本文選題：自噬　切入點(diǎn)：凋亡　出處：《河南大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的探討不同濃度的左氧氟沙星醛縮對(duì)甲氧苯乙酮(6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(2-甲基亞乙氧基)-1,4-二氫-4-氧-3-(4-甲氧基苯乙烯基)喹啉)(HGQ5)誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬,并分析凋亡與自噬的關(guān)系及作用機(jī)制。方法用不同濃度的HGQ5處理SMMC-7721細(xì)胞,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法,檢測(cè)HGQ5對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)、檢測(cè)氯喹(CQ)在12 h和48h時(shí)對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的影響、檢測(cè)HGQ5和HGQ5聯(lián)合氯喹處理SMMC-7721細(xì)胞48h對(duì)細(xì)胞的影響;用DAPI染色法觀察SMMC-7721細(xì)胞凋亡形態(tài)變化;TUNEL法測(cè)定HGQ5和HGQ5聯(lián)合氯喹后細(xì)胞凋亡率;間接免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞LC3和p62蛋白的變化;蛋白質(zhì)印跡技術(shù)檢測(cè)HGQ5作用于SMMC-7721細(xì)胞后p62表達(dá)量、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ表達(dá)量與比值的變化;用自噬抑制劑CQ聯(lián)合HGQ5探討p62表達(dá)量、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ表達(dá)量與比值的變化。結(jié)果HGQ5濃度分別為1.25μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L和10μmol/L,處理SMMC-7721細(xì)胞24 h,與0μmol/L HGQ5濃度組比較,細(xì)胞凋亡率分別為30.06%(P0.05)、39.12%(P0.01)、51.71%(P0.05)和65.22%(P0.01),細(xì)胞半數(shù)致死率(IC50)值為5.0μmol/L,并且HGQ5在不同濃度作用細(xì)胞48h和72h細(xì)胞IC50值分別為4.5μmol/L和4.48μmol/L,說(shuō)明處理細(xì)胞在不同時(shí)間和不同濃度HGQ5均可顯著抑制SMMC-7721細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖,生存率呈濃度依賴關(guān)系。氯喹處理細(xì)胞12 h和48 h在6.25μmol/L濃度時(shí),與對(duì)照組0μmol/L氯喹相比,差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)、HGQ5聯(lián)合氯喹處理SMMC-7721細(xì)胞48 h后,在低劑量(0.3125-2.5μmol/L)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率高于單獨(dú)HGQ5組,在高劑量(5.0-10μmol/L)則相反;DAPI染細(xì)胞核,隨HGQ5濃度增加可見典型細(xì)胞凋亡特征性如細(xì)胞固縮,核染色質(zhì)聚集或斷裂,形成凋亡小體;TUNEL檢測(cè)顯示單獨(dú)使用HGQ5細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),HGQ5可顯著誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡,TUNEL檢測(cè)HGQ5聯(lián)合CQ后細(xì)胞凋亡率,HGQ5(1.25μmol/L)聯(lián)合氯喹組細(xì)胞凋亡率高于HGQ5單獨(dú)處理組,HGQ5(5.0μmol/L)聯(lián)合氯喹組的細(xì)胞凋亡率低于HGQ5單獨(dú)處理組(P0.05),說(shuō)明HGQ5誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡與自噬相關(guān)。間接免疫熒光觀察HGQ5誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞自噬,自噬標(biāo)志物L(fēng)C3在細(xì)胞核附近密度增高;Western-Blot結(jié)果顯示,相同濃度(5.0μmol/L)不同時(shí)間處理SMMC-7721細(xì)胞時(shí),LC3-Ⅱ和p62的表達(dá)量分別在6 h、12 h、24 h和3 h、6 h、12 h時(shí)表達(dá)增高,較0 h對(duì)照組相比,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);HGQ5處理SMMC-7721細(xì)胞不同時(shí)間和濃度p62蛋白表達(dá)呈時(shí)間、濃度依賴性;HGQ5聯(lián)合氯喹處理SMMC-7721細(xì)胞12 h和48 h p62蛋白表達(dá)對(duì)比,48 h時(shí)p62蛋白表達(dá)量高于12 h表達(dá)量(P0.05)。結(jié)論1左氧氟沙星醛縮對(duì)甲氧苯乙酮(HGQ5)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡。2HGQ5對(duì)SMMC-7721細(xì)胞自噬具有誘導(dǎo)作用。3在低劑量HGQ5作用于SMMC-7721細(xì)胞時(shí),自噬過(guò)程對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用,而在高劑量HGQ5作用時(shí),自噬則促進(jìn)HGQ5對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的殺傷作用,且上述作用的機(jī)制與細(xì)胞凋亡有關(guān)。
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本文編號(hào)：1703805