本文選題：腎癌 + microRNA-137(miR-137)　； 參考：《吉林大學》2016年博士論文

【摘要】：目的:腎癌全稱腎細胞癌或腎腺癌(Renal cell carcinoma,RCC),是一種致死性較強的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤。盡管RCC診斷治療水平已經取得巨大進步,但晚期腎癌患者的預后不佳,主要是由于腎癌容易發(fā)生轉移和復發(fā),因此研究腎癌病理機制有助于腎癌的診斷與治療。MicroRNA(miRNA)是由19-25個核苷酸組成的一組小片段非編碼RNA,參與癌癥的發(fā)生和轉移過程。miR-137是一種能參與多種癌癥發(fā)生發(fā)展的重要的miRNA,但是miR-137在腎癌中的生物功能及其潛在的分子機制仍然不清楚。因此本研究的目的是分析miR-137在腎癌細胞中的表達情況及相關的生物學作用,同時對其可能的分子機制進行初步探討,為確立以miR-137為靶點的診斷及治療方案提供參考。方法:本實驗通過實時定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)比較miR-137在腎癌細胞系和腫瘤組織中的表達情況,同時分析miR-137的表達與患者年齡、性別、癌癥分期、腫瘤大小、是否發(fā)生轉移等臨床指標之間的關系。為深入研究miR-137在腎癌細胞中的生物學作用,將miR-137-mimic轉化入786-O細胞中,通過RT-qPCR對轉化效率進行驗證;通過MTT實驗對細胞活性進行測定;通過流式細胞術分析過表達miR-137對786-O細胞凋亡和細胞周期的影響;應用Transwell侵襲及遷移試驗、細胞劃痕實驗進行評價miR-137對786-O細胞的侵襲和遷移能力;采用小鼠荷瘤實驗研究過表達miR-137對小鼠腫瘤的生長的影響;為了研究其相關的分子機制,通過在線軟件Target Scan和miRandasearch預測miR-137的潛在靶基因,通過RT-qPCR、western blot、熒光素表達技術、RNA干擾(RNA interference,RNAi)研究miR-137的靶基因作用。結果:為了研究miR-137的表達與腎癌病情發(fā)展的相互關系,我們采用RT-qPCR對miR-137的表達水平進行了檢測。腫瘤細胞及組織中miR-137的表達水平顯著低于正常細胞及組織。尤其在腎癌組織中miR-137的表達水平與癌旁組織相比降低了約78%。miR-137的表達與患者腫瘤大小、癌細胞轉移能力呈負相關。為進一步驗證miR-137的生物學作用,將miR-137 mimic轉染于786-O細胞中,用RT-qPCR對miR-137的表達進行了確認。MTT法測定細胞活力顯示miR-137mimic組腎癌細胞活力顯著低于陰性對照組和空白對照組(P0.05)。流式細胞儀檢測結果顯示過表達miR-137可以將786-O細胞阻遏在G0/G1期從而使得處于S期的細胞比例顯著降低。同時,過表達miR-137能顯著增加腎癌細胞凋亡比例,降低腎癌細胞侵襲和遷移的能力。體內實驗顯示過表達miR-137可以有效抑制小鼠腫瘤的生長。我們采用Target Scan和miRandasearch對miR-137的靶基因進行了預測。結果顯示:miR-137可與PIK3R3基因的3'-UTR進行結合。熒光素報告系統(tǒng)結果證實PIK3R3為miR-137的直接受體。此外,我們通過RT-qPCR和western blot研究發(fā)現(xiàn)過表達miR-137可以顯著降低PIK3R3轉錄和翻譯水平。此外本實驗還采用si-PIK3R3對該基因進行了沉默,研究發(fā)現(xiàn)PIK3R3基因的沉默可以有效抑制癌細胞侵襲和遷移的作用,與過表達miR-137有相同的功效。最后,我們發(fā)現(xiàn)相對于鄰近的正常組織,PIK3R3在腎癌組織中的表達明顯上調,相關性分析表明miR-137在腎癌組織中與PIK3R3表達水平負相關。這些結論表明miR-137抑制癌細胞侵襲和遷移的能力在一定程度上依賴對PIK3R3基因表達的抑制。結論:在腎癌細胞及組織中miR-137的表達水平顯著低于正常細胞,miR-137的低表達與腫瘤大小、TNM分期和是否發(fā)生轉移相關。同時我們的研究也表明過表達miR-137可以在體外有效抑制腎癌細胞的增殖、侵襲及遷移能力,在體內抑制腫瘤增長。PIK3R3被證明作為miR-137的靶點,抑制該基因表達能夠抑制腎癌細胞的侵襲及遷移能力,過表達該基因能夠反轉miR-137對腎癌細胞侵襲及遷移抑制作用。這些研究表明對于腎癌治療miR-137是一個有潛力的治療靶標。
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【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11

【參考文獻】

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本文編號：1748576