用與陰性對照組(P0.05)和IFN-α組(P0.05)相比較無顯著性差異;通過Transwell實驗,結果顯示STAT1基因"沉默"后,參芪扶正注射液聯合小劑量IFN-α組中MHCC97L細胞的遷移個數(28.00±2.00)與小劑量IFN-α組(28.33±4.04)相比無顯著性差異。結論:參芪扶正注射液在治療肝細胞癌的過程中,可以通過提高STAT1的基因表達,達到針對IFN-α的增效作用。
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【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前7條

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1 樊志偉;參芪扶正注射液聯合干擾素-α治療中晚期原發(fā)性肝癌的臨床及實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2012年

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本文編號：1758368